Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Boli genetice
Includ afectiuni determinate de mutatii genetice si anomalii cromozomiale Genetica medicala include si boli multifactoriale conditionate genetic sau cu predispozitie genetica (factorii genetici au o contributie de 50%)
Boli mitocondriale
-mutatii in genomul mitocondrial cu afectarea productiei de energie -60 de boli rare
Boli multifactoriale
-distributie familiala -nu se transmit mendelian -interventia unor factori ereditari care interactioneaza cu factori
de mediu
Boli cromozomiale
Produse de modificari in nr si structura cromozomilor vizibile la microscop Frecventa anomaliilor prin studii la n.n este de 9-10 n.n vii Anomaliile neechilibrate (prezenta suplimentara sau absenta unor segmente cromozomiale) determina sdr plurimalformative Anomaliile echilibrate (modificarea pozitiei unuia sau mai multor segmente cromozomiale) nu modifica fenotipul dar genereaza tulburari de reproducere
Metode de explorare
Analiza clinica si paraclinica a fenotipului persoanelor afectate Studiul familiei in vederea stabilirii persoanelor afectate, a modului de transmitere a caracterelor ereditare (autozomal dominant(AD), autozomal recesiv(AR), transmitere legata de sex si a ereditatii multifactoriale) Analiza cromozomilor
Analiza cromozomilor
Cromozomii = organite nucleare ce fixeaza intens coloranti bazici si transporta materialul genetic Sunt usor de analizat in stadiul de metafaza al mitozei deoarece se afla in acelasi plan in placaecuatorialasisuntbineindizidualizati In acest stadiu sunt alcatuiti din 2 cromatide unite la centromer si delimitate la capete prin telomere
Structura cromozomilor
Benzile cromozomice sunt specifice fiecarui cromozom ( markeri citologici ai structurii interne heterogene a cromozomilor) Benzile G -obtinute prin digestia cntrolata cu tripsina si colorate cu Giemsa; benzile Q colorare cu fluorocrom; benzile R ( dispozitie inversa a benzilor G)
Culturi celulare Blocarea in metafaza cu substante ce inhiba fusul de diviziune(colchicina, colcemid) Solutia salina hipotona (KCl 0,075M) pentru spargerea celulelor Fixarea celulelor, etalarea pe lama microscopica Bandarea si colorarea cromozomilor Examenul microscopic al preparatului : scanarea, identificarea si sortarea pe baza unui soft specializat a cromozomilor pe baza dimensiunilor, morfologiei si aspectului bandarii
I cromozomii obtinuti dupa scoaterea din cultura sunt uniform colorati si au putine repere pentru identificarea lor II bandarea cromozomilor se obtin cromozomi cu o structura specifica de benzi alternative intens colorate si putin colorate ( aceste tehnici permit identificarea precisa a fiecarui cromozom) III tehnici de citogenetica moleculara - FISH
FISH
Citogenetica moleculara Principiu: hibridizare prin complementaritate a unei sonde ADN cu o anumita regiune a unui cromozom Pentru a fi evidentiate dupa hibridizare, sondele sunt marcate cu un fluorocrom(vizibil la microscopul in UV)
FISH
Cariotipul
Cariotip aranjarea sistematizata a cromozomilor unei celule ISCN ( International System for Human Cytogenetics Nomenclature) a stabilit o serie de abrevieri Formula de baza are 3 itemi separati de virgula:
primul precizeaza nr de cromozomi (46); al doilea constitutia cromozomilor sexuali (XX, XY); al treilea anomaliile de nr si structura ale autozomilor ;
mozaicul cromozomial- indicat prin diagonala(/) ce separa caritipurile liniilor celulare componente
Cariotip-bandare GTG
Tip de anomalie
Constitutionala dobandita
Omogena mozaic
Autozomala gonozomala
Somatica germinala
Anomalii cromozomiale
Celulele somatice normale sunt diploide (n=46) Celulele sexuale normale sunt haploide (n=23) Anomalii cromozomiale numerice:
I. Poliploidiile = prezenta in plus a unuia sau mai multor seturi haploide de cromozomi ( 3n =69 triploidie; 4n=92 tetraploidie) II. Aneuploidii: Monosomii = prezenta in celula somatica a unui singur cromozom, in locul unei perechi de cromozomi(2n-1); singura monosomie compatibila cu viata monosomia X Trisomii = prezenta in celula somatica a 3 exemplare ale aceluiasi cromozom (2n+1)in locul perechii normale ( majoritatea trisomiilor complete sunt incompatibile cu viata exceptie trisomia 21,18 si 13 numai in mozaic) In cazul anomaliilor gonosomale sunt posibile tetrasomii/pentasomii
Poliploidiile
Poliploidiile = prezenta in plus a unuia sau mai multor seturi haploide de cromozomi ( 3n =69 triploidie; 4n=92 tetraploidie) cauza dispermia (fecundarea unui ovul de doi spermatozoizi); rar, fertilizarea unui gamet normal (n) de un gamet diploid (2n): spermatozoid (diandrie), ovul (diginie); produc modificari majore ale fenotipului, de obicei cu efect letal
Aneuploidii
Monosomii = prezenta in celula somatica a unui singur cromozom, in locul unei perechi de cromozomi(2n-1); singura monosomie compatibila cu viata monosomia X Trisomii = prezenta in celula somatica a 3 exemplare ale aceluiasi cromozom (2n+1)in locul perechii normale ( majoritatea trisomiilor complete sunt incompatibile cu viata exceptie trisomia 21,18 si 13 numai in mozaic) In cazul anomaliilor gonosomale sunt posibile tetrasomii/pentasomii
Anomalii structurale
Ruperea cromozomilor si reunirea anormala a capetelor cromozomilor rupti Anomalii ce implica un singur cromozom -deletii (terminale; interstitiale) -cromozomi inelari -duplicatii -inversii (pericentrice, paracentrice) -izocromozomi(prezenta in dublu exemplar a unuia dintre
brate)
(implica
Anomalii neechlibrate
Consecintele fenotipice
a) consecintele anomaliilor cromozomiale neechilibrate
-dezechilibrul genetic determina o serie de semne : tulburari de crestere prenatala si postnatal, dismorfism craniofacial, anomalii congenitale majore multiple, displazii, dermatoglife anormale, alterari ale SNC, tulburari ale functiei gonadale
b) anomalii echilibrate
-fenotip normal consecinte reproductive serioase (3-6% cupluri sterile sau cu avorturi spontane AV)
N.N ( talie, greutate mici; hipotonie musculara; hiperextensibilitate, capul: brahicefalie,occiput turtit, fontanele largi; fata rotunda,plata,epicantus (repliu unghi intern ochi), fante palpebrale oblice in sus si in afara, nas mic turtit, gura deschisa, protuzia limbii, gat scurt;maini scurte, late, brahidactilie, clinodactilie deget V.
Sindromul Down
Analiza citogenetica este obligatorie in fiecare caz pe baza ei se calculeaza riscul de recurenta(RR) si se acorda sfatul genetic -trisomie libera /omogena RR 1% (femei <30 ani); pentru
cele >30 ani RR acelasi cu cel determinat de varsata materna) -trisomie prin mozaic RR <0,1% (accident mitotic)
-trisomie prin translocatie neechilibrata (obligatoriu analiza cromozomiala la ambii parinti): De novo: RR <1% Translocatie prezenta la tata RR <1% Translocatie prezenta la mama: translocatie robertsoniana intre cromozomi acrocentrici neomologi RR 10%; t(21;21) RR 100%
Carriotip-trisomie 21
Cariotip - t(21;21)
Patogenie trisomia cromozomului 21 sau mai exact a regiunii 21q22 (numita DSCRDown Syndrome Critical Region) aici se gasesc genele care prin efect de dozaj produc majoritatea semnelor clinice caracteristice S. Down. Evolutie/prognostic: infectii respiratorii frecvente, dezvolta leucemii, epilepsie, tulburari vizuale, >40 ani dementa senila precoce
Produs printr-o deletie a bratului scurt al cromozomului 5 (5p-) Incidenta: 1/50 000 de nasteri Simptomatologie : plans caracteristic, dismorfism cranio-facial:microcefalie,facies round, hipertelorism,epicantus,urechi jos inserate, retard mental (RM) sever, malformatii cardiace si genito-urinare Evolutie/prognostic : evolutie cu RM sever, supravietuire variabila Majoritatea cazurilor sunt sporadice doar 15% sunt urmasii unui parinte purtator al unei translocatii echilibrate
Sindromul Turner
Incidenta:1/2500-3000 n.n de sex feminin Simptomatologie: neonatal:talie, greutate mici; limfedem fata dorsala a
mainilor si picioarelor;gat scurt, exces de piele pe ceafa, pterigium coli (pliu cutanat pe fata laterarala a gatului), distanta intermamelonara mare
Sindromul Turner
Analiza citogenetica: Testul cromatinei X (testul Barr) Analiza cromozomiala obligatorie Evolutie/prognostic:depistarea precoce permite folosirea unei terapii eficace cu hormoni de crestere si prepubertar cu estrogeni. Pot apare:tiroidite autoimune, HTA, DZ, obezitate
Sindromul Turner
Etiopatogenie: -2% din sarcini prezinta monosomie X -cauzele monosomiei nu se cunosc -AV spontane a 95% din embrionii cu monosomie X se datoreaza probabil haploinsuficientei -nu se stie explicatia ca desi letalitatea in utero a monosomiei X este mare, n.n cu aceeasi anomalie supravietuiesc fara probleme majore
Sindromul Turner
Sindromul Klinefelter
Trisomia XXY (trisomie gonosomala) Incidenta 1/1000 n.n de sex masculin Simptomatologie: copilarie: statura inalta, aspect gracil, dificultati de
adaptare scolara
Sindromul Klinefelter
Bolile monogenice
Sunt afectiuni produse de mutatii ale unei singure gene; aceste mutatii se transmit mendelian: AD, AR sau legate de X = boli mendeliene ( repertoriate in catalogul Mendelian Inheritance of Man (MIM)
Metode de explorare
Diagnostic molecular = noi tehnologii de diagnostic care au drept obiect de studiu ADN-ul si ARN-ul celular, urmarind identificarea mutatiilor si polimorfismelor genice implicate in producerea bolilor Tehnici de baza: -izolarea ADN -sectionarea cu enzime de restrictie -separarea fragmentelor prin electroforeza (EF) in gel -amplificarea in vitro a secventei ADN (PCR) -hibridizarea acizilor nucleici (metoda de transfer Southern)
Din tesuturi sau culturi celulare, cel mai des se utilizeaza sange periferic Metoda de izolare consta in inlaturarea proteinelor (cu ajutorul detergentilor si proteinazei K); a lipidelor (prin extractia fenolcloroform), a ARN-ului (prin tratare cu RNaza)
Enzimele de restrictie au un grad inalt de specificitate;scaneazaADN-ul si se opresc cand recunosc o secventa nucleotidica specifica = situs de restrictie ER fragmenteaza ADN-ul intr-un numar definit, caracteristic si reproductibil de fragmente = harta de restrictie Clivarea ADN-ului unor persoane diferite din populatie cu aceeasi ER fragmente cu lungimidiferiterezultandunpolimorfismal lungimiifragmentelorderestrictie(RFLP) marker in diagnosticul unor boli genetice
Datorita gruparilor fosfat incarcate negativ, in prezenta unui camp electric, fragmentele vor migra spre anod O data cu esantionul ADN se pun sa migreze si markeri ADN cu marime cunoscuta; ofera posibilitatea calcularii lungimii moleculelor din esantion
EF in gel de agaroza -separa fragmente ADN 0,120kb Ef in gel poliacrilamida-(3,5%) frg 1000-2000kb sau (20%) 6-100 nucleotide EF in camp electric pulsatil -frg 5Mb
Amplificare exponentiala a ADN-ului pornind de la cantitati mici Principiul extensiei unei amorse (primer sau amplimer) 2 oligonucleotide care reproduc o secventa de 1525 nucleotide situate la capatul 3' a celor doua catene ale segmentului de ADN; declanseaza sintezaADNdupamatritafragmentului Tehnologie automatizata in 3 etape:
I denaturarea ADN la (95 C)
PCR
Extragerea ADN genomic Fragmentarea prin clivare cu ER Separarea fragmentelor in gel de agaroza Denaturarea in mediu alcalin a frg bicatenare Transferarea moleculelor monocatenare pe un suport solid(filtru de nitroceluloza sau nylon) Hibridizarea frg cu o sonda monocatenara specifica unei gene sau marker genotipic , marcata radioactiv Spalarea: heteroduplexul puternic fixat pe filtru Punerea in evidenta a duplexului dupa contactul filtrul cu un film foto (autoradiografie) Evidentiaza 2 tipuri de mutatii : deletii sau insertii
Permit detectarea mutatiilor Mutatia = orice modificare in secventa sau aranjarea nucleotidelor din ADN Mutatiile au consecinte genotipice (asupra expresiei genei) depind de tipul si localizarea in structura genei (la nivelul transcriptiei, procesarii mARN, al translatiei) Mutatiile au efect fenotipic (asupra proteinelor)mutatiile in diferite regiuni din structura genei produc o modificare a structurii proteinei ( pierderea functiei, castigul functiei, achizitionarea unor proprietati noi de catre proteina mutanta)
Bolile monogenice
Boli enzimatice (erori innascute de metabolism) Boli prin anomalii ale moleculelor de transport Boli prin anomalii ale proteinelor structurale (DMD) Boli prin anomalii ale proteinelor implicate in comunicarea intercelulara si controlul dezvoltarii (neurofibromatoza) Boli ale proteinelor implicate in controlul homeostaziei extracelulare (hemofilia)
Fenilcetonuria (PKU)
Boala AR a metabolismului fenilalaninei Mutatia genei PAH (localizata pe cromozomul 12q 24.1) codifica pentru enzima fenilalanin hidroxilaza ce transforma fenilalanina in tirozina Incidenta: 1:15 000 n.n
Fenilcetonuria
Clinic: pigmentatie cutanata redusa (par blond, ochi
albastri) determinata de deficitul de tirozina si un precursor al melaninei; tulburari neurologice, retard mental; mirosulparticularalurinei(desoarece)
Genetica: gena PAH a fost descoperita in 1986; are mare heterogenitate alelica (mutatii diferite in acelasi locus care produc fenotipuri asemanatoare clinic);au fost descrise peste 400 de mutatii, 6 fiind responsabile de 2/3 din cazuri
Fenilcetonuria
Fenilcetonuria
1/3 din cazurile cu hiperfenilalaninemie prezinta deficit ale unor enzime implicate in metabolismul tetrahidrobiopterinei (BH4) un cofactor al PAH Excluderea fenilalaninei din alimentatie nu este eficienta deoarece BH4 este cofactor pentru enzime ce intervin in sinteza unor neurotransmitatori; necesita suplimentarea cu L-DOPA
Fenilcetonuria
Fenilcetonuria
Tratament: - reducerea aportului de fenilalanina - momentul initierii cat mai precoce - valoarea pentru fenilalanina sa se mentina intre 2-10mg/dL (preferabil 6mg/dL)
Mucopolizaharidoze(MPZ)
Boli cu evolutie progresiva Majoritatea se transmit autosomal recesiv(AR) exceptie MPZ II- transmitere legata de X Cauza: acumularea intralizozomala in exces a MPZ acide datorita deficitului unor enzime lizozomale MPZ acide ( glicozaminoglicani) se leaga de proteine formand proteoglicani (constituienti ai tesutului conjunctiv) Enzimele lizozomale degradeaza aceste macromolecule in componenti mai mici: heparan sulfat, dermatan sulfat, keratan sulfat (produsi ai unui proces de degradare incompleta acumularea acestora interfera cu functia celulei)
Aspecte clinice
SNC: hidrocefalie, retard mental, instabilitate atlantoaxiala Cardiac: angina (secundar aterosclerozei); disfuntii valvulare, HTA, insuficienta cardiaca Pulmonar: boala obstructiva, trahee/cai bronsice inguste; apnee in somn Oftalmologic: opacifiere corneeana, scaderea acuitatii izuale, glaucom, papiloedem cronic, degenerare a retinei ORL : surditate de conductie, neurosenzoriala; infectii, deformari ale oaselor mici Musculoscheletal: statura mica, blocarea articulatiilor/hiperlaxitate; sdr de tunel carpian
Deces in jurul varstei de 10 ani MPZ I (Scheie) - debut la varsta de 5 ani; statura normala; inteligenta normala, speranta de viata normala
MPZ II (Hunter)
Deficit de iduronat sulfataza; urinar se detecteaza dermatan si heparan sulfat Debut la 2-4 ani Transmitere ereditara legata de X Forma severa: Clinic: leziuni ale pielii, neurodegenerare progresiva (RM, comporament agresiv); degenerare a retinei, deformitati ale scheletului, trasaturi faciale grosolane Deces 10-15 ani Forma usoara: rata progresiei mai scazuta; inteligenta normala; deces 16-17 ani
MPZ IV (Morquio)
Deficit de N acetilgalactozamin 6 sulfataza; in urina se detecteaza keratan sulfat Clinic: manifestarile ortopedice sunt pe primul plan(genu valgum, statura ica, laxitate ligamentara, displazie spondiloepifizara,instabilitate atlantoaxiala Forma severa deces 30-40 ani; forma usoara speranta de viata normal
MPZ VI (SLY)
Deficit de -glucuronidaza, in urina se detecteaza dermatan si heparan sulfat Este rara Forma severa se asociaza cu hidrops fetal, hepatosplenomegalie
Test screening
Se poate efectua screening prenatal (teste moleculare din vili corionici in saptamana 12 de gestatie sau prin amniocenteza in saptamana 15-18 de gestatie) Postanatal: teste biochimice (dozarea in urina a dermatan,heparan, keratan sulfatului)
Management
Radiografii: dysostosis multiplex (macrocefalie, suturi inchise prematur, sela turcicainformadeJ,calvariumingrosat; dentitie (malpozitie); clavicule scurte, groase, neregulate; cifoza; coxa valga; diafize mari cu metafize neregulate CT cranian : pt hidrocefalie Ecografie cardiaca Ex Oftalmologic : electroretinografie ORL: audiograma, potentiale evocate
Tratament
Terapie genica - Laronidaza imbunatateste capacitatea de a merge si functia pulmonara; folosit mai ales in MPZ I (Hurler) ORL : protezare auditiva Transplantul de maduva osoasa: efecte benefice asupra hepatosplenomegaliei , obstructiei de cai aeriene si asupra bolilor cardio-pulmonare Chirurgical: hidrocefalia (shunt ventriculoperitoneal; transplant de cornee; inlocuire de valve; traheostomie ; ortopedic
Fibroza chistica
Cea mai frecventa boala genetica cu transmitere AR ~ 1 la 3300 sunt nascuti cu FC in populatia caucaziana Frecventa heterozigotilor 1:22- 28 Heterozigotii pentru unele mutatii prezinta avantaj selectiv, mutatia conferind protectie pentru unele boli infectioase
Cresterea concentratiei de Na+ si Cl- in secretiile sudorale Tuse, wheezing, insuficienta respiratorie Infectii pulmonare ex. pneumonie/bronsita Apetit prezent/greutate scazuta
In 1989 gena CFTR a fost clonata Este o gena de 230kb localizata pe cromozomul 7q31.3 Gena contine 27 de exoni si codifica o proteina de 170 kD Recent gena a fost inclusa in familia genelor transportorilor ABC ca si ABCC7 (cu caseta de legare la ATP)
Gena CFTR codifica o protein canal transmembranar de Cl-, cu 5 domenii functionale: 2 domenii transmembranare (MSD), 2 domenii de legare ATP (NBD) si un domeniu reglator cu mai multe situsuri de fosforilare
Au fost descrise peste 1000 de mutatii MutatiaF508 are o frecventa de circa 70% in tarile Europei de Nord si circa 32% in Romania Dintre alte mutatii doar 7 au frecventa ce depaseste 0,5% 1677delTA este o mutatie frecventa in Balcani si Asia mica
Prima mutatie identificata Deletie de 3 nucleotide reprezentind codonul pentru Phe din pozitia 508 a proteinei Are o frecventa crescuta datorita avantajului selectiv care il confera heterozigotilor prin reducerea pierderilor de apa in cazul holerei Indivizii homozigoti pentru mutatie fac CF si nu se reproduc
Heterogenitate clinica datorata heterogenitatii alelice , a genelor modificatoare si factorilor de mediu Corelatia intre tipul mutatiei si functia pancreatica :
Mutatiilenonsens/F508 insuficienta pancreatica Mutatiile ce produc o proteina partial functioanala nu altereaza functia pancreatica
Purtatorii aceleeasi mutatii au grad crescut de variabilitate a alterarii pulmonare Nu au fost identificate gene modificatoare a fenotipului pulmonar Au fost identificate gene modificatoare ce influenteaza ileusul meconial localizat pe cromozomul 19q13
Masoara concentratia de Cl- si Na+ in secretiile sudorale Valoare de referinta pentru Cl- din secretia sudorala este de 40 mmol/L Peste 60 mmol/L diagnostic de FC Doua masuratori pozitive in 2 zile separate pun diagnosticul de FC La interpretarea rezultatului este important istoricul familial, aspectele clinice si varsta pacientului
In UK toti noi nacutii sunt supusi screening-ului Se recolteaza sange la 6 zile dupa nastere Se detecteaza nivelul crescut al tripsinogenului Tripsinogenul crescut se poate datora blocarii ductului pancreatic in utero la bolnavii de FC Programul de screening identifica circa 10% din cazurile noi de FC
Exista teste genetice comerciale numai pentru mutatiile cele mai frecvente In cazul mutatiilor rare este nevoie de secventiere directa a genei Pe piata exista kit-uri ce permit identificare a pana la 30 de mutatii din gena CFTR (innogenetics) Testarea genetica nu poate prezice gradul de severitate a bolii
Kinetoterapie drenaj postural Tratament antibiotic pentru infectii pulmonare Alte medicamente
Antiinflamatori Bronhodilatatoare
Dieta bogata caloric (grasimi, proteine) Enzime pancreatice orale (kreon) Suplimentarea cu vitamine A, D, E si K
Aerosolii cu ATP sau UTP au efect terapeutic la nivelul cailor respiratorii prin cresterea secretiei canalului de Cl Ca-dependent ATP si UTP sunt rapid degradati avand efect terapeutic scurt Au fost sintetizati liganzi pentru receptorii purinergici (P2Y2) cu stabilitate superioara ATP si UTP
Unii compusi din clasa aminoariltiazolici au actiune de chaperone moleculare Acesti compusi au fost descrisi ca fiind implicati in marirea stabilitatii la nivelul membranei a proteineimutanteF508, efectiv corectand efectele mutatiei De asemenea, quinazolinone VRT-325 pot corecta efectul si a altor mutatii in CFTR Derivatii acestor compusi sunt acum in stadiul de studii clinice
Consultul genetic = act medical specializat si complex prin care se pune sau se evalueaza diagnosticul unei boli, se precizeaza componenta genetica si se acorda sfat genetic bolnavului sau familiei sale Sfatul genetic = proces de comunicare in care rudele cu risc sau bolnavul sunt sfatuiti in ceea ce priveste: natura si consecintele bolii, riscul de recurenta si caile prin care riscul poate fi redus sau prevenit
Sfatul genetic
Ajuta sa inteleaga diagnosticul si evolutia probabila a bolii Sa precizeze modul in care factorii genetici contribuie la producerea bolii, modul ei de transmitere si riscul de recurenta Sa inteleaga optiunile si alternativele reproductive
Arborele genealogic
Incepe in mod obisnuit cu individul care solicita consultatia genetica si care poate fi sau nu afectat, el se numeste consultand Pentru prima persoana care aduce familia in atentia medicala se foloseste termenul de proband (sau caz index) In realizarea arborelui genealogic se folosesc simboluri si informatii standard
Arborele genealogic