MUTATIILE SI

REPARAREA
LEZIUNILOR
ADN
MUTATIILE
 Mutaţii genomice
 altereaza numarul de cromozomi din celula:

- Poliploidii

Aneuploidii
 Mutaţii cromozomiale

altereaza structura individuala a cromozomilor

 Mutatii genice

Cele mai frecvente mutaţii

genice sunt cele punctiforme;
acestea afectează o pereche
de nucleotide.
Substitutii:
- tranziţii
- transversii

S-a observat că numărul tranziţiilor este

dublu faţă de cel al transversilor.
 Consecintele mutatiilor genice

 Substitutia neutră (silenţioasă,

sinonimă)
 Substitutia cu sens greşit (nesinonime,
„missens”) :

- conservativa (arginina si lizina)

- neconservativa
 Substitutia nonsens
 Deletii si insertii

inserţii

deleţii
7q31 - gena care codifică o proteină
transmembranară CFTR (Cystic
Fibrosis Transmembrane
Conductance Regulator), care
actioneaza ca un canal de clor la
nivelul polului apical al celulelor
epiteliale.
 Mutatii dinamice

Se caracterizează prin expansiunea

repetărilor unor secvenţe trinucleotidice
intragenice
Penetranţa mutaţiilor dinamice este
determinată de numărul repetiţiilor

Gena Huntington (HTT), numita si gena HD

(Huntington disease) codifica proteina
huntingtina si daca este anormala ea contine
o expansiune poliglutaminica.
Numar de Clasificare Statusul bolii
repetitii

<27 Normal Neafectat

27–35 Intermediar Neafectat

36–39 Penetranta +/- Afectat

Redusa

>39 Penetranta Afectat

totala/comple
ta
 Exemple reprezentative de boli prin repetitii trinucleotidice

Boala Localizarea genei Repetitie Numar de repetitii

Alela normala Pre-mutatie Mutatie completa

Sindromul X fragil Xq27.3 CGG < 60 60-200 > 200

(FRAXA)
(1:4000)

Distrofia miotonica 19q13.3 CTG < 30 50-80 > 80

(1:8000)
Principalele tipuri de leziuni
ADN sunt:
 modificari ale bazelor
purinice sau pirimidinice
 formarea de punti
intracatenare sau
intercatenare;
 rupturi monocatenare si
bicatenare
1. Erori ale procesului de replicare

NH
NH2 NH2

C C
N N NH

NH O forma amino forma imino

Citozina aminică (C-NH 2) iminică (C=NH)

C C
HN O N OH

forma lactam forma lactim

cetonică (C=O) enolică (C-OH)
Dezaminare bazelor
Depurinare spontană
 Factori fizici

In grupa factorilor fizici sunt incluse

 Radiatii neionizante (raze ultraviolete -

UV )

 Radiatii ionizante (radiatii

electromagnetice)

 Radiaţiile ionizante (X, gama) produc mai ales rupturi mono- sau bicatenare ale ADN-ului, dar dozele sunt foarte
scăzute, permiţând sistemelor de reparare să remedieze leziunile.
 Agenţii chimici

Agenţii chimici grupează o gamă largă

de substanţe chimice cum ar fi:

- analogii bazelor azotate,

- agenţii alkilanţi,

- substantele de intercalare, etc.

 Analogii bazelor azotate

BU în cursul procesului de replicare

poate să
• înlocuiască timina în perechea AT→
ABU
• se împerecheze în mod incorect cu
guanina.
 Agenţii alkilanţi

 Iperita

 Etil metan sulfonatul (EMS)

 Dimetil sulfatul (DMS)

 Nitrosoguanidina (NTG) etc

Iperita
 Substanţele de intercalare

 acridin oranjul
 proflavina
Agenţii de intercalare favorizează
deleţiile sau inserţiile.
Mecanisme de
reparare
 Fotoreactivarea

 repararea directă
 Reparare directă monoenzimatică
sau repararea fără excizia bazei

 metil-guanin-metil transferaza
(MGMT)

MGMT
 Repararea
erorilor de
împerechere

 autocorecţia erorilor
în timpul replicării
(proofreading).
 Mecanismul de reparare a imperecherilor gresite
MMR (mismatch repair)

MMR are rol in eliminarea bazelor imperecheate

gresit si a buclelor de insertie-deletie aparuteprin
fenomenul de „derapaj” a ADN-polimerazei in timpul
replicarii ADN.
Cele mai importante enzime din sistemul MMR sunt
codificate la om de genele: MLH1, MSH2, MSH6,
PMS.
Proteina MSH2 formeaza un heterodimer cu MSH6 (in
cazul imperecherilor gresite baza-baza) sau cu MSH3
(in situatia aparitiei unor bucle de insertie-deletie)
care recunoaste erorile si se leaga de orice secventa
nucleotidica gresita. Atasarea complexului determina
recrutarea altor proteine care vor taia secventa fiica
incorecta si a vor inlocui cu una corecta.
Mutatiile lor sunt implicate in cancerul non-polipozic
colorectal ereditar (HNPCC)
 Mecanismul de reparare prin excizia bazei
(base excision repair – BER)

BER repară defectele ce

afectează o singură nucleotidă
prin acţiunea unor glicozilase ce
elimină baza azotată afectată din
nucleotidă şi obţinerea unui
situs AP.
Situs-ul este recunoscut si clivat
de APE si apoi apoi completat de
o polimeraza ADN specifică şi
legătura O-P-O refăcută de o
ligază.
 Reparare prin excizia nucleotidelor
(nucleotide excision repair – NER)

NER e un sistem de reparare

complex
- dupa recunosterea leziunii
se formeaza un complex
mare proteic ce produce
incizia dubla a catenei cu
leziunea precum și a unei
zone din jurul leziunii
- sinteza noii catene pe baza
de complementaritate cu
catena veche de către
ADN-polimerază
- ligarea noii catene produse
prin acţiunea unei ligaze.
 Mecanismele MMR, BER, NER :

 - recunoaşterea leziunii de către enzime

specifice;

 - desfacerea dublului helix de către o

helicază;

 - excizia fragmentului lezat sub acţiunea unei

endonucleaze;

 - îndepărtarea şi degradarea fragmentului de

către exonucleaze

 - resinteza componentelor lacunei, de către

ADN-polimeraze;

 - formarea legăturii fosfodiester între

fragmentul nou sintetizat şi capetele libere
ale catenei de ADN de către o AND ligaza