CARACTERELE CULTURILOR BACTERIENE

Caractere ale culturilor bacteriene în medii lichide

La o cultură bacteriană obţinută în mediu lichid se poate aprecia:
1-turbiditatea mediului: majoritatea bacteriilor tulbură uniform bulionul nutritiv.
2-sedimentul grunjos bogat (de exemplu la: Streptococcus pyogenes însămânţat în bulion
glucozat).
3-pelicula: este specifică pentru anumite bacterii (specii din genul Bacillus, genurile
Mycobacterium, Pseudomonas), care se dezvoltă în prezenţa oxigenului molecular (sunt
viabile în pelicula pe care o formează la suprafaţa mediului lichid).
4-culoarea mediului. Pseudomonas aeruginosa produce pigmenţi solubili (difuzibili în
medii), caracteristică fiind piocianina de culoare albastră, însă frecvent produce şi un pigment
verde denumit pioverdină.
5-mirosul: este caracteristic pentru unele culturi bacteriene, de exemplu: pentru anaerobi
(degajă un miros fetid), pentru Pseudomonas aeruginosa (miros aromat de fructe).

MEDII LICHIDE
Bulion nutritiv: Bulion Pigmenţi albastru Bulion glucozat: Secreţie Mediul
peliculă la nutritiv: şi verde difuzibili Streptococcus faringiană Chapman
Bacillus subtilis stafilococ în bulion nutritiv (pyogenes cu mediul lichid:
(mediu (Pseudomonas (grunji) Pick Staphylococcus
tulbure) aeruginosa) aureus

Caractere ale culturilor bacteriene pe medii solide

La o cultură bacteriană obţinută pe un mediu solid se examinează coloniile care se dezvoltă şi
se descriu următoarele aspecte:
1 – relieful: poate fi turtit sau bombat şi suprafaţă netedă sau neregulată.
2 – contur: - bine delimitat, circular;
- crenelat, festonat, cu prelungiri.
3-mărime: -colonii mici (de ex. la streptococi, hemofili);
-colonii mari (de ex. la Klebsiella, Bacillus).

1
4 -pigmentarea coloniilor:
-pigment auriu la Staphylococcus aureus;
-pigment roşu la unele specii de Serratia (de ex.: Serratia marcescens);
-pigmenţi solubili (difuzibili în medii): piocianina, pioverdina sintetizaţi de Pseudomonas
aeruginosa.
5-transparenţa sau opacitate (colonii transparente: de ex. la Streptococcus pyogenes;
colonii opace: de ex. la stafilococi, enterococi, Bacillus, Mycobacterii).
6-consistenţa coloniilor - poate fi untoasă cremoasă (de ex. la stafilococi), mucoasă (de ex. la
Klebsiella spp., Streptococcus pneumoniae), apoasă, etc.
7-aderenţa la mediu (de ex. coloniile de Bacillus sunt aderente de mediul solid);
8-hemoliza pe mediul agar sânge (geloză sânge): - hemoliză de tip alfa (incompletă) (de
ex. la Streptococcus pneumoniae); - hemoliza de tip beta (completă sau totală) (de ex. la
streptococii beta-hemolitici).
9-capacitatea de emulsionare în soluţie salină fiziologică.

- În funcţie de aceste aspecte, se deosebesc două tipuri de colonii:

a) colonii de tip S sau netede (“smooth”=neted): au suprafaţă bombată, netedă,
lucioasă, conturul este bine delimitat, consistenţă cremoasă; apare o suspensie omogenă prin
emulsionare în soluţie salină fiziologică.
b) colonii de tip R sau rugoase (“rough”=rugos): au o suprafaţă turtită, neregulată,
un contur crenelat sau festonat, sunt uscate şi aderente de mediu; apare o suspensie granulară
prin suspendare în soluţie salină fiziologică.
-Unele bacterii (Corynebacterium diphteriae, Mycobacterium tuberculosis, Bacillus anthracis)
se izolează de la pacienţi şi sunt patogene în forma R.

MEDII SOLIDE
AGAR NUTRITIV (Geloză nutritivă sau simplă)
Micrococcus lysodeiticus - colonii de tip S (netede), Pseudomonas aeruginosa – colonii rotunde
mari, cu pigment galben cu pigment albastru difuzibil în mediu

2
Salmonella enterica Pseudomonas Enterococcus faecalis - colonii de tip S, mici
serovar enteritidis - aeruginosa -
colonii de tip S colonii pigment
albastru difuzibil
în mediu

Bacillus subtilis – colonii de tip Bacillus cereus - colonii de tip R (rugoase), mari, opace
R (rugoase), mari, opace

3
 AGAR SÂNGE (Geloză sânge)
Produse patologice: secreţii faringiene: Streptococcus pyogenes - colonii de tip S, mici,
colonii de tip S, mici, transparente, beta-hemolitice transparente, beta-hemolitice
şi colonii de tip S, mici, alfa-hemolitice

Streptococcus agalactiae (streptococ beta-hemolitic Streptococcus pneumoniae - colonii de tip S,

de grup B) - colonii de tip S, mici, beta-hemolitice mici, alfa-hemolitice, cu aspect mucoid

4
Staphylococcus aureus - colonii de tip S, Stafilococ – colonii de tip S, cu hemoliză de tip cald
opace, cu pigment auriu şi hemoliză -rece (hemoliza incompletă, care apare după incubare
completă la 37°C, se intensifică după câteva ore la 4°C)

Stafilococcus epidermidis - colonii de tip S,

opace, nehemolitice

Enterobacter cloacae – colonii de tip S, opace Klebsiella pneumoniae – colonii de tip S,

translucide, nehemolitice opace, nehemolitice, cu aspect mucoid

5
Bacillus cereus – colonii de tip R, mari, opace, Pseudomonas aeruginosa – colonii rotunde,
translucide, cu hemoliza completă opace, cu hemoliză completă şi pigment albastru
difuzibil în mediu

Haemophilus influenzae – fenomenul de satelitism

(colonii de tip S, mici, care se dezvoltă numai în zona de hemoliză completă
şi în vecinătatea coloniilor de Staphylococcus aureus)

AGAR CIOCOLAT (Geloză şocolatie)

Haemophilus influenzae: colonii de tip S, mici, asemănătoare cu picăturile de rouă

6
 AGAR CIOCOLAT (Geloză şocolatie)
Streptococcus pneumoniae: colonii mici, de tip S, cu aspect mucoid
şi zone galbene albicioase în jurul coloniilor

MEDIUL CLED
(cistină, lactoză, deficient în electroliţi)
Salmonella enterica serovar. typhimurium - Klebsiella pneumoniae - colonii de tip S, lactoză
colonii de tip S, translucide, lactoză negative pozitive, mari, cu aspect mucoid şi cameleonaj

7
 MEDIUL CLED
Proteus mirabilis - colonii de tip S, translucide, Escherichia coli - colonii de tip S, lactoză pozitive
lactoză negative

MEDIUL MAC CONKEY

Klebsiella pneumoniae - colonii de tip S, Escherichia coli - colonii de tip S, lactoză pozitive
lactoză pozitive, cu cameleonaj

Salmonella enterica - colonii de tip S, Acinetobacter baumannii - colonii de tip S,

translucide, lactoză negative opace, lactoză negative (după 24 ore de incubare la 37°C)

8
 MEDIUL DRIGALSKI
Escherichia coli - colonii de tip S, Klebsiella pneumoniae - colonii de tip S, mari,
lactoză pozitive lactoză pozitive, cu aspect mucoid şi cameleonaj

Proteus vulgaris - invazie (văluri concentrice) Salmonella enterica serovar. enteritidis -

colonii de tip S, translucide, lactoză negative

MEDIUL LEVINE (EMB-Agar)

Escherichia coli - colonii de tip S, negre, Klebsiella pneumoniae - colonii de tip S, mari
cu aspect verde metalizat cu aspect mucoid, lactoză pozitive

9
 MEDIUL LEVINE (EMB-Agar)
Serratia marcescens - colonii de tip S, lactoză negative

MEDIUL HEKTOEN
Salmonella enterica serovar. enteritidis - Proteus mirabilis - colonii de tip S, negre
colonii de tip S, negre

Shigella sonnei - colonii de tip S, lactoză negative Enterobacter cloacae - colonii de tip S, lactoză
pozitive

10
 MEDIUL LEIFSON (ADCL)
COPROCULTURI

Salmonella enterica serovar. enteritidis Klebsiella pneumoniae - colonii de tip S,

colonii de tip S, negre lactoză pozitive, cu aspect mucoid şi cameleonaj

MEDIUL WILSON BLAIR MEDIUL SHIGELLA SALMONELLA

Salmonella enterica serovar. enteritidis - Salmonella enterica serovar. enteritidis (colonii de
colonii de tip S, negre (cultură pură) tip S, negre) şi Escherichia coli (colonii de tip S,
lactoză pozitive - roşii) (coprocultură)

11
 MEDIUL CHAPMAN

Stafilococ coagulază negativ - colonii de tip Staphylococcus aureus - colonii de tip S, opace,
S, opace, manitol negative manitol pozitive (galbene), cu pigment auriu

Mediul agar nutritiv cu 0,004% telurit Mediul Löwenstein Jensen

de Potasiu
Enterococcus faecalis - colonii de tip S, mici, negre Mycobacterium - colonii de tip R,
(rugoase), mari, opace

12
 Mediul BRILLIANCE TM UTI AGAR
Amestec de bacterii în urină (urocultură)
Escherichia coli (colonii de tip S, roz), Enterococcus spp. (colonii de tip S, albastre, mici), Staphlococcus aureus
(colonii de tip S, mari, galbene), Enterobacter spp. (colonii de tip S, albastre, mari), Klebsiella (colonii de tip S,
albastre, mari, cu aspect mucoid).

Amestec de bacterii în urină (uroculturi)

13
 CARACTERELE CULTURILOR DE CANDIDA ALBICANS
pe mediile: SABOURAUD şi BRILLIANCE CANDIDA AGAR
Mediul Sabouraud solid: Candida albicans Mediul Sabouraud lichid:
- colonii de tip S, mari, albe, cremoase Candida albicans – mediu tulbure

Mediul BRILLIANCE CANDIDA AGAR

Candida albicans: colonii de tip S, verzi

14
 TESTE BIOCHIMICE - pentru bacterii
Teste biochimice în eprubete Mediul lichid Mediul
cu lizină Simmons
+ – CIT+

Mediul agar
Mediul pentru oxidare/fermentare cu bilă-esculină
Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli test + test -
anaerobioza aerobioza anaerobioza aerobioza

15
mediul Shigella sonnei Salmonella enterica serovar. enteritidis
Christensen TSI MILF Simmons MIU Simmons TSI MILF
URE - GLU+ IND- CIT- IND- CIT+ GLU+ IND-
LAC- LDC- URE- LAC- LDC+
H2S- mobilitate- mobilitate+ H2S+ mobilitate+

Proteus mirabilis
mediul MIU TSI Simmons MILF MILF mediul agar
Christensen IND- H2S+ CIT+ IND- cu fenilalanină
URE + URE + GLU+ LDC- cu FeCl3 : cu FeCl3 :
mobilitate+ LAC- mobilitate+ FAD+ FAD+

16
 Yersinia enterocolitica Klebsiella pneumoniae
mediul
MIU TSI Simmons Christensen MILF TSI
URE+ GLU+ CIT+ URE+ IND- GLU+
IND- LAC- LDC+ LAC+
mobilitate+ H2S- mobilitate- gaz+
gaz+

Enterobacter cloacae mediul Escherichia coli mediul

TSI Simmons MILF Christensen Simmons TSI MILF Christensen
GLU+ CIT+ IND- URE- CIT - GLU+ IND+ URE-
LAC+ LDC- LAC+ LDC+
H2S- mobilitate+ H2S- mobilitate+
gaz+ gaz+

17
 Hafnia alvei mediul Serratia marcescens mediul
Simmons MILF TSI Christensen TSI Simmons MILF Christensen
CIT- IND- GLU+ URE- GLU+ CIT+ IND- URE-
LDC+ LAC- LAC- LDC+
mobilitate + H2S- H2S- mobilitate+

mediul Providencia stuartii Morganella morgani

Christensen TSI MILF Simmons Simmons TSI MILF
URE- GLU+ IND+ CIT+ CIT- GLU+ IND+
LAC- LDC- LAC- LDC-
H2S- mobilitate+ H2S- mobilitate+

18
 Pseudomonas aeruginosa mediul
MILF TSI Simmons Christensen
IND- GLU- CIT+ URE+
LDC - LAC- pigment albastru
mobilitate+ H2S-
pigment albastru pigment
colonii lucioase

Legendă: LAC=Lactoză, GLU=Glucoză, IND=Indol, CIT=Citrat de sodiu, H2S=Hidrogen sulfurat,

LDC=Lizin decarboxilaza, FAD=Fenilalanin dezaminaza, URE=ureaza.

Microtest biochimic api 20 E (Salmonella enterica serovar. typhimurium)

Mcrotest biochimic api 20 E (Shigella sonnei)

Mcrotest biochimic api 20 E (Enterobacter cloacae)

19
 Microtest biochimic ID 32 E (Klebsiella pneumoniae)

Microtest biochimic rapid ID 32 E (Escherichia coli)

Microtest biochimic ID 32 GN (Pseudomonas aeruginosa)

Mcrotest biochimic ID 32 STAPH (Staphylococcus aureus)

Microtest biochimic ID 32 STAPH (Staphylococcus haemolyticus)

20
 INOCULAREA PROBELOR PATOLOGICE
Pentru izolarea bacteriilor din produse patologice şi respectiv pentru repicarea coloniilor suspecte a
aparţine unor specii bacteriene patogene pentru om, se practică însămânţarea pe medii de cultură
sterile: solide sau lichide, utilizând ansa bacteriologică sau pipete (Pasteur, gradate, automate) sau
tampoane sterile.
Tehnici de însămânţare: 1) însămânţarea prin epuizarea inoculului (în striu) pe suprafaţa unui mediu
solid din placă Petri, folosind o ansă bacteriologică cu buclă; 2) însămânţarea în profunzimea mediilor
solide prin înţeparea acestora cu ansa bacteriologică dreaptă; 3) însămânţarea în medii lichide cu ansa
bacteriologică sau cu pipeta (pipete Pasteur, gradate, automate); 4) însămânţarea prin diluţii succesive
în eprubete utilizând pipete gradate sau automate.
Sterilizarea prin încălzire Însămânţarea prin Însămânţarea urinii cu ansa
la incandescenţă a ansei epuizarea inoculului calibrată
bacteriologice cu buclă

Însămânţarea cu tampon Însămânţarea în mediul lichid cu pipeta Pasteur

21
Însămânţarea cu ansa cu buclă a unui Însămânţarea mediului TSI (înţepare cu ansa a porţiunii
inocul de E. coli de pe Levine în bulion nutritiv drepte şi însămânţare în striu a porţiunii înclinate)

Sterilizarea prin încălzire Însămânţarea prin înţepare Însămânţarea cu tamponul

la incandescenţă a cu ansa dreaptă a mediului a unei culturi de stafilococ în
ansei drepte agar cu bilă-esculină mediu lichid (bulion nutritiv)

22
Incubarea culturilor însămânţate pe mediul agar ciocolat (geloză şocolatie) în
microaerofilie (Haemophilus influenzae)

Tehnici de izolare pentru anaerobi

Tehnica OTT Incubarea mediilor însămânţate
în anaerojar cu catalizator chimic

23
 Incubarea mediilor agar ciocolat (geloză şocolatie) însămânţate cu o secreţie purulentă introduse
într-o pungă de plastic cu catalizator chimic pentru anaerobioză

Cultivarea virusurilor
1) inocularea în culturi de celule:
-de obicei, se inoculează cu acelaşi produs patologic o cultură primară şi o linie celulară.
-se aleg culturile de celule unde virusul produce rapid un efect citopatic şi examinarea se face la
microscopul inversat.

Colă cu cultură de celule inoculată cu virusul Polio 1:

ECP prezent (metabolism celular modificat, culoare roşie cu roşu fenol)

Efectul citopatic (ECP) poate fi:

a) în focar
-celule rotunjite şi agregate în grămezi sau ciorchine de strugure, cu nucleu picnotic şi care se
detaşează de pereţii tubului (la Adenovirusuri);
-dacă se produce liza totală a celulelor este un ECP de tip degenerativ (la Enterovirusuri).
b) ECP de tip sinciţial - prin formarea de sinciţii (celulele fuzionează şi rezultă o masă citoplasmatică
cu mulţi nuclei) şi după colorarea celulelor se constată incluzii acolo unde virusul se multiplică şi

24
anume: în nucleu (Adenovirus, Herpesvirus) sau în citoplasmă (Paramyxovirus, virusul rujeolei,
virusul rabic) sau atât în citoplasmă cât şi în nucleu (Citomegalovirus).

2) inocularea în oul embrionat

- embrionul atinge vârsta de inoculare corespunzătoare pentru virusul de inoculat şi se determină pe
ovoscop viabilitatea embrionului, respectiv poziţia embrionului şi a camerei cu aer.
-inoculare se poate face: în cavitatea alantoidiană (Myxovirusuri), în cavitatea amniotică (pentru
Myxovirusuri şi Paramyxovirusuri), în sacul vitelin (pentru Arbovirusuri), pe membrana corio-
alantoidiană (pentru Arbovirus, Poxvirusuri, virusul Herpes simplex).

3) inocularea la animale de laborator (azi considerată o metodă aproape abandonată) se

poate efectua:
- subcutanat în regiunea retrooccipitală: pentru virusurile Coxsackie (la şoricei de 24-
48 ore);
- intracerebral pentru virusul rabic, Arbovirusuri, virusul Herpex simplex;
- intra-nazal pentru virusurile gripale (virusuri Influenzae).

25