Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Lucrarea 2 Descrierea Fenomenelor de Difuzie Ci Osmozc2a6a
Lucrarea 2 Descrierea Fenomenelor de Difuzie Ci Osmozc2a6a
Difuzie:
Datorit energiei lor cinetice, moleculele unui fluid se gsesc intr-o continu micare,
numit agitaie termic; aceasta nceteaz doar la temperatura de zero absolut.
Difuzia
este
fenomenul
de
ptrundere a moleculelor unei substane
(lichide sau gazoase) printre moleculele altei
substane (lichide, gazoase sau solide).
Difuzia se produce ca urmare a tendinei
fluidelor de a ocupa ntreg volumul aflat la
dispoziie, datorit agitaiei termice. Acest
proces conduce la egalizarea diferenelor de
concentraie, presiune sau temperatur, fiind
o expresie a tendinei naturale a sistemelor
de a tinde spre starea de echilibru.
Fenomenul de difuzie este caracterizat de
dou legi, cunoscute sub numele de legile
Fick. n cazul difuziunii, prezena unei
membrane prin porii creia s se realizeze
fenomenul este facultativ.
Fig 1 Difuzia [www.williamsclass.com/SeventhScienceWork/ImagesCellBricks/Diffusion]
Difuziunea prin intermediul unei membrane este guvernat de prima lege a lui Fick:
Unde
kT
6r
unde T este temperatura absolut, k este constanta lui Boltzmann, este vscozitatea i r este
raza particulelor.
Fenomenul de difuzie st la baza a numeroase schimburi de substan care au loc n natur ntre
organisme sau n interiorul unui organism. n toate aceste cazuri ns, substanele care difuzeaz
nu sunt n contact direct, ci sunt desprite printr-o membran. Aceast membran poate fi
permeabil n mod diferit pentru substane diferite, caz n care se numete selectiv permeabil.
Un caz important este acela al membranelor care sunt permeabile pentru solventul unei soluii,
dar nu sunt permeabile pentru solvit, numite membrane semipermeabile.
Osmoz:
Fenomenul de difuzie selectiv care are loc n cazul a dou soluii de concentraii diferite,
desprite printr-o membran semipermeabil, poart numele de osmoz. Efectul osmozei este
egalizarea concentraiilor celor dou soluii, atta timp ct osmoza nu este mpiedicat de alte
cauze externe.
n cazul unei membrane strict semipermeabile, osmoza este singurul fenomen de
transport transmembranar.
Mecanismele osmozei
Explicarea
molecular-cinetic
a
fenomenului este urmtoarea: trebuie s
vedei soluia ca fiind un amestec de dou
substane, ap (solvent) i solvit (sau
solvii), ambele formate din molecule, dar
de dimensiuni diferite; moleculele
solventului vor fi ntotdeauna mai mici
dect cele ale solvitului. n acest fel va fi
mai evident pentru dumneavoastr faptul
c ambele specii moleculare se supun
acelorai legi, nici una nefiind privilegiat.
De exemplu, ntr-o soluie de sare (NaCl) n ap, solventul este reprezentat de moleculele de ap,
iar solvitul este reprezentat de particule de
i de
II
F
Mb.
Semipermeabil
= molecul de ap
= molecul de solvit
I= compartiment cu solvent pur
II= compartiment cu soluie
F= flux net de solvent
Acest fenomen apare numai n condiiile existenei membranei. Solventul difuzeaz prin
membran n cele dou sensuri, dar viteza de trecere a solventului pur spre soluie este mai mare
dect trecerea n sens contrar. Aceast diferen de flux este singura responsabil de fenomenul
de osmoz.
Fluxul net rezultant face ca nivelul lichidului din II s creasc, dezvoltndu-se n acest
compartiment o presiune; n momentul n care aceast presiune; va fi echilibrat de presiunea
hidrostatic
ascensiunea n II se oprete.
Dac s-ar exercita o presiune static asupra soluiei din compartimentul II, numrul
moleculelor de solvent care ar ajunge n unitatea de timp la faa membranei dinspre acest vas ar
crete. Cnd numrul acestora egaleaz numrul moleculelor de solvent ce ajung n unitatea de
timp la membran n vasul I, se stabilete un echilibru dinamic ntre cele dou compartimente.
Aceast presiune ar reprezenta presiunea osmotic a soluiei din I.
Presiunea osmotic (
aduce n echilibru cu solvent pur, separat de ea printr-o membran semipermeabil, adic pentru
a mpiedica orice flux de solvent ntre cele dou compartimente. n exemplul menionat anterior:
Valoarea numeric a presiunii osmotice a unei soluii poate fi msurat experimental prin
diverse tehnici. De asemenea, ea poate fi calculat teoretic n cazul soluiilor pentru care poate fi
aplicat un model asemntor celui al gazelor ideale.
unde,
k= constant
C= concentraia ponderal a soluiei (g/l)
M= masa molar a solvitului
T= temperatura absolut
Dac notm cu n numrul de moli dizolvai n volumul de soluie V, vom avea:
~C
), valoarea lui
valabil pn n
):
~ (1+
* V=n * R* T
Legea amestecurilor:
diferite este egal cu suma presiunilor osmotice determinat de fiecare substan n parte.
Soluii izo-, hipo-, hipertone:
Se impun cteva definiii: dou soluii A i B care au aceeai presiune osmotic, deci ntre
ele nu ar exista flux de solvent n prezena unei membrane semipermeabile, se numesc
izoosmotice (izo=egal). Dac A are
Avnd n vedere consideraiile de mai sus, soluiile se pot clasifica n adevrate i false,
dup cum se supun sau nu legilor osmozei. Soluiile adevrate sunt cele cristaloide neelectrolite
diluate, la care numrul de particule corespunde exact cu numrul de molecule dizolvate.
Soluiile false sunt cele cristaloide i cele coloidale.
A.3 Osmolalitate i osmolaritate. Calculul presiunii osmotice
S considerm o soluie coninnd:
moli de solvent de mas molar
moli de solvii de mas molar
V= volumul soluiei
= volumul molar (al solventului)
= volumul molar al solvitului
Pentru o soluie electrolitic sau neelectrolitic, se pot defini:
a) Concentraia molar (c) (molaritatea sau osmolaritatea). Reprezint numrul de
soluie/litru:
Concentraiile molare sunt aditive; ele sunt aplicabile att pentru solvent, ct i pentru solvit.
Osmolaritatea se exprim n miliosmoli/ litru de soluie.
b) Molalitatea (m) sau osmolalitate. Reprezint numrul de moli de solvit considerat per
unitate de mas (n general pe kg) de solvent.
unde,
reprezint masa solventului, n grame.
Molalitile sunt aditive; ele sunt aplicabile dect solvenilor.
n cazul soluiilor apoase foarte diluate, volumul particulelor din soluie este neglijabil n raport
cu volumul solventului, iar molaritatea i molalitatea pot fi confundate. n acest caz un litru de
ap cntrete aproape 1 kg. Aceast aproximaie nu este corect n cazul plasmei sanguine,
deoarece volumul proteinelor nu este neglijabil.
Osmolalitile se exprim n miliosmoli/kg de solvent.
Osm.
exista proteine cu rol de canale pentru molecule de ap. Fiecare celul sau compartiment
subcelular delimitat (nucleu, vacuol, lizozomi etc.) reprezint compartimente microscopice n
care intervin fenomenele osmotice. Se poate vorbi, deci, de presiunea osmotic a oricrui
compartiment lichidian delimitat de o membran. Osmoza intervine i n realizarea funciei
normale a glomerulului renal.
Cea mai mare parte a lichidelor din organism sunt soluii complexe. Pentru aceast
osmolaritate se calculeaz prin sumarea tuturor concentraiilor molare ale constituenilor, aa
cum s-a menionat deja.
Att variaiile n plus ct i cele n minus ale osmolaritii diferitelor sectoare lichidiene
ale organismului pot amenina nsi existena individului. Exemplu: o deshidratare celular
produs ca urmare a unei evaporri masive a apei prin transpiraie abundent. Pierderea unei
cantiti mari de ap va fi urmat de creterea presiunii osmotice a lichidelor extracelulare. n
aceste condiii apa intracelular se va deplasa extracelular-osmoz la nivelul membranei celulare,
selectiv permeabile. Diminuarea volumului lichidian intracelular va altera metabolismul celular.
Intensitatea i durata unei astfel de deshidratri condiioneaz reversibilitatea sau ireversibilitatea
alterrilor proceselor celulare.
Este sugestiv de menionat c la un deficit de peste 15 % ap din greutatea corporal,
pentru un interval de timp de 6-7 zile, survine ncetarea funciilor vitale ale organismuluimoartea.
Strile hipo- i hiperosmolare, n perioada de reversibilitate, pot fi corectate prin aport
sau eliminri lichidiene controlate, dar aceasta necesit n prealabil avaluarea osmolaritii
diferitelor comportimente lichidiene.
, glucoz sau ureea i alcoolul care nu au acest efect; n aceste cazuri osmolaritatea
hiperosmolare se pot datora: creterii cantitii de solvit; scderii cantitii de solvent; unui aport
exogen de solvent i solvit. Tratamentul implic rehidratare prin indigestie sau prin perfuzie cu
soluii fiziologice hipotone.
Strile hipoosmolare sunt definite de scderea osmolalitii sub 235-300mOsm/kg ap i
de scderea
mEq/l
plasm
mEq/l ap plasmatic
Cationi
Total
Anioni :
Fosfai i sulfai
Acizi organici
proteine
Total
143
5
5
2
151,7
5,4
5,4
2,2
155
164,7
103
27
3
109
29
3,2
6
16
6,4
17,1
164,7
155
Lichidele organismului nu sunt soluii ideale, i dei disocierea electroliilor puternici este
complet, numrul particulelor libere care pot s exercite o presiune osmotic este redus, ca
urmare a interaciunilor dintre ioni. De aceea efectul osmotic al unui electrolit n soluie depinde
de concentraia sa efectiv mai mult dect de numrul de echivaleni.
PARTEA PRACTIC
Metil orange
Bicromat de potasiu
Sulfat de cupru
Mod de lucru:
1. Luai trei eprubete coninnd deja o coloan de agar (10 ml gel polizaharidic, n stare
semifluid)
2. Adugai 3ml din soluiile de aceeai concentraie a unor compui colorai, cu masa
molecular diferit.
3. Notai nivelul la care se gsete limita de separaie a celor dou medii, pentru fiecare
eprubet
4. La sfritul orelor de lucrri practice: notai nivelul la care a ajuns soluia colorat i
msurai distana pe care a difuzat.
Datele se noteaz n tabelul de rezultate
Substana
Metil orange
Bicromat de potasiu
Sulfat de cupru
Materiale necesare:
3 eprubete cu agar
Soluii de 5 mM de:
o Metil orange
o Bicromat de potasiu
o Sulfat de cupru
1 mmol
5 mmol
10 mmol
Materiale necesare:
3 eprubete cu agar
Soluii de metil orange de concentraii: 1 mmol, 5 mmol, 10 mmol.
Sistemul obiectiv este alctuit dintr-un sistem centrat de lentile aezate ntr-o anumit
ordine ntr-un tub metalic montat direct sau prin intermediul sistemului revolver la partea
inferioar a tubului microscopului. Obiectivele au notat puterea mritoare care variaz
ntre x10 i x90.
Sistemul ocular este alctuit dintr-un sistem de lentile situate la partea superioar a
tubului microscopului. Puterea mritoare a ocularelor care variaz ntre x5 i x15. Exist
microscoape monoculare i binoculare.
Sistemul de iluminare servete pentru a aduce la obiectul examinat lumina de la o surs
natural sau artificial. Este situat sub platina microscopului i se compune din surs de lumin,
oglind, diafragm i condensor. Unele microscoape au un sistem de iluminare cu bec situat n
piciorul microscopului i oglinda detaabil.
Partea mecanic servete la susinerea prii optice i a obiectului examinat. Ea se compune
din picior, coloan, platin i un dispozitiv de punere la punct format din urubul macrometric i
cel micrometric.
luminoase ale obiectului, percepute separat. Prin urmare, dac se noteaz puterea de rezoluie cu
P(
). Cu ct este mai mic cu att puterea de rezoluie P este mai mare. Distana minim ,
denumit i distana minim rezolutiv sau minimum separabil este dat de formula lui Abbe:
unde:
= lungimea de und a luminii utilizate la microscop
n= indicele de refracie al mediului prin care trece lumina
u= jumtatea unghiului de deschidere a conului luminos ce cade pe obiectiv
Se observ c este cu att mai mic cu ct n i u sunt mai mari. Mrimea (n x sinu) se numete
apertur numeric i poate fi mrit n dou moduri:
1. Mrind indicele de refracie al mediului existent ntre obiectiv i lama ce conine
preparatul: astfel, obiectivele sunt de dou feluri: uscate i umede, dup cum ntre ele i
lamel exist aer sau un mediu cu indicele de refracie mai mare dect 1.
2. Mrind unghiul u, prin construcie
Puterea separatoare a unui microscop optic este, deci, limitat de lungimea de und a radiaiei
utilizate, de indicele de refracie al mediului i de construcia obiectivului, care impune o valoare
maxim a unghiului u.
Puterea de mrire este mrimea numeric egal cu raportul dintre unghiul u sub care se
vede imaginea la microscop i mrimea obiectului AB.
PARTEA PRACTIC
Principiul metodei
Se suprapune imaginea microscopic a obiectului de msurat peste imaginea unei scri
gradate etalonat n prealabil.
Mr
n'
d'
creterea volumului. Dac nsa gradientul transmembranar de presiune osmotic este prea
mare, aceste mecanisme devin insuficiente. n plus hemoglobina care nu poate prsi celula
menine o presiune care atrage n continuare volumul iar dac presiunea osmotic a mediului
extracelular scade n continuare, la un moment dat, fiind depit rezistena mecanic a
membranei, hemoglobina va fi extravazat prin intermediul unor false orificii, fr a se
produce o veritabil rupere. Membrana eritrocitar, de aspect modificat, va include un
coninut electrolitic, lipsit de hemoglobin, aceast nou structur poart numele de fantoma
eritrocitar.
n mecanismul hemolizei i n refacerea integritii membranare dup eliminarea
hemoglobinei un rol important revine i citoscheletului eritrocitar.
Dac introducem hematii normale n soluie de NaCl, hemoliza apare la concentraii de
NaCl de 5g/l i este total la o concentraie de 3 g/l.
n unele stri patologice hemoliza poate apare chiar i n vivo; de exemplu ntr-o maladie
ereditar, n care hematiile sunt mult mai sensibile la variaii de presiune osmotic.
PARTE PRACTICA
Materiale necesare:
Microscop binocular
Lame i lamele de sticl
3 vase Petri
Soluii cu osmolariti diferite:
NaCl 9g/l (mediu izoton)
http://www.linkpublishing.com/video-transport.htm
a. Osmoza la alga ..
Utiliznd microscopul optic, vei observa modificrile unor celule vegetale puse n medii
izoosmotice, hipoosmotice i hiperosmotice.
Cele mai evidente modificri apar n privina volumului i formei celulare. Pentru a le
observa avei nevoie de a msura dimensiunile unei celule prin metoda descris anterior,
micrometria.
Mod de lucru
1. Se pun n cele 3 vase Petri respectiv cca 20 ml mediu hipoton, mediu izoton i mediu
hiperton i n fiecare cteva frunzulie de plant.
2. Se las astfel 20 minute dup care se examineaz la microscop cte o frunz din fiecare
mediu. Pentru a fi examinat la microscop, frunza, aezat pe lama de sticl, se
secioneaz n grosime. Se aeaz fragmentul de frunz pe lama de sticl, apoi se aeaz
pe platina microscopului n aa fel nct frunza s se afle n dreptul orificiului central al
platinei. Se folosete obiectivul x10.
3. Se rotete dispozitivul revolver i se formeaz imaginea cu obiectivul x20, care a fost
folosit i pentru etalonarea micrometrului ocular.
4. Se msoar diametrul longitudinal i transversal pentru un numar de 10 celule; datele se
trec n tabel, n care:
I= mediu izo-osmotic;
II= mediu hipoosmotic;
III=mediu hiperosmotic;
L=diametru longitudinal;
T=diametru transversal;
m=media aritmetic.
I
L
1
2
3
4
5
6
7
8
9
II
T
III
T
10
b. Osmoza la hematii
Pentru a pune n eviden fenomenul de osmoz la nivelul biomembranelor, se poate realiza
un experiment asemntor, dar de data asta utiliznd eritrocitele; acestea reprezinta un model
de studiu deosebit de accesibil n raport cu alte celule animale.
Protocolul de izolare celulara (pentru obinerea eritrocitelor )consta in centrifugarea sangelui
integral urmata de indepartarea plasmei si a stratului superior ( in care se gasesc tromboci
tele si leucocitele) . Dupa centrifugarea sangelui , eritrocitele se resuspenda in soluie de
mani tol 0,3M si se spal. Spalarea consta dint r -o serie de centrifugri si resuspendri in
manitol .Stocarea eritrocitelor s-a facut prin tinerea lor la frigider. ( temperatura fiind cupr
insa intre 4-80 C) , in HBSS (HanksBalanced Salt Solution) continand saruri , glucoza,
bicarbonat de sodium si fosfati .
Mod de lucru
Vei observa dimensiunea transversal celulelor. Se va lucra cu 5 recipiente: n A avei o
suspensie de eritrocite n mediu izoosmotic lor (NaCl 9g/l); n B i B1 avei soluii
hipoosmotice de concentraii diferite (NaCl 3g/l); n C avei soluie izoosmotic (NaCl 9g/l);
n D avei soluie hiperosmotic (NaCl 40g/l).
1. Punei cu o pipet Pasteur cte 1 ml suspensie din recipientul A n fiecare dintre
recipienetele B, C,D.
2. n continuarea la anumite intervale de timp, vei lua cte o pictur din coninutul
recipientelor B, C si D i o vei examina la microscop.
Vei remarca c celulele puse n C nu-i modific dimensiunile. Celulele puse n D se
ratatineaz. Celulele puse n B1 i scoase dup primul interval de timp sunt turgescente iar
cele puse n B sunt parial sau total distruse.
Intervale de timp:
Pentru B- 35 minute
Pentru B1- 35 minute
Pentru C- 20 minute
Pentru D- 30 minute
BIBLIOGRAFIE SELECTIV:
1. Lucrri practice Iasi.