LP 8. Examenul bacteriologic al puroiului. Examenul plagilor si arsurilor.

Identificarea
bacililor gram-negativi non-fermentativi (Pseudomonas, Acinetobacter spp.)

Obiective. La sfârşitul lucrării practice studenţii vor fi capabili să:

1) Descrie testele utilizate pentru identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi.
2) Definească termenii: puroi, supuraţie.
3) Precizeze agenţii etiologici implicaţi în producerea supuraţiilor.
4) Prezinte modalităţile corecte de prelevare şi transport al puroiului.
5) Enumere etapele diagnosticului de laborator aplicabil in cazul puroiului.

Identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi

Pseudomonas aeruginosa
Caractere microscopice: bacili gram-negativi, drepţi sau uşor încurbaţi, fini, dispuşi izolat, în
perechi sau scurte lanţuri, nesporulaţi.

http://textbookofbacteriology.net/pseudomonas.html

Caractere de cultivare:
• nepretenţioşi nutritiv,
• strict aerobi,
• cresc la temperaturi între 5-42ºC,
• colonii cu tendinţă de invadare a mediului, cu miros caracteristic (flori de tei sau
iasomie),
• produc pigmenţi fluorescenţi difuzibili în mediu (piocianină, pioverdină, piorubrină,
piomelanină),
• tulpini nepigmentate (frecevent mucoide), in cazul celor izolate de la pacienti cu
fibroza chistica (mucoviscidoza).
 http://jb.asm.org/content/183/21/6454/F3.expansion.html

• culturile au luciu metalic şi plaje de liză,

• pe geloză-sânge, coloniile sunt hemolitice.

Caractere biochimice:
• catalazo-pozitivi,
• oxidazo-pozitivi:

Testul oxidazei:
- se depun 2 - 3 picături de reactiv pentru oxidază (diclorhidrat de tetrametil-p-
fenilendiamina) pe o banda de hârtie de filtru; cu o ansă de plastic se etalează un
fragment din colonia selectată;
- reacţie negativă: absenţa virării culorii reactivului după 10 secunde.
- reacţie pozitivă: virarea culorii reactivului în violet sau albastru închis.
http://www.microbes-edu.org/professionnel/observations/obs25/J12/index.html

• metabolism oxidativ al glucozei,

• reduc nitraţii,

• alcalinizează coloana şi panta de agar TSI

• lactozo-negativi,
• indol-negativi.

Genul Acinetobacter
Caractere microscopice:
• bacili gram-negativi, scurţi şi groşi, chiar cocoizi, cu dispozitie neregulata sau in
diplo

https://www.gettyimages.ie/detail/news-photo/this-gram-stained-photomicrograph-depicts-numerous-gram-news-
photo/509391900?

• frecvent capsulaţi,
• imobili
 Caractere de cultivare:
• nepretenţioşi nutritiv
• strict aerobi,
• nepigmentogeni

Caractere biochimice:
• catalază pozitivi

• oxidazo-negativi
https://www.slideshare.net/drmalathi13/oxidase-test

• non-fermentativi, lactozo-negativi, indol-negativi

Examenul bacteriologic al puroiului. Examenul plagilor si arsurilor.

Puroi = exsudat fibrinos care conţine leucocite şi microorganismul implicat.

Supuraţie = formarea puroiului.

Etiologie bacteriana (mai frecvent):

Staphylococcus aureus
Streptococcus pyogenes
Escherichia coli
Klebsiella spp.
Enterobacter spp.
Pseudomonas aeruginosa
Acinetobacter baumannii
Anaerobi: Clostridium, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium etc.,
Prelevarea puroiului:
Prelevarea din colecţii purulente.
- se recoltează prin puncţie aspiraţie cu un ac suficient de gros adaptat unei seringi etanşe;
- “seringa anaerobă”- pentru anaerobi- asigură supravieţuirea ~30 minute;

https://www.slideshare.net/Shilpak23/non-sporing-anaerobes-65044854
-puroiul se transportă la laborator în maximum 1-2 ore (nu şi pentru anaerobi);
-se utilizează medii de transport – permite supravieţuirea câteva ore.

Prelevarea cantitativă cu tamponul

- se face toaleta plăgii: se îndepărtează ţesutul necrotic şi se spală cu ser fiziologic pentru
îndepărtarea exsudatului stagnant sau a eventualelor urme de antibiotic;
- învârtim tamponul umezit cu soluţie Ringer pe o arie de 1 cm2, până la sângerare uşoară
(pentru a avea certitudinea că prelevăm din ţesutul viabil; se poate preleva din mai multe puncte
ale leziunii);
- se introduce tamponul într-un mL de bulion tioglicolat şi se transportă imediat la laborator.

Recipient transport proba – suspiciune anaerobi

Sursa: https://www.google.ro/search?q=swab+anaerobic&rlz=1C1AWUA

Prelevări biopsice
- indicate când conduita terapeutică impune cunoaşterea concentraţiei bacteriene în ţesuturile
viabile afectate prin arsuri sau traumatism şi extinderea leziunilor;
- se face toaleta plăgii;
- prelevarea se face cu perforatorul dermic;
 https://myhealth.alberta.ca/Health/pages/conditions.aspx?hwid=zm2550

- proba se expediază la laborator într-un tub închis ermetic.

A. Examenul macroscopic (pentru puroiul prelevat în seringă):

- consistenţa (cremos – infecţii stafilococice, lichid – infecţii streptococice);
- culoare (galben, roşu-brun (e.g. Serratia), verzui, albastru-verzui (e.g. Pseudomonas);
- miros (fetid, fecaloid - anaerobi).

B. Examenul microscopic:
În cazul prelevării cu tamponul - efectuarea frotiului se face de către persoana care a recoltat
proba: pe o lamă de microscop se rulează tamponul pentru a obţine un frotiu subţire şi uniform.
Frotiurile şi tamponul vor fi trimise împreună la laborator.

- coloraţie Gram şi/sau Ziehl Neelsen

Examenul citologic:
- prezenţa şi tipul leucocitelor
Examnul bacterioscopic :
-se apreciază semicantitativ prezenţa bacteriilor
• foarte rare : 1/50-100 câmpuri
• rare 1/10-20 câmpuri
• numeroase 1-10/câmp
- categoria microscopică a bacteriilor observate

C. Cultivarea probelor
Izolarea calitativă din puroi
Medii utilizate:
• geloză-sânge
• mediu cu selectivitate joasă pentru bacili Gram-negativi (MacConkey)
• bulion tioglicolat (în cazul probelor necontaminate)
Incubare:
• temperatură 37 °C,
• atmosferă cu 5-10% CO2,
 • timp de 24-48 ore.

Izolarea cantitativă din plăgi şi arsuri

- se obţine suspensia mamă prin rotirea şi stoarcerea insistentă a tamponului în mediul de
transport pentru descărcarea conţinutului, apoi îl stoarcem prin presare insistentă pe peretele
tubului;
- se realizează diluţii zecimale în bulion tioglicolat şi etalăm câte 0,1 ml pe câte o placă cu geloză
sânge pentru incubare aerobă şi una pentru incubare anaerobă;
- facem citirea la 24-48 de ore pentru placa incubată aerob şi la 48-72, pentru cea incubată
anaerob;
- se calculează concentraţia bacteriilor de pe tampon după formula:
Nr UFC/tampon=NxDx10, unde N= nr coloniilor de pe placă
D = inversul diluţiei
10 - pentru că am însămânţat 0,1 mL

Interpretarea rezultatelor:
A) izolatele în cantitate >106 UFC/tampon au semnificaţie clinică;
B) streptococii beta hemolitici au semnificaţie clinică indiferent de cantitatea în care sunt izolaţi;
C) izolatele în cantităţi de 103-4 UFC/ g ţesut au semnificaţie clinică dacă examenul
histopatologic confirmă prezenţa infiltratului inflamator, a leziunilor de vasculită şi tromboză.

D. Identificarea agentului etiologic

E. Antibiograma (discutii privind alegerea antibioticelor testate: categorie microscopica,
localizarea focarului etc)