Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ale urmelor de metale pot cauza o schimbare a culorii, incat produsul sa devina nesatisfacator. Exemple
pentru acest caz sunt injectabilele cu clorhidrat de tiamina si cele cu acid ascorbic.
Complexarea este evident ca, in multe cazuri, medicamentele pot contribui la reactii de complexare cu
una sau mai multe din substantele unei forme farmaceutice. Uneori aceste lucruri sunt intentionate
biodisponibilitatea in anumite cazuri poate fi imbunatatita. In alte cazuri, stabilitatea unui medicament este
afectat favorabil de complexare, desi in multe cazuri este afectata nefavorabil.
Agentii de complexare cafeina si pilivinilpirolidona erau cei mai intalniti agenti de complexare folositi in
farmaceutica pentru o mare perioada de timp. Recent, ciclodextrinele au devenit foarte importante.
Ciclodextrinele sunt agenti puternici de complexare, studii numeroase fiind efectuate pe tema folosirii
acestora in solubilizarea si stabilizarea medicamentelor.
Fotoliza un mare accent in Codul de Buna Practica din 1993 este pus pe stabilitatea in prezenta luminii,
desi la acest moment, metodele de testare nu sunt finalizate.
11. Stabilitatea pentru starea de agregare solida
Stabilitatea pentru starea de agregare solida stabilitatea medicamentelor din formele farmaceutice solide
este cea mai importanta, de vreme ce formele farmaceutice solide sunt mai intalnite decat alte forme si
pentru ca primele probe clinice sunt de obicei efectuate asupra acestui tip.
12. Interactiuni ce implica o faza lichida
Uneori, o s.a. sau un produs de descompunere dintr-o forma farmaceutica solida este lichid si poate
interactiona cu alte ingrediente din forma farmaceutica. Un exemplu tipic il constituie cercetarile efectuate
de Troup si Mitchner (1964) ce implica aspirina si fenilefrina. Autorii au aratat ca descompunerea
fenilefrinei este direct proportionala cu formarea acidului salicilic. Acestia au aratat ca descompunerea
fenilefrinei este o reactie de acetilare. Acest lucru poate fi privit din mai multe perspective. Trebuie sa
existe umiditate pentru ca hidroliza aspirinei sa aiba loc. Daca acidul saliclic este format prin interactiunea
aspirinei cu urme de apa, atunci acidul acetic forma poate reactiona cu fenilefrina (R(OH)3), care pune din
nou in libertate apa, astfel incat umiditatea nu joaca un rol cantitativ in reactia globala. Cu alte cuvinte:
C6C4(OCOCH3) +H 2O -> C6H4(OH)COOH + CH3COOH;
CH3COOH + 1/3R(OH)3 -> 1/3 R(OCOCH3)3 + H2O
C6H4
13. Reactii prin intermediul fazei gazoase
Cateodata presiunea de vapori a unui medicament este suficient de ridicata, incat poate interactiona cu alte
substante prin intermediul fazei de vapori. Un astfel de exemplu este ibuprofenul (B). Acesta este un acid
Lewis si poate interactiona cu bazele Lewis. Masurile uzuale, cum ar fi comprimatele tristratificate, nu
functioneaza in acest caz, de vreme ce reactantul va fi prezent in faza gazoasa.
Daca reactia cu alt medicament (D) este: D+B->descompunere, atunci viteza reactiei initiale este data de
d{D}/dt=-kPB[D]a
Unde {D} este densitatea de suprafata a D molecule (nr de molecule pe cm patrat) la momentul t, iar A este
aria suprafetei.
Dizolvarea importanta dizolvarii este a.i. (din consideratii biofarmaceutice) sunt folosite Farm. SUA si e
necesara pentru aplicarea pentru Noile Medicamente ale formelor farmaceutice soide. Potrivit cercetarilor
efectuate de Noyes si Whitney :
dm/dt= VdC/dt = - kA(S-C)
Unde m este masa nedizolvata, V este volumul de lichid, t este timpul, k este asa n umita viteza constanta
de dizolvare intrinseca (cm/s) si A este aria suprafetei solidului dizolvat.
Exista o serie de notiuni teoretice general valabile referitoare la procesele de separare cromatografica,
notiuni care se pot transforma sau adapta tuturor metodelor cromatografice;
Daca se analizeaza un amestec de analiti (diferit) care trebuie sa fie separati (acesta fiind scopul principal al
cromatografiei) indiferent de tehnica aleasa, metodele au urmatoarele aspecte comune:
a. Analitii din amestec se repartizeaza intre faza stationara si faza mobila care sunt nemiscibile (sau foarte
putin solubile una in alta), intre cantitatile de analiti repartizati in cele doua faze unde exista un
echilibru ce depinde de insusirile fiecarui analit fata de cele 2 faze;
b. Adaugand continuu faza mobila noua sau proaspata are loc deplasarea echilibrului de repartitie
antrenand migrarea analitilor de-a lungul fazei stationare cu viteze diferite;
c. Separarea consta in eluarea continua a analitilor care, migrand cu viteza caracteristica fiecaruia,
parasesc succesiv coloana.
Este formata din particule fine solide, sferice, pe suprafata carora se produc interactiunile cu analitii (ex: in
cromatografia de adsorbtie);
Este formata din particule fine solide care sunt suportul pe care se fixeaza faza stationara lichida ca in
cromatografia de repartitie;
In coloanele capilare utilizata in cromatografia de gaze, faza stationara este fixata in stare omogena sub
forma unui film sau pelicula pe peretii interiori ai acesteia.
Particulele de faza stationara se caracterizeaza prin cativa parametri printre care diametrul lor mediu,
omogenitatea marimilor si suprafata specifica.
Este cea mai utilizata dintre tehnicile cromatografice in faza lichida si se poate practica sub forma
cromatografiei HPLC lichid-lichid si HPLC lichid-faza grefata sau legata;
In HPLC de repartitie se disting 2 procedee, in functie de polaritatea fazelor stationara si mobila:
1. Cromatografia pe faza stationara normala f polara; ca faza mobila se utilizeaza un solvent practic
nepolar sau foarte slab polar;
2. Cromatografia pe faza inversa in care faza stationara este nepolara iar faza mobila este relativ polara.
Regula de alegere a fazei mobile pt cromatografia de repartitie este urmatoarea:
Faza mobila trebuie sa aiba o putere mare de dizolvare dar sa nu interactioneze clinic cu analitii din probe
(sa fie inerta fata de acestia); trebuie sa fie compatibila cu sistemul de detectie;
Sa nu dizolve faza stationara si sa nu interactioneze chimic cu aceasta (sa fie inerta chimic fata de ea);
In cromatografia pe faza inversa, faza stationara este nepolara iar faza mobila este polara, fiind formata din
apa, metanol, acetonitril sau din amestecuri in diferite proportii ale acestora.
CSS este o metoda fizico-chimica de separare a substantelor dintr-un amestec, pe baza capacitatii deosebite
de distributie intre o faza stationara si una mobila;
Metoda cromatografica se bazeaza pe un proces de migrare dinamica diferentiala a substantelor din
amestecul respectiv, ca urmare a unor diferente in adsorbtie, repartitie, solubilitate, presiune de vapori,
marimea moleculei etc.
Principiul CSS
Un analit migreaza in susul sau de-a latul unui strat de faza stationara, de obicei silicagel, sub influenta
unei faze mobile (de obicei un amestec de solventi organici) care se deplaseaza prin faza stationara prin
efect capilar;
Distanta parcursa de un analit este determinata de afinitatea sa relativa, pentru faza stationara vs faza
mobila;
Compusii amestecului sunt repartizati intre un adsorbant (faza stationara de obicei silicagel SiO 2) si un
solvent (faza mobila) care se deplaseaza prin faza stationara in efect capilar.
28. Importanta CSS in Analiza medicamentului
Determinarea impuritatilor in produsele farmaceutice din materiile prime sau produse preparate;
Folosita adesea ca metoda de baza pentru verificarea materiilor prime farmaceutice;
Poate fi folosita pentru validarea curatirii, o treapta in fabricarea produselor farmaceutice.
29. Analiza calitativa in CSS
Principala metoda de identificare prin CSS consta in localizarea zonelor diferitilor componenti separat si
prin masurarea valorilor Rf corespunzatoare Rf (retardation factor); acesta se calculeaza altfel:
Distanta parcursa de componentul dat supra distanta parcursa de frontul solventului;
Tot in scopul realizarii analizei calitative, se poate realiza si cromatografia bidimensionala; placa se
vizualizeaza si se compara cu o placa etalon pe care exista un amestec similar, dar cunoscut.
Teste calitative de identitate
CSS se foloseste adesea de monografiile BP ca parte a unui numar de teste de indentitate efectuate pe
substante pure. Pentru confirmarea suplimentara a identitatii se folosesc mai multe sisteme de solventi si,
de asemeni, diferite tipuri de reactivi spray.
HPLC este o metoda fizico-chimica de separare cromatografica in care faza mobila este un lichid iar faza
stationara, continuta intr-o coloana, este constituita dintr-un solid cu granulatie fina sau un solid impregnat
cu un lichid sau un solid pe care sunt grefate grupari organice.
HPLC este o metoda ce prezinta urmatoarele avantaje:
Usor de controlat cu o precizie cantitativa asigurata prin introducerea exacta a probei;
HPLC este tehnica cromatografica ce a cunoscut cea mai puternica dezvoltare in anii recenti, ducand la
imbunatatirea coloanelor, a detectorilor si a soft-urilor de control;
Varietatea coloanelor si a detectorilor face ca selectivitatea metodei sa poata fi usor ajustata.
Picurile cromatografice acestea sunt semnalele valorificabile in analiza calitativa si cantitativa, in toate
metodele cromatografice.
Timpul mort, tM este timpul in care un component, complet neretinut de catre faza stationara, parcurge
coloana si tuburile de legatura pana la detector.
Timpul de retentie, tR o marime caracteristica pentru fiecare component al amestecului separat de
coloana reprezinta timpul scurt de la injectarea probei si aparitia maximului de concentratie in detector.
Volumul de retentie, VR este volumul de eluent corespunzator timpului de retentie;
Timpul de retentie ajustat tR introdus in cromatografie pentru a se putea compara timpii masurati pe
coloane diferite;
Volum de retentie ajustat reprezinta volumul golurilor din coloana plus volumul tuburilor de legatura de
la coloana la detector.
Unele dintre cele mai dificile si frustrante probeleme in domeniul analizei medicamentului sunt de separare
simultana, identificare si, mai presus de toate, analiza cantitativa a uneia sau mai multor substante dintr-un
amestec complex al unui produs farmaceutic.
Cresterea exponentiala a cromatografiei de gaze poate fi atribuita potentialului incomparabil de a solutiona
problema separarii componentelor dintr-un amestec complex.
o Definitie (FRX)
Cromatografia de gaze este o metoda fizico-chimica de separare cromatografica, in care faza mobila este
un gaz (gaz purtator), iar faza stationara este un solid sau un lichid cu care este impregnat un suport solid
inert sau un lichid repartizat uniform pe peretii unei coloane capilare;
Faza stationara se afla intr-o coloana cromatografica, confectionata, de obicei, din sticla sau din otel
inoxidabil;
Faza mobila se deplaseaza continuu printr-o coloana, iar la iesire gazul purtator trece prin detector.
Consta in distributia inegala a componentelor unui amestec intre faza mobila si faza stationara;
Amestecul strabate sistemul cromatografic, fiind antrenat de catre faza mobila.
36. Principalele etape in cromatografia de gaze
Prepararea probei -> injectarea in coloana -> separarea componentilor -> detectarea componentilor ->
identificare si masurare
Introducerea probelor lichide in coloana cromatografica prin evaporare.
Introducerea probelor solide in coloana cromatografica sunt introduse in coloana prin injectare cu
microseringi dupa ce au fost dizolvate intr-un solvent adecvat.
37. Cromatograma si parametrii specifici ai acesteia in GC
Cromatograma reprezentarea grafica a semnaului detectorilor in functie de timp, obtinuta cu ajutorul
inregistratorului, se numeste cromatograma.
Parametrii specifici
Timp de retentie, tR este timpul la care apare maximul unui pic, masurat din momentul introducerii probei
si constituie caracteristica calitativa a componentului respectiv;
Inaltimea picului, h, sau aria suprafetei lui, A, constituie parametrul cantitativ, proportional cu cantitatea de
component;
tM este timpul in care elentul si componentele care nu interactioneaza cu faza stationara parcurg distanta
pana la detector.
fixarea spectrometrului de masa la o anumita valoare m/z caracteristica doar pentru o anumita
componenta care ne intereseaza, el functionand in acest caz ca un detector foarte specific.
Parcurgerea (scanarea) intregului domeniu de masa intr-un interval de timp redus, ceea ce inseamna ca
se obtin sute sau chiar mii de spectre pentru fiecare analiza. Toate aceste spectre sunt stocate in
memoria calculatorului atasat instrumentului.
Exista un interes din ce in ce mai mare in ceea ce priveste impuritatile prezente in medicamente (API
substante active). In ultimul timp, nu numai profilul puritatii, dar si profilul impuritatii a devenit
esential dupa cum reglementarile in vigoare o specifica. In lumea farmaceutica, o impuritate este
considerate ca orice alt material organic, pe langa s.a. sau excipienti ce apare in urma sintezei sau din
substante chimice nedorite care raman cu API (active pharmaceutical impurities).
Impurificarea poate fi dezvoltata atat in timpul formularii cat si dupa expirarea timpului de valabilitate
atat a substantelor folosite dar si a preparatelor formulate.
Prezenta acestor substante chimice nedorite, chiar si in cantitate mica, poate influenta eficacitatea si
siguranta produselor farmaceutice. Profilul impurificarii (de exemplu, identificarea, precum si
cantitatea de impuritati din produsele farmaceutice), a castigat in ultimul timp atentia din partea
autoritatilor de reglementare.
Diferite farmacopei, cum ar fi farmacopeea britanica, sau farmacopeea SUA, indiana precizeaza
limitele, nivelurile admisibile de impuritati prezente in substantele utilizate sau preparatele formulate.
Impurificarea poate fi evitata doar daca fiecare etapa este realizata cu grija, evitandu-se sinteza prin
realizarea mai multor etape odata; in cazul paracetamolului brut exista un test de limitare pentru paminofenol care poate fi un materiale de pronire in unele cazuri sau un intermediar in altele.
In chimia organica de sinteza, este foarte rar atins randamentul de 100% in obtinerea unui produs final
singur; in obtinerea unui produs final singur exista intotdeauna o sansa de a avea produsi secundari.
Spre exemplu, in cazul producerii paracetamolului brut se poate forma ca produs secundar paracetamol
diacetilat.
Impuritatile pot fi de asemenea rezultate prin degradarea produsului final in procesul de fabricatie a
medicamentelor. Degradarea penicilinei si a cefalosporinelor sunt exemple bine cunoscute ale
produselor de degradare. Prezenta unui inel beta-lactamic, precum si a unei grupari amino la C6-C7
joaca un rol critic in degradarea lor.
Aceste impuritati poseda adesea efecte nedorite farmacologic sau toxicologic, dar pot avea si beneficii
care la administrarea lor pot compensa. Compozitia impuritatilor ne permite sa tragem concluzii in ceea
ce priveste procesul de fabricatie a produselor si falsificarea acestora care este din ce in ce mai
raspandita in toate tarile din lume, prin urmare, este necesar a controla cu strictete calitatea produselor
farmaceutice si a determina concentratia de impuritati in toate etapele productiei, de la materiile prime
la produsul finit.
10
Exista un interes din ce in ce mai mare in ceea ce priveste impuritatile prezente in medicamente (API
substante active). In ultimul timp, nu numai profilul puritatii, dar si profilul impuritatii a devenit
esential dupa cum reglementarile in vigoare o specifica. In lumea farmaceutica, o impuritate este
considerate ca orice alt material organic, pe langa s.a. sau excipienti ce apare in urma sintezei sau din
substante chimice nedorite care raman cu API (active pharmaceutical impurities).
Impurificarea poate fi dezvoltata atat in timpul formularii cat si dupa expirarea timpului de valabilitate
atat a substantelor folosite dar si a preparatelor formulate.
Prezenta acestor substante chimice nedorite, chiar si in cantitate mica, poate influenta eficacitatea si
siguranta produselor farmaceutice. Profilul impurificarii (de exemplu, identificarea, precum si
cantitatea de impuritati din produsele farmaceutice), a castigat in ultimul timp atentia din partea
autoritatilor de reglementare.
Diferite farmacopei, cum ar fi farmacopeea britanica, sau farmacopeea SUA, indiana precizeaza
limitele, nivelurile admisibile de impuritati prezente in substantele utilizate sau preparatele formulate.
Impurificarea poate fi evitata doar daca fiecare etapa este realizata cu grija, evitandu-se sinteza prin
realizarea mai multor etape odata; in cazul paracetamolului brut exista un test de limitare pentru paminofenol care poate fi un materiale de pronire in unele cazuri sau un intermediar in altele.
In chimia organica de sinteza, este foarte rar atins randamentul de 100% in obtinerea unui produs final
singur; in obtinerea unui produs final singur exista intotdeauna o sansa de a avea produsi secundari.
Spre exemplu, in cazul producerii paracetamolului brut se poate forma ca produs secundar paracetamol
diacetilat.
Impuritatile pot fi de asemenea rezultate prin degradarea produsului final in procesul de fabricatie a
medicamentelor. Degradarea penicilinei si a cefalosporinelor sunt exemple bine cunoscute ale
produselor de degradare. Prezenta unui inel beta-lactamic, precum si a unei grupari amino la C6-C7
joaca un rol critic in degradarea lor.
Aceste impuritati poseda adesea efecte nedorite farmacologic sau toxicologic, dar pot avea si beneficii
care la administrarea lor pot compensa. Compozitia impuritatilor ne permite sa tragem concluzii in ceea
ce priveste procesul de fabricatie a produselor si falsificarea acestora care este din ce in ce mai
raspandita in toate tarile din lume, prin urmare, este necesar a controla cu strictete calitatea produselor
farmaceutice si a determina concentratia de impuritati in toate etapele productiei, de la materiile prime
la produsul finit.
11
12
Activitatea biologica a substantelor chirale de multe ori depinde de stereochimia lor, deoarece
organismul viu este un mediu chiral. Un procent mare de compusi farmaceutici comerciali si experimentali
sunt enantiomeri si multi dintre ei prezinta diferente semnificative de enantio-selectivitate in
farmacocinetica si farmacodinamia lor.
Importanta chiralitatii medicamentelor a fost recunoscuta de mult timp, iar consecinta utilizarii lor
ca racemi sau enantiomeri a fost discutata frecvent in literatura de specialitate. Cu o crestere evidenta a
problemelor legate de stereoselectivitate in actiunea medicamentelor, cromatografia chirala a devenit un
instrument important in analiza lor. Mari eforturi au fost dedicate dezvoltarii unei metodologii mai bune
pentru cromatografia enantioselectiva in ultimele doua decenii.
48. Metode de detectare in cazul impuritatilor
Profilul impurificarii s.m. si formularea medicamentelor incepe cu detectarea impuritatilor.
Metodele cele mai frecvent utilizate pentru aceasta sunt CSS (TLC), HPLC, dar, in cazul materialelor
volatile, stabile termic, gaz cromatografia (GC), joaca, de asemenea, un rol important.
Alte tehnici cromatografice si electroforetice, cum ar fi cromatografia cu fluide supercritice,
electroforeza capilara si electrocromatografia capilara pot fi, de asemenea, utilizate. Spectrostopia de masa
(MS) si rezonanta magnetica nucleara se inalta rezolutie (RMN) pot contribui, de asemenea, la detectarea
impuritatilor.
49. Separarea chirala
Proprietatile stereochimice ale medicamentelor chirale au fost in multe cazuri factorul de control
privind activitatea acestora. Un enantiomer poate avea o functie biologica. Altii pot fi inactivi sau avea o
alta functionalitate care ar putea avea efecte secundare. In unele cazuri, un izomer optic poate fi daunator.
FDA impune producatorilor de medicamente testarea enantiomerilor individuali pentru noile medicamente
pentru a le cunoaste toxicitatea.
Cromatografia chirala reprezinta separarea cromatografica a compusilor enantiomerici. Fazele
lichide stationare comune nu poseda o selectivitate adecvata pentru separarea enantiomerica. Adaosul
macromoleculelor de ciclodextrina derivatizate la fazele fixe comune creeaza coloane capilare care au
capacitatea de a separa numerosi enantiomeri.
50. Domeniul spectral UV-VIS
-
13
Unele spectrofotometre UV-VIS sunt utilizate ca detectori ai mai multor analiti, din amestecuri cu mai
multe componente, dupa prealabila lor separare prin cromatografia de lichide;
Spectrofotometrele UV-VIS disponibile in prezent lucreaza intre 185 si 900 nm. Limita inferioara se
opreste la cca 185 nm datorita aerului care devine opac sub aceasta limita.
14
Efectul batocromic consta in deplasarea benzilor de absorbtie spre lungimi de unda mai mari.
54. Legea fundamentala a absorbtiei
In spectrometria de absorbtie in UV-VIS se masoara de regula absorbanta care este proportionala cu
concentratia analitului, conform legii Lambert-Beer:
A= epsilon X b X c
In care:
A=absorbanta; b=grosimea stratului de solutie (cm); c=concentratia analitului determinat;
epsilon=absorbanta molara.
55. Inregistrarea spectrelor UV-VIS
-
Este una dintre problemele de mare importanta in detectia si dozarea substantelor medicamentoase;
Inregistrarea spectrelor se poate face fie prin reprezentarea grafica a absorbantei in functie de lungimea
de unda fie a transmitantei in functie de lungimea de unda;
Aceasta inregistrare se face automat, datele experimentale fiind inmagazinate in calculator, acesta
avand programe de prelucrare a datelor;
Inregistrarea spectrelor in UV-VIS se face in solutiile analitilor in solventi potriviti, iar alegerea
solventului in fiecare caz este o problema deosebita;
Spectrometria UV se poate utiliza si in studiul unor reactii chimice care se petrec in solutie. De
exemplu, salicilatul de metil sufera in solutie apoasa alcalina o reactie de hidroliza din care rezulta acid
salicilic, iar cu exces de baza salicilatul alcalin corespunzator.
15
Introducere
IR analitic grupeaza metode de identificare si dozare (nedistructive) bazate pe absorbtia sau reflexia de
catre proba a radiatiilor electromagnetice cuprinse intre 0,78 microni (780 nm) si 1000 microni (1 mm)
fiind subdivizat in IR apropiat, IR mijlociu si IR indepartat.
Regiunea fundamentala situata intre 2,5 si 15 microni este regiunea care furnizeaza cele mai multe
informatii privind structura moleculara, majoritatea spectrometrelor fiind limitate la masuratori in aceasta
regiune;
Spectrele de absorbtie in IR sunt spectre de vibratie ale moleculelor. Atomii situati la cele doua extremitati
ale unei legaturi sunt supusi unei miscari de vibratie.
Prin absorbtie de energie legatura chimica isi creste nivelul energetic vibrational. Moleculele probei vor
absorbi energii din radiatia IR numai la anumite lungimi de unda dand nastere in spectrul IR unor maxime
de absorbtie;
La lungimile de unda la care nu se absoarbe energie, inregistratorul spectrometrului va inscrie linia zero a
spectrului;
Maximele de absorbtie in IR se manifesta in spectru ca benzi (si nu ca linii) deoarece orice modificare
energetica vibrationala este insotia, de regula, de modificari energetice rotationale si, din acest motiv,
spectrele in IR se mai numesc si spectre de vibratie rotatie ale moleculelor.
Fiecare maxim spectral este asociat unei vibratii corespunzatoare unei anumite legaturi din molecula
probei, insa trebuie mentionat ca orice vibratie a moleculei de nastere unui maxim de absorbtie intrucat
regulile de selectie fundamentale ale mecanicii cuantice arata ca un maxim apare numai daca vibratia
corespunzatoare produce o modificare a distributiei de sarcina (a marimii sau directiei momentului de
dipol).
In absenta momentului de dipol permanent cum este cazul moleculelor simetrice nu apar benzi de absorbtie
in IR. Legatura din acetilena nesubstituita nu se manifesta in IR. In aceste cazuri se spune ca legatura este
transparenta in IR mediu sau inactiva.
Vibratiile pe care le executa o molecula in ansamblu cu pastrarea imobila a centrului sau de gravitatie se
numesc vibratii normale sau fundamentale.
Cresterea numarului de benzi fata de numarul teoretic se datoreaza:
1) Armonicelor;
2) Benzilor de combinare;
3) Rezonantelor Fermi.
Rezonanta Fermi reprezinta scindarea unei benzi fundamentale atunci cand in imediata ei apropiere se
gaseste o armonica sau o banda de combinare;
Scaderea numarului real de benzi fata de cel teoretic se datoreaza:
1) Vibratiilor care nu produc modificari ale momentului de dipol al moleculei;
2) Vibratiilor degenerate care dau benzi la acelasi numar de unda;
3) Vibratiilor situate in afara domeniului IR uzual.
16
17
Pentru lichide determinarea absorbantei se face in cuve pe parcurs optic mic pentru a minimaliza absorbtia
proprie solventului in cazul in care solventul nu este transparent in acest domeniu.
67. Analiza cantitativa in IR apropiat
Aceasta metoda utilizeaza domeniul spectral situat intre 800 si 2700 nm. Benzile observate in acest
domeniu sunt date nu numai de tranzitiile electronice ci si de benzile de vibratie de tipul armonicelor si
benzilor de combinare;
Benzile armonice sunt mai putin intense decat cele corespunzatoare vibratiilor fundamentale si de aceea se
lucreaza in cuve cu parcursul optic de 1 cm si pe probe nediluate.
Chiar daca metodele de dozare in IR apropiat nu sunt sensibile, intotdeauna ele sunt usor de utilizat.
68. Departamentul de materii prime si produse finite de la ANMDM - rol
-
18
ANM infiintata in 1998, functioneaza ca insitutie de sine statatoare incepand din 1 ianurie 1999;
Este subordonata MS si constituie domeniul politicii statului in privinta controlului medicamentului si a
altor produse de tip uman;
Productia, importul, distributia si utilizarea medicamentelor in Romania sunt admise numai dupa ce au fost
autorizate si inregistrate de ANM;
Autorizarea = eliberarea certificatelor de autorizare (APP) autorizatia de punere pe piata;
Elaboreaza FR si o armonizeaza la cea europeana (RO a aderat la conventia privind EP, ceea ce o inseamna
ca prevederile EP privind standardele de calitate sunt olbigatorii pt toate medicamentele de uz uman sau
veterinar, de import, de fabricatie...
19
20
Sunt definite :
Preparatele chmice;
Modul in care se efectueaza testele clinice sau nonclinice etc
In Romania autoritatea e ANM
1. Principii care stau la baza bunei practici de lab;
2. Organizarea si personalul instalatiei de testare;
3. Programul de asigurare a calitatii;
4. Instalatiile de laborator;
5. Aparatele. Materialele. Reactivii;
6. Sisteme de testare (chimice, biologice);
7. Substante chimice testate (SCT)/referinta (SCR);
8. Metode standard de studii in laborator;
9. Planul de studiu in laborator;
10. Cum se introduce raportul in laborator;
11. Stocarea si pastrarea materiei si arhivei.
21
Un radian, avand simbolul rad, este o unitate de masura pentru masura unghiurilor.
Un radian este egal 180C/pi;
Lungimea unui arc de cerc este egala cu raza inmultita cu masura in radiani a arcului;
Radianul face parte din SI.
Cand un fascicul de lumina monocromatica patrunde dintr-un anumit mediu cu o anumita densitate optica
intr-un alt mediu cu o alta densitate optica, radiatia monocromatica poate suferi 2 fenomene diferite: o
reflexie (se intoarce inapoi sub acelasi unghi unghiul de incidenta i) si o refractie (strabate mediul si se
apropie de normal (unghi de refractie r);
n = sini/sinr viteza luminii in vid/ viteza luminii in substanta de analizat;
n = indicele de refractive;
i = unghiul de incidenta;
r = unghiul de refractie;
Daca i = 90 grade si sini =1 => marimea unghiului de refractive este maxima. Dupa acest principiu este
construit un refractometru.
Reprezinta criteriu de identitate, puritate si poate fi valorificat pentru determinari cantitative;
Indicele de refractive este o caracteristica pentru fiecare substanta;
La o anumita temperatura (20C) si o anumita lungime de unda (589,3 nm); FRX noteaza indicele de
refractive cu nD20.
Indicele de refractie depinde:
De temperatura;
Lungimea de unda;
Presiune;
Natura substantei;
Natura solventului.
22
Care, pentru a putea fi utilizata in volumetrie, trebuie sa indeplineasca mai multe conditii:
Sa fie cantitativa transformarea, practic totala, a partenerilor de reactive (X, Y) in produsi de reactive (U,
V etc);
Reactia sa fie simpla, cu mechanism cunoscut, fara reactii secundare;
Sa aiba viteza mare de reactie;
Evidentierea neta a punctului final de titrare;
In cursul reactiei chimice are loc practic un transfer al unei particule P (ioni, molecule, electroni) intre
analit si titrant:
X -> U + P;
Y + -> V;
X + U - > U + V.
23
Tipuri de titrimetrie
Acido bazica
Redox
Utilizare
Standardizarea
solutiei
de
hidroxid de sodium si de acid
percloric in mediu de acid acetic
glacial;
Standardizarea
solutiei
de
Zinc metalic
Colura de sodiu
Complexometrie
Prin reactii de precipitare
tiosulfat de sodiu
Standardizarea solutiei de EDTA
Standardizarea solutiei de azotat
de argint
Clasificarea metodelor titrimetrice volumetrice se realizeaza dupa mai multe criterii (modul de executie al
titrarilor, reactia chimica, modul de detectie a punctului de echivalenta, natura solventului in care are loc
reactia);
In continuare, tratarea metodelor volumetrice se va face in principal tinand cont de clasificarea in functie
de reactia chimica, intr-o abordare coroborata cu celelalte principii de clasificare, accentuand metodele cu
aplicabilitate in laborator.
se bazeaza pe reactii de neutralizare a acizilor cu baze, respectiv, a bazelor cu acizi din medii apoase;
titrosubstante
-
24
acidul oxalic;
biiodatul de potasiu;
acid benzoic;
carbonatul de sodiu;
boraxul;
iodatul de potasiu.
25
Permite titrarea directa a principiilor active din formele farmaceutice fara sa fie necesara o separare
prealabila.
-
Erori de titrare mai mici datorita tensiunii superficiale scazute a solventilor organici;
Titrarea unor cantitati mai mici de substanta;
Temperatura nu are o influenta majora asupra titrarii;
Dezavantaje:
Solventi organici toxici CI sa se inhaleze mult timp aceste substante;
Toxicitate;
Manualitate trebuie manipulate mai cu grija, experienta;
Cost crescut comparativ cu apa.
Proprietatile acide/bazice ale substantei sunt evidentiate prin dizolvare intr-o baza/acid;
Echilibre in mediul neapos:
Solvent cu proprietati bazice/SM cu caracter acid:
SH + H-A SH2+ + A-;
H-A acidul, SH solvent bazic; SH2+ - solvent solvatat, A- - baza conjugata.
Cresterea bazicitatii solventului va duce la deplasarea echilibrului spre dreapta (disocierea completa a
bazei);
Solvent cu proprietati acide/SM cu caracter bazic
SH + B S- + HB+
SH solvent acid, B baza; S- - anionul solventului, HB+ - acidul conjugat
26
27
Se aleg astfel incat erorile posibile sa fie cat mai reduse -> se va tine seama de:
Mediul de reactie (solvent);
Natura substantei care se dozeaza;
Nuantele prin care trece indicatorul in jurul punctului de echivalenta.
28
Alegerea indicatorului
Solventi acizi (acid acetic glacial, anhidrida acetica, acid propionic)
Cristal violet in acid acetic glacial;
Solventi bazici (DMF, piridina);
Albastru de brom-timol in DMF;
Solventi neutri (acetona, dioxan, benzen);
Galben de metanil in dioxan.
Mecanismele schimbarii culorii indicatorilor
Cristal violet clasa indicatorilor trifenil metanici
Violet H+ - albastru verde H+ galben.
100.
Majoritatea SM (acizi sau baze foarte slabe putin sau insolubile in apa) pot fi titrate (dozate) cu acizi sau
baze relativ tari in solventi neaposi anhidri in care, de obicei, sunt mai solubile;
Titrarea poate fi extinsa si la substantele care in solutii neapoase sunt neutre;
Cel mai important este solventul;
Prin utilizarea corecta a unor amestecuri de solventi neaposi pot fi dozate amestecuri de substante organice
medicamentoase cu polaritati acide sau bazice apropiate;
Metoda poate fi aplicata si la dozarea sm slab acide sau bazice din forme farmaceutice;
Solventii neaposi avand o tensiune superficiala mica, picaturile care se strang din biureta au volum mic ->
erori mici de titrare;
Dozarile in mediu neapos permit titrari la diferite temperaturi cu evidentierea punctului de echivalenta cu
ajutorul indicatorului sau prin metode fizice (potentiometric, voltametric).
101.
29
Schimbul de energie
Proprieti termice:
102.
nclzirea
Topirea
Oxidarea
Descompunerea
Thermomicroscopy
Permite observarea schimbrilor de faz ale unei substane (desolvatarea, topirea) care au loc sub aciunea
unei nclziri programate atunci cnd aceasta este aezat ntre lama i lamela unui microscop
103.
Determinarea puritii
Studiul interaciunilor
30
Intervalul de topire
ntre temperatura la care apar primele picturi de lichid i cea la care au disprut ultimele cristale
Criteriu de identitate
Criteriu de puritate- impuritile scad punctul de topire i lrgesc domeniul de topire
Determinarea puritii
Topirea prematur a unor cristale datorit prezenei unei cantiti mici de impuritate
Studiul interaciunilor
Determinarea temperaturii eutectice a unui amestec A+B
principiul activ, B- substan de referin)
Viteza de nclzire-3C/min
104.
31
Thermogravimetry (TGA)
nregistrarea variaiei masei substanelor n funcie de temperatur n cursul nclzirii lor continue i
uniforme
Evenimente termice nsoite de variaia masei: desorbia, absorbia, sublimarea, evaporarea, oxidarea,
reducerea, descompunerea;
Aparatura:
Termobalana
Microbalan electronic
Cuptor
Programator al temperaturii
Creuzete
cantitatea de prob
o viteza de nclzire
32
10K/min pn la 30K/min
viteza de nclzire mic cresc timpii de analiz i scade pierderea de mas pe unitatea de timp
Gaze reactive: O2
Volum
Reacia cu proba
P.t.
Alumin (Al2O3)
70L, 150L
inert
> 1700C
Poate aciona ca i
catalizator
1770C
900L, reutilizabile
Platin
Aluminiu
40L ,100L
inert
660C
Safir
70L, reutilizabile
inert
> 1700C
105.
33
106.
107.
1. Determinarea identitii
2. Determinarea puritii
3. Determinarea cantitativ:
T= G/KdH/dT
G = cantitatea de substan din prob
K = conductibilitatea termic a probei;
dH/dT = cantitatea de cldur consumat sau degajat pe unitatea de
transformarea termic a unui gram de substan
108.
o
timp
prin
o msurarea energiei calorice care nsoete schimbrile de faz ca urmare a unei variaii de temperatur
pentru o prob meninut la acelai regim de temperatur cu o prob de referin
o Scanare- analizare
o Calorimetru- instrument pentru msurarea cldurii sau a fluxului de cldur
o Diferenial- se folosesc dou calorimetre (prob, referin) cu acelai transfer de cldur
Principiu
34
Dac apare o diferen de temperatur ntre prob i referin, datorat unei schimbri de faz ce apare n
prob, este nlocuit energia pn cnd aceast diferen de temperatur este mai mic dect o valoare de
baz (< 0,01K);
109.
Determinarea identitii;
-
Determinarea polimorfismului;
Determinarea puritii;
Impuritile:
a. Scad p.t. al produsului iniial;
b. Modific aspectul curbei de topire sau recristalizare;
T = RT02X2 / Hf
T = T0-Tm;
35
110.
-
Indicele de aciditate numarul de mg KOH necesar pentru a neutraliza acizii liberi din 1 g proba de
analizat;
111.
-
Indice de saponificare nr de mg KOH necesar pentru neutralizarea tuturor acizilor, a acizilor liberi si a
celor rezultati prin saponificarea a 1g proba de analizat.
116.
36
Indicele de peroxid = numarul de ml de Na2S2O3 ori 10-2 M oxidat de iodul eliberat din acidul iodhidric prin
actiunea peroxizilor din 1 g proba de analizat;
115.
-
114.
-
Indicele de ester = numarul de mg KOH necesar pentru a neutraliza acizii grasi rezultati din saponificarea a
1 g proba de analizat;
113.
-
Indicele de hidroxil numarul de mg KOH echivalent cu acidul acetic consumat prin acetilarea a 1 g proba
de analizat;
112.
-
Este o tehnica eficienta in situatiile in care avem de-a face cu cantitati foarte mici de proba si o
inalta rezolutie este esentiala. Reproductibilitatea sa relativ mica este principala dificultate a acestei
proceduri. Este o metoda fizica de analiza, care se bazeaza pe migrarea particulelor incarcate electric,
dizolvate sau dispersate intr-o solutie de electroliti si supuse actiunii unui camp electric.
Mobilitatatea electroforetica a unei particule este viteza de deplasare in metri pe secunda a
particulei supuse actiunii unui camp electric de un volt pe metru si se exprima in metri patrati pe volt si pe
secunda (m2 x V-1 X s-1). Submultiplul curent folosit este centimetrul patrat pe volt si pe secunda
(cm2/VXs).
1. Mobilitatea electroforetica si fluxul electro-osmotic
Particulele aflate in suspensie intr-un lichid la fel ca si moleculele solvatate pot fi incarcate cu o
sarcina electrica a carei marime si semn depind de natura lor si a electrolitului si, in particular, de pH.
Aceasta sarcine provine din fixarea pe suprafata lor a ionilor continuti in electrolitul tampon. Sub
efectul diverselor fenomene (agitare, temperatura, vascozitate, diferenta de potential) aceste particule vor
avea viteze de migrare cu atat mai mari cu cat ele sunt mai mici si au sarcina mai mare.
Pentru fiecare ion de raza r, viteza limita de migrare este rezultatul echilibrului intre forta electrica
F care se exercita intr-un camp electric E cu particule de sarcina q si fortele de frecare care decurg din
vascozitatea (niu) a mediului.
Separarea depinde de asemenea de raportul volum/sarcina ionului hidratat. Speciile neutre se separa
greu fiind necesara adaugarea unui agent ionic in electrolit care sa se asocieze cu acesta si sa provoace o
antrenare diferentiata a lor.
Speciile prezente in proba sunt supuse la doua fenomene principale care se manifesta atat pentru
ioni cat si pentru molecule: este vorba, pe de o parte, de mobilitatea electroforetica proprie lor iar, pe de
alta, de fluxul electroosmotic.
2. Mobilitatea electroforetica- electromigratia
Toti compusii incarcati electric se deplaseaza in electrolit cu o viteza v care depinde de conditiile
experimentale si de mobilitatea lor electroforetica.
Mobilitatea electroforetica se poate obtine plecand de la electroforegrama, calculand viteza
electroforetica a compusului intr-un camp E si tinand cont de viteza electrolitului.
Al doilea factor care controleaza migrarea solutiilor este curgerea electrolitului numit flux electroosmotic caracterizat prin mobilitatea electro-osmotica.
3. Mobilitatea electroosmotica si electroosmoza
Pentru calcularea mobilitatii electro-osmotice trebuie determinata viteza electroosmotica. Viteza
electroosmotica este raportul intre lungimea capilarului parcursa de un marker neutru in timpul t. Se
utilizeaza ca marker o molecula organica nepolara la pH-ul electrolitului folosit si care este usor detectabila
prin absorbtia in UV apropiat.
Fluxul electroosmotic aflat la originea deplasarii tuturor speciilor prezente in proba depinde de
natura peretelui intern al tubului capilar.
37
Acest perete de silice este captusit de grupari silanice care se ionizeaza daca pH-ul este mai mare de
3, formand o suprafata cu pozitii anionice fixe ce creeaza un potential negativ (potential zeta) alaturi de un
strat cationic.
In interiorul solutiei, campul electrolitic provoaca migrarea cationilor spre catod. Acesti ioni sunt
solvatati si antreneaza moleculele de apa din electrolit dirijiandu-le spre catod. Anionii se deplaseaza intr-o
maniera contra-electroosmotica. Daca se trateaza peretele capilar cu un surfactant de tipul
tetraalchilamoniu, polaritatea se inverseaa, ceea ce conduce la o inversare a fluxului electroosmotic.
In general o suprafata a peretelui capilar negativa provoaca un flux electroosmotic dirijat spre catod
si invers, o suprafata pozitiva provoaca o dirijare a acestuia spre anod.
Cunoasterea fluxului electroosmotic este esentiala pentru practica EC pentru obtinerea de rezultate
reproductibile.
4. Aparatura utilizata in electroforeza capilara
A. Modul de injectare
-
Pentru introducerea unui microvolum de proba care nu trebuie sa depaseasca 1% din lungimea utila a
capilarului, pentru a nu diminua rezolutia, se utilizeaza procedeele:
a) Injectarea hidrodinamica consta in aplicarea unei diferente de potential intre cele doua extremitati ale
capilarului. Procedeul poate fi ameliorat prin crearea unei presiuni de circa 50 mbar in solutia de proba.
b) Injectare electrocinetica se utilizeaza in electroforeza pe gel si consta in aplicarea unei diferente de
potential intre extremitatile capilarului pentru crearea unei diferente de polaritate.
c) Injectarea prin gravitatie bazata pe diferenta de inaltime intre capetele capilarului.
B. Metode de detectie
a) Detectie UV/VIS;
b) Detectie prin fluorescenta;
c) Cuplarea cu un spectrometru de masa;
d) Detectie electrochimica.
38
Se mai numeste si electroforeza in solutie libera si este procedeul electroforetic cel mai frecvent utilizat. In
acest procedeu capilar este parcurs de electrolit intr-un mediu tampon fie acid (fosfat sau citrat) fie bazic
(borat) sau amfolit (molecule posedand o functie acida si una bazica). Fluxul electro-osmotic creste cu pHul fazei lichide sau poate ramane neutru.
Prin aceasta tehnica cationii sunt separati primii, apoi ansamblul neutru si la sfarsit anionii. Tehnica nu
permite separarea speciilor neutre unele de altele.
In aceasta varianta, fazei mobile i se adauga un compus cationic sau anionic pentru formarea de micele
incarcate electric;
Micelele care nu sunt miscibile cu solutia, absorb compusii neutri mai mult sau mai putin eficace printr-o
afinitate de tip hidrofil/hidrofob;
Acest tip de electroforeza se aplica moleculelor care au teninda de a migra fara separare (polipeptidele).
Consta in transpunerea electroforezei pe gel de poliacrilamida sau agaroza. Capilarul este umplut cu un
electrolit continand un gel care produce efect de filtrare ce retine moleculele mari si reduce fenomenul de
difuziune.
Metoda se preteaza la separarea a trei clase mari de biomolecule: polipeptide, oligonucleotide (fragmente
de ADN sau ARN) mono si polizaharide.
Aceasta tehnica cunoscuta in egala masura ca electroforeza pe suport consta in crearea unui gradient de pH
liniar intr-un capilar cu peretele tratat cu amfolit. Capilarul este introdus in acid fosforic la anod si in
hidroxid de sodiu la catod, fiecare compus migreaza si se focalizeaza la pH-ul care are aceeasi valoarea cu
potentialul lui izoelectric.
9. Electrocromatografia capilara
-
Acest tip de separare asociaza electromigrarea ionilor, proprie electroforezei si procesele de repartitie intre
faze prezente in cromatografie.
39
Validare intr-un singur laborator atunci cand se verifica viabilitatea metodei inaintea unui studiu
in colaborare (intre mai multe laboratoare) si asigura faptul ca metoda pusa la punct este utilizarea
corecta.
14. Care sunt cele mai selective metode de analiza pentru probele biologice?
Cele mai selective metode de analiza aplicate la probe biologice sunt cele combinate:
-
40
LC-UV;
LC-MS;
GC-MS;
GC-FTIR
41
Precizia ofera date asupra erorilor intamplatoare si nu are nicio legatura cu valoarea adevarata.
Deoarece toate masuratorile contin erori intamplatoare, rezultatul unei singure masuratori nu poate fi
acceptat ca valoare adevarata.
Pentru a prezice domeniul in care se gaseste valoarea adevarata este necesara o estimare a acestei
erori, acest lucru facandu-se prin repetarea masuratorii de mai multe ori.
Daca setul de date este limitat, valoarea medie este adesea aproximata ca valoare adevarata, fiind
necesara estimarea abaterii standard. In acest caz, valoarea abaterii standard, notata cu SD, se calculeaza cu
formula:
Odata ce numarul de valori din setul de date creste, valoarea SD se va apropia de valoarea .
42
43
44