Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
JA l]:
"
ODiCA ED:NTl
IHAttLA
:R
HINCU
AD 1 ALoA
IS
]Alni ttN!
At Ul,TA
lJ I)
NA
lEA DE lEDICINA
Editu
2 uttdatiti gnivcl.sitare,,Dllll 13a de tFf)3"din Calali
estc acreditati de
IN(
SIS
INTRttD CttRE[
ST ll C L
]
"
Biblogr.
LJ p J r JJ rr tt
Flialogtc cc sJ tt
,
practice de
Mehed ,Rodca
.Durbal hina
I
.Hhcu,Mihaela
.Ont,o C Slan
577
ISBN 978.973
www.editura.ugal.ro
edituraQugal.ro
627 380 3
, ': :,1
1' i:'
: f :-1
,1 1
P RIIA A ttOti
J tt l 1111,1
ilu d
oop]1: : III ;ol il l)lfl
:'
2i M
st p lop { toni :)
1, ,1lar 111: 1 :
o131 3:
mln
=FI=
11,a
I=
il,31=:11,
11
):Jt,11111
J11 ,1 1= Url1lo
=1
rit ati)iltli
11,1:
11 (ol l lJil :!anis 1 1ol pl
'ii l,,(li
1::0111,111=n il F11
14F:mal i11,d lo 1111 111111.( 11
i: llia i`J`
=
`,'cO
1,ripl nl
3 11
!,al= elll==111 ct a CI, hl it
11 i= ic Ji
=urio,mp1311110r tOl
'1=:
e at o,:=,
,Ir ti cslo indisPonsabil pont
11`!: ),s c
=in,1 90 13it
`:11
ln3sptit
Si ca ln
(lure de mb ,lo a dat
,:31 do
Je(ce a,1::it,i:in ni c3 le
,
= ldt,
iC )Ta rll Fere,de CJ bz sttbr cdu gehb C ow an nlal , 3nd
An vatt L wenhook(103 desGOperl sdna ta nimc a ceh: br li,prolozo, eL ttn api:
4)(11111
, loo,a
25
25
26
31
31
lie,
in otrid
33
nletta StructuJlo
structunlo celulale
l Tehillca eleclu
if u lor
i amprenlei
ce tlla
un nucleu'
]
f
de ort3an
inb o
formJeaz airmala"om
51
forlna ,c
53
i specianz
l invell ului
54
celular
4.2.2 Ciloplasma
58
42,3 Nudeul
66
i cele
ce
aSemenea,susine c
e cellJa
ln viloa
celulelor.
y
! r i
4.3.l Miloza
4,3.2 Meioza
71
`665problema
sl 1900,care
au microorcanis
dentonstrat c
pian de temene a unu1 0rganism mu1lc lular"punea
dacl,l
74
PARTttA CINCEA
rac lula
ionarea celula
5,lF
5.2 1zolarea,i pullcarea proteinel
embttne
' . :
73
prolozoo
Odatt "e,i
cu in"
90rea prop eblbr genelce,lJdo9te
microo 9aniSrlele
83
le,te
3um
OChlmte
sunl oolule de sine s Ica . Toab studme mOdenlo recunosc ctt atat in
5.2.3 Eleclroforeza
celula este
lelel p
31
81 LiOGRAFIE
80
5.2.2 CrOmallgraia
5.3 Cu unle de celule
Carrd i
78
80
id'i
sunt
63
63
lol
Sutu patoloJCe
Sttld Iconbmporan
ldd es
l.
mettde ttn 00 induzand nl rOsco a)geneuca, mh) ol aol doga lumJ imens de
cuno, n
um la
indlvidual,c ol
n ul m150
de ani a dus la d
85
39
l Palologattd
lerm
201 bd i dh dl l
)
:" 111
Arhetipuriler ceir.rlare
Organismele vii sunt alcituile din celuie care au trdsdirLri comune, e.xistind $ funclionind
impreunA, aceasta fiind unul dintre aspectele unit6{ii iumii vii, Procesele intracelulare care delinesc
viala (metabolismul, reproducerea, schirnbul de informa,{ie cu mediul) se desf6$0are dupi mecanisme
comune, indiferent de tipul organismului siudiai,
Universul bioiogic este alcatuit din doud tipuri de celule
inke care existd deosebirii esen{iale de organizare.
1 1 1111 1
nel
=n
on)nd
,fc,Ii
11lp()
Celulele procariotez * sunt cele mai simple gi priinitive forrne de organizare a vieiii, preceC
eucarioteie ?n evolufia formelor de viald 9i sunt organisme unicelulare (figura 1 .1a), Din aceasta clasi
fac parle bacteriile 9i algele albaske-vezi.
Celulele eucariote3 - sunt celule cu organizare complexi in alcituirea circra se disting kei
parli principale: nucleul (organit al coordonirii proceselor celulare), citoplasma, ce conline numeroase
organite 9i suprafa[a celulari, dispozitiv ce controleazi schimburile cu mediul inconjurltor (flgura 1.1b).
Eucariotele cuprind protozoarele cu nucleu, gi toate metazoarele - plantele 9i animalele, inclusiv omul.
c !
olt ,IIt=
bine i vidu311
. la ceiulele p
2 P calo le se in
lol
sC pttn simpl
cel tl: 10
se ct.nden"az
s nt cattdolslce o i
3`E G
olo
=uni ui
li ,til:
`ial
,( 14 11111 1
ptnen ll
]1 ifll1 elT
1:l
lttLl
ir
11
"
rSmmi pero
e( 0001 :1
Q ,ap lL:
stul oloplasrnei a ttrl o82 m1lice`
aro o cottpattimentare strudu ,1 lunc, n8:
in dto,aSmi Organitt cJ
111
siruc
oollil
acid de ox bonucl l ce o
8 let
n melnbrane de
ci
nH pl
l,t5
ea ci piaslloi.
oompattiment
in4 ma,i
am tma g a
ta idor
Merrbrana
'
SeS
le
'
e ereclrOrtt J
sch e al CelJ/a procao se remaalcFtta slmp e,la de COmparFimerre
com
a Cr
nuci, gr.)
Sttu
cifoplasma comparfi171"
nucd, gr.)
11it 111:
100 nnl
l lt,
1m
Figura 1,2 Olmen siunile relative aie moleculelol, celulelor gi arganisme!ff superioare. P)
Proteinele globulare mici au dimensiuni de cAliva nanometri, complexele moleculare mari cum
sunt ribozomii pot atinge 30 de nm. Dimensiunile organitel'y rnal mari, ca nucleul sau cloroplastele,
sunt exprimate in micrometri, Bacteriile au dimensiuni cuprinse intre 1 qi 5 pm, iar celulele animale
::
111
de
lrl
",11
sunt
= lll,il,()
1: le
rvtt
11,, 1 11(lol
,,
llicroscispi;s i:tk.t;;trt.-u)tca, dalrxlli ;rulerii drr iezolrriir; iiiLrii rrranla.lali tle cea a ilicrus(:0pului
optic face posihlia obser'varea unot dotalii firte alr: strrtclurik:i 0elrilare. in flgura 1,5 sunt prezentatc
comparativ imag;ini de rnicroscopie optica, microscopie electmnic* Ce transmisie 9i de baleiaj.
1=,ic('4 t"''ll:=111'
i le l)c 11
lo
llu 1311 1
4 1
"
13).
:III
C;lq:hririi;
nd
FM
Crii;r,ruiimrrlour:r
ll,licio*ooi.l
p,ca
la
Fracfonarea celubre permite studierea organitelor celulare, izolarea ior 9i caracledzarea lor
din punct de vedere al skucturii gi compczifiei chimice. Peniru a efeclua frac$onarea, celulele kebuie
intii fragmentate mecanic cu formarea unei suspensii numite omogenat celular. 0mogenatul este apoi
supus unei serii de centrifugdd in urma cerora se separi ,,fracfiunite celulare" care conlin organitele
izolate. Aceste organite pdstreazd o bund parte din activitatea lor fiziologici, ceea ce face posibild
studierea func!iilor lor. Compozilia chimici poate fi analizata prin efectuarea in continuare a unor tehnici
de separare a componentelor dintr-un amestec cum sunt cromatografia 9i eleckoforeza.
nlal an d
dllFC
9"J oduhF
12
de asemenea, poate fi studiaE structura lor gi compozi{ia chimic[ prin tehnici de microscopie
gi
fraclionare celularS.
zarea an pHor
lmunOollochim a)Di
to
componen cdubre pot l enttca da10n
ren,ale a anu: ilor cobttnl d
91 p
`
sau prin dettdatta ac u
dbo i do9 o m l
i
lo"nd rin cdutt esb i : de pttzenla suCanardeh genattil a,a cum sc" 0 ea
Care
ptta m e
attyFa
" a sto
lo"zd Fii9Fele bO" mi
de
b
bC=b
ornd
O
"s`
rda lt31
ttao
ap
c are E
iT
RA
:L 1
l T
nu
m FeS de tma n de 50 de
orl.
neasc
: i i f
lll
0.2 1trrl
soicul de eleclroni,
scop
c a elemerlelor sale: p10orul,2`
_
A.Elementele mecanioo
nm)
Uikamicroscop
Mlcroscop cu lumlnd
Micmscop
polarizali
cr conlrast defad
Micmscoape cu lumind
ulkavioleti pentru
-'
fluorescur!i
C SCOapedectronte
::
prO"
'Cu
eze ttor de la
talea
A.2,Coloana microscopului
Microscopul electronic de baleiaj
A4.Tubd mtscopdu
scoapelorFolosile m J diJl
celJlelor
clledeli19JFdJeFaFlliza
u:.
prolecloare,l un dialragm.
lil,folositln sludiul exploralor slruclu :or cu dimensiuni de ordinul
iO:
A, emO le
mecanice
Are tn alc
1)
B,Ebmente op ce
al Zett
macrometHce
10
trlanul r:tinei
WI
i
eli
lil [
lll
s:
:
L:]
IW]
d cJ supenOr,Fx este ala,at excentrc la cap td lnfedor a tubJ preJnta un o ndu drcular,
dreptu!tubulut
discul
infer10r,mob
: f
1
f
nicroscopul fotonic.
,i are rolul de a
c, Diarragmul
5.
sursa de lumln
10g nd l
microscopului.
laleral ,
cu
pttntr ot
conul luminos ce i ep n deschiderea c,cula din talpa
v
CO,densatorui este format dn un Sstem de nJe convergente,mtttale lnt un dspo
mO l alat sub atin are roltt de a focJiza hmlna pe preparatJ m rosco C h funcle deObecttvJ
sau
B. Elementele optice
Sunt impdr{ite in doue sisteme cu roluri 9i localizare diferite:
8.1. Sistemul de iluminare
8,2, Sistemul opiic propriu -zis
1.
Sistemul de iluminare
Confine acele pir,ti ale microscopului care furnizeazi lumina cu care se studiaze preparatul,
Elementele sale componente sunt monlate pe microscop sub nivelul platinei gi sunt reprezentate de
sursa de lumini gi o serie de alte elemente care modifici fasciculul luminos gi traiectul acestuia in
microscop
a.
9i
Microscoapele mai vechi utilizau sursa de lumini artiflciali extemi sau lumirra obignuitd.
re,se
re
preparatui mtrosco
pialinei,la cele dou
a. Obiectivele
.)
: lR:
anumi
ordine int
emT"
d
de
:
1
D lanla focJ
o a un
cu pulerea ni de manre,br
dar ma mm decat
dare
pent
Oinetta
10X,Di este de aproximalv 10mm,lar pentru obiec vulde 20X esle de 2-3mm).
Obiecl ele dife intFe ele attt dup pulerea de m
re cat,l dupa mOdul delnlrebJnlare.
l,i'lici-osoitpul ir;ior
,:blCCflVC U3(.a.'0
jl.l
r'
rii
ir:-,i,-l
..ri'i j.j
iluiai. 0t.t:
;rt,l..rir-\ tir..
r::irfirt ,j,;
ir
if:
'1,;: t .; .. :l
Lj,,
;Dtti
ttbiectivul umeC (cu imersi;1) r.rste cel cu puiere rle marire de 9lx, i;;ire necesiia inteipunerea iirtilr
ienlila flontaid gi preparilt a unui lichid cu indice de refrac{ie ai;ioxinrativ egal cu al strclei (ure .":e
u10rul
campul mibrOs
90 ctea7
Cla talea
imaginH
lzei mtromemce.
cedru).
oJc Apo
Jttittl
icu24om li
mlnFe(20X)
.
ma
h,:
tt D
_ plvind p
l ooulaFe)se
microscoP ;
se
corecleaz
Ola lalea
verOr
10,Fofoslrea oO
dic
ers oo
l precis
eclivd 404
8 zond de studatfolognd o
Figural.A
b.
Reprozentare schernaf.ce a
sisfenelff
acestea,
0cularele
Microscopul fotonic prezinti doui oculare, flecare iind furnat din doud lentile convergente
montate intr-un tub metalic scurt, innegrit in interior pentru a evita reflexia luminiiifrgura 2,44), care se
introduc la exkemitatea superioari a tubului microscopului in tuburile de observare.
Fiecare ocular se caracterizeaze printr"o putere de mdrire, iar microscopul ML4 este prevezut
cu ocuiare care miresc de 5x, 7x, 10x si 15x. Puterea de mdrire a ocularelor (P oc.) este gravatd pe
se aduce o
1
lM
ML .
a seeaztt
lel r.Se
ce
htta po
ectcu
Se faC
de panz
1
c
att m
:.
a alnd,1 nd o cu ttu10rJ
ht in
attt
T :i
l
se pune o pi tura
15
p ntunecat,erm 0
necolorate.Meloda se bazoaz
: :::3il
un ociC l
condensatord
fasdcu
de raze o
Va 10sa S lreao
e Nede ate
,o obec v
a mJ oml`
: 1 f
0 0du
a ttcJJJ "
d?eXttnJu h exam
Ta
Od
l
[
obsen7atta mol
lila
vOr n dispersale,i o pade vor avea direc,a COre,punz loare pentru a strabate gstemul oplc,i a forma
imaginea(19ura 2 5a)
Daton fenOmenului de dispelsie a iuminl,p n aceast metodO se pol observa panicule 10ane
mici,de pan la o o03
m(reZOluttede
aproximalv 100 de
9u
a25b.
lem la
Vi
il[
1
Ii
i
1
zina,adrena nai
obilcGvlllui
Freparatul
2.3M:CROSCOPUL CU FLUORESCENT
noradrena na etc
:ifTttRe
: lllila
cond?niifurului
dirc opac
Figura 2.5 a) Reprezentate schematicd a elementelu unui mirl.oscop cu cenp infunecal gi parcursul
tazelotintr-un aslfel de.microscop -lumina.care aiunge.tn ohiecliv gi formeazeinaginea esle doarcea
dispersatd de preparat; lmagini de microscopie cu camp intunecat: b) a unui preparaf din sdnge - se
obserud hematiile precum gi numercase puncte strtlucitoare care reprezintir colonii de nanobacteifl
(sdgeata) gl cJ a sprrochefe/o r Treponema pallidum rcsponsabile pentru apailia sifrlisuhit.
Fluoresceina
.
Pe un microscop fotonic obignu( cimpul intunecat se poate obline prin plasarea unui drsc
opac pe traiectul fasciculului luminos sub oondensator, Microscoapele destinate aestei tehnici prezinti
discul opac incorporal in condgnsator, foarte aproape de sistemul de lentile. Cu c6t discul opac este
r Nanobacterii ultamicroorganisme implicate in lormarea plecii dentare; in singe se pare ca au rol in coagulare cresc in
=
$i
colonii. Dimensiunile lor extrem de mici le fac imposibil de evidenliat la rnicroscopui ioionic obi$nuit.
preZin
: 1 1 II
/a b ercJr(H60-200 cam em 0
a sursa de ttm na
nda
dou
puH
de llre de lumin
de
J"
t
1
_n
r
cilalieCa
i rea
n :
microscopulut
b
11
n arara
dn sursa de mmha
se mOnttaz intre o eclv OCubl acesb te
pro
z ttptin,lu ti",oi"u
ipeslc SlL
Lslin
:ittC::
in general,dislngem dife
:
::1
lele p
IST
lumina in mod
nml
olncdieuls
h\
Figura 2.9 lmaginea unui fibroblast ln culturd, necolorat (A) in microscopie opticd gi (B) cu contrast de
fazd. [1]
heaci numai pe aceea care este capabiE se excite fluorocromul. Aceasta este focalizatd pe preparat
care va emite o radialie in spectrul vizibil captatii gi focalizatd de obiectiv pentru a forma imaginea.
Deoarece sursa de lumini produce numai lumini ultravioleti
,neagrd', obiectele colorate cu
dintele natural este autofluorescent, poprietate pdn care se deosebegie de cel artiflcial;
aminele biogene: adrenalina, noradrenalina, serotonina (fluorescenld verde).
-aciziinucleici:ARN-ul(fluorescen|6rogie)'AND"ul(fluorescen!dverde-galben);
rimin opace;
radia{ia
respectivi.
din razele luminoase care formeazi imaginea cAmpului microscopic (are loc
pi(i
interferenJa razelor luminoase care sunt transmise direct 9i a celor care sunt difractate de
prepara$.
condensatorul are un diafragm inelar (un inel hansparent intr-un dlsc opac);
in obiectiv se gdsegte o placi sau inel de fazl care are rolul de a modifica transmisia unei
fzi:
studiul celulelor in stare vie (celule hefixate gi necolorate) - important mai ales ln urmirirea
culturilor de celule, care sunt verificate prin kansparenla flaconului de culturi pentru
observarea proliferErii 9i a aderirii de substrat (vezi figura S.13)
permite urmdrirea migcirllor celulare care nu se pot observa la mlcroscopul fotonic obignuit
ca endocitoza, migcarea cililor 9i flagelilor, divizlunea celulard etc,
studiul reacliile celulare la diferlli agenli fizici sau chimici,
Ci`ill p
o t astiel irl(, l
pc pdattz
iin5
va
1titl,1`
l"ibate analiz
Li t, li ,0'r,1
1 01113r
,Plan
l tifi
1111 :` t i lllill
(J:
211
`ial
P,am del'l`
ld ua attaada
z a"or 3 de 1loba)
tiarlili!{
enlila oblectivului
dtpa
U!ln)
ncattraiade
Proba
Badiaiio
moditicata
*
- birel.ingent
-Specimen
Lentila
condensatolslui
Sursa d
luftina
ttfJl
rere rd a
rde
opbl
Parcr. JI
ctr oo,lrasrde
ee
za cr
c
Fasdcd
1nos ill
`
Icroscoptt
ola.l171
raz
.[1,1
o SCOpid tt h
"T2
nsltt m sttdetta
rada,dedrOmagnalce,0
ln md
birefligenla
crsta na sau int nslo observata in sislemele sau moleculele in care lon
prezinth un aranlament agmet c rew! so ObSen in struc J consituite dm proleine
Fl uT
:: IT
11]
:
all
sau pidel
birefrigenta
i
I
Iit:
de tensiune se obsen
i
T i1
1 R: :1 1:ldl il:lk,
P, FnlialelTole,
_ un pOla 20 SIuat, re
e10i
.____
lstruduri anizotrope struituri compuse din elemente cu anumiH orientarc, care prezintA difurenle
o
ln lndicele de refra4ie
=
in fun(ie de orientare.
bctt hmh
suFer
iel Care in
: :
Pubrea lor mare de rezoluie esb m mncle de aC eaj parameH ca g cel d mtroscopJ
folonic,adi mic,orarea lungim"de und
21
L.uagirtoe
ijt
i.ti:,ii
utttri
inx ie electl0ri
ii;
':r:riil! ile'lrlfaij
irir: !l i:+
Ai{rd
unde:
l= lungimea de undd;
',iinrraareDarzixilr;--
.r-n-_
grrrih'rcaCr,'tii.'in'i
I
|
P nipa de dito i,
il
doul
pompe:
Fluxul de electoni este produs de un fllament incdlzit - catod, care se afld in partea superioari
a coloanei; anodul - situat imediat sub calod, este reprezental de un disc metalic prevdzut cu un orificiu
2.
lna":
POr Fa ut r J:, 8
cenlral prin care electronii sunt dirijali in axul optic al coloanei microscopului.
ln timpul func{iondrii, intre catod 9i anod se aplici o tensiune
electronilor (50 - 100 kV).
rr-.rtir,li
lsrlliia obiE0[y
lenlre proiicleart
h)
.;
masa eleckonului.
it:ijii
inalti penlru
accelerarea
li
rl=:
1,ti
dgai f1x6i65.onl
I
icFoscopui 31 Ctronic dO alei (S.
M)
SP deoSebircl de TEM care se ullizeaztt in exall, atta smctu i
hlterlne a c
lt,ll
lott SEM
3. Gamera pentru preparat se afli sub lentilele condensoare gi este previzutd cu misula penhu
preparat, de form5 circulari prezentdnd in partea cenlnali un orificiu circular in care se intoduce
portobiectul cu preparatul de examinat. Printr-un sistem de microvize, portobiectul se poate migca,
oferind posibilitatea examinirii unui cSmp cit mai mare. Camera pentru preparal este prevdzutd cu un
sistem ecluzi prin care prtobiectul este introdus ln coloana microscopului fdri a scddea valoarea
vidului de lucru.
4.
Sistemul de formare
elecfomagnetice: obiectiv, intermediari 9l o lentili proiector, Ultimele doui au rolul de a mdri imaginea
formati de lentlla obiectiv, proiect0nd-o pe ecranul aflat in partea bazali a coloanei.
Camera de observare prezinti trei ferestre 9i un ecran circular lluorescenl care, sub influenfa
bombaidamentului de electroni permite vizu'alizarea imaginii preparatuiui. lmaginea poate fi examinatE
5.
6.
Camera folografici se afli in partea cea mai inferioari a coloanei, imediat sub camera de
observare; in ea se introduce o caseti cu 12 sau 24 de pldci fotograflce sau film cu dirnensiuni
variabile.
7.
Panoul de comandi are forma unui birou cu doud corpuri fiind previzut cu comutatoare gi
poten{iornetre de control 9i operare; in interiorul blocurilor se afli blocul de fumizare a tensiunii inalte
stabilizate 9i blocul care alimenteazi circuitele lentilelor 9i sistemul de vidare.
e ctro
bd a
et
care emtt se
perlrl a
gOtt bac d" edlJ
lJf T
funClede preparalulde exallinat.
dou
TEM = transmission electron microscope (engl.); SEM = scanning electron microscope (engl.)
22
"
eiect ni.
M tt unonn
23
'
bombaldarea pre,arat
curentul
_ : T :
rtte IW 1 a
:
Cat,I
1 : E
3.l GENERALITAT:
Pentru a putea observa celllele la microsooP,fra9men le de lcsut t' bulo pre ucrat
in
do sic15,i
,cu olame
_ lama se mainum le,lJam polt obiecr cu latu paralele,i dimensiuni de 76126 mm,i15-2111m
acope
l de regul
grOslmel
lamela esle din slcl ,are lorm p trat sau d ptunghiular lloane sublleJ
oroba de studiat estt reprezehtati de un fragment de lesui Sau O can,tate
Lentile magnetice
Fereastra de
obser'/are
Cu dimens:uni vaHabilei
mici dintr
un chid
Lemile magnetlce
lmagine pe placa
fotografica sao ecran
1 l :l
:Ti
::: 1 "J
E oct ni re19cla /
Preparat
microsmpului eledronic
de
transmisie comparativ cu
um re,te
in acest scop se recomeaz dn orga smu animJ in impd e"( opSiel un frag"ent barle
p)
2.
atunci cand se
vie.
studiazd elementele ligurate ale s6ngelui (in special al leucocitelor, vezi figura 2.13), microvilozitd{i, cili
flageli, fenomenele de suprafafd ale dlviziunii celulare, ale fecundirii, ale primelor stadii ale segmentdrii
$i formarea blastulei etc.
i(plaSma,
int un
para
ata
vorab
nt o
vlale pot n:intraMtale,cand substanla cO10ranta se intrOduce in organism in lmpul vie,I apoi Se
recolleaz lesuld,i Se studiaz
de a urm n dienle aspecle funqiOnde de aceslora Fn desfa,urarea br,de a studa unde aspecle de
9ocilozal exocilozai
d :Junea celda , cunda,a,Segmentarea ovuttLL
_ mi,carea oill10
rab
sutului de examinat,
meloda electu
i seclun Or ine
m da eta
i matenalului biOlo9ic
dn utt Sttdel
24
p cedea
,
ln monOstrat lfro u_din luide,amprente de organ
25
: :
:1 1 i
]
O
recoltarea
o lxarea
fo
nttroa
plo(
ch rurgical
ll=
su l p01
)d tmpul u 1,0 nt O
in
enle
001ne un mic llagmell de ttsut,fragrlnent bloplc)sau imediat dup moanea animalulul,pentu a evla
Za Sutu 1or
sp
deshidratarea
includeFea
O Se 10narea
:ta ,l
larea
4mm,pentru a laci
ta p trunderea
rapida a nxatorulul,ia ev
a apaHla ake
autoHlce
FixaFea,i Sp larea
:
l
:: :
n stare vie,
exislen
pre9
u e oare
m
dgeSla autolmc
pemanente,Are ca scop
Fixarea reprezint
i lo
nduderei ooloF )
: :1 :
Fixalori
fonnol a
cel
uilzalfral,rpl
ifti lre\enl
MD
!otugt-sggrp!
Paafna
permila sslronaria
pl numJ ln
ngdarea.Sunt ul
" li I i
: s
Ahooli
D.rhldnt!r!r
bl
Exenlple de lxalo
uiHz i n praclca:
1lMI
i
i
[
maldettda
]CO10rare,
S. lth: o:
att pu
1: :T
:
Mr:trfurd
nserr
11
imob zale
"
CIJlaralde lda are penetrare slab ,dar aclune rapid ,leSele trebuie talate la cel mul l mm
Figura 3,1 Repreze ntdre schematicd a principalelor etapo ln oblinerea preparutelor. microscopice pin
sectluni fine
esle
ni
l :: T
f tlig
il
p duc ttgidtale.
li
4. A-qerrliloxidanl
aplicaiii speciallzate gi se folosesc rnai rar. Existi nurneroa$e amesteouri (Fleming, Benda, Benoit etc).
Tetraoxidul de osmiu (aoidul osmic) reactioneazA cLr lipidele nesaturate pe care le faoe vizibilo datorila
formdrii unui precipitat negru de osmiu hexavalent,
sunt flxatori ce con{in acidul picric; cel mai cunoscut, fi'ecvent utilizat este solulia Bouin.
Mecanismul de ac[iune este necunoscut. Dau detalii nucleaie aproape Ia fel de bune ca fixaiorii
rnercuriali, fdrd s6 producd rigiditate marcati.
5. Picratii
il,)es
lncluderea
Alcool-formol
Etanol absolut
60 ml
Etanol 96%
90 ml
Clomform
30m!
Formalini
10 ml
10 mi
Acetat de calciu
Apa disiilatd
Bicromat de potasiu
951
59
5 ml
2.59
3l:ruri de mercur
059
75 ml
25 ml
picric
Formalini
Acid acetic qlacial
acid
5 ml
volumulfragmentelortisularccetrebuiescconservate;fixareaunuifrotiucelularestediferitEdecea
a unui organ (de exemplu encefalul) unde pAtrunderea fixatorului devine elementul esen[ial al
fixdrii.
tipul reacliilor hrstochimice sau de culoare pe care dorim sd le efectudm: fixarea este diferitd cAnd
folosim o coloralie simpld, topograflcd sau cdnd incercim decelarea lipidelor sau enzimelor.
Pentnr a facilita difuziunea oAt mai tapidd a lixatoruluj jn piesi, volumul de fixator trebuie sa fie
cel pulin de
'10
ori mai mare dec6t volurnul piesei. Rah de difuziune, care depinde at6t de natura
9i de tipul de lesut, este factorul limitanl in oblinerea conservirii optime, De asemenea,
durata lixdrii depinde de natura fixatorului, precum ti de shuclura gi dimensiunile plesei 9i poate li de
cateva orc (fixatorul Carnoy) pdnd la citeva zile (solulia Bouin). Formolul di rezultate bune dupd cel
pulin 24 de ore,
flxatorului
Este etapa in care piesa este procesatd intr-o forma care si permitd efectuarea de sec1uni
subliri. lt4ajoritatea lesuturilor au o consistenfi moaie, chiar qi dupd fixare, care nu permite tdierea unor
sec(iuni destul de subliri. De aceea este necesara includerea care consta in imprognarea gi inglobarea
piesei intr-o substan{d solidificabi16, rezultdnd un bloc cu consisten{i solidi, omogen6.
Cel mai frecvent utilizat mediu de includere este parafina, cu o densitate asemdndtoare
lesuturilor, ce permite oblinerea de secliuni cu grosimi de 3-10 pm. Alte substanle folositesunt
celoidina, gelatina, iar penlru microscopia electronici rdginile sintetice.
lmpregnarea la parafind'. se utilizeazi parafina topiti la, care e men[inutA la aceasta
temperaturd intr-un termostat. se hec piesele prin cel pulin 3 bdi de paralina pentru a se indepdrta
SoluJa Bouin
Fixatorul Zenker
hialr;iiarea
cit
Sp6larea este operaliunea prin care se oprelte lixarea gi se indepdrleazd excesul de flxator 9i
a unor eventuale structuri faise ce pot apare in preparat datoriti unor defecte de fixare. ln funclie de
fixatorul folosit se poate face cu diferite substanle: apa curgetoare penhu formaldehidi, alcool pentru
fixatori cu dicromat de polasiu sau alcool absolut penku fixatorii pe baze de alcodl (amestecul Camoy).
fomind
o panglicd,
29
1= 1)1.
Astle1 0
331 OTl
11
111[;l11'3114, 11
l (1
ilJ L=
,
Colorarea,:mOntaFea larnelel
Esteoperaluneap
n care dife
elularesuntevldenfate
pentru a
ln lehn asettunbrttne
peFm
invers
int,osecveni
deshdrabHi prezen
in bJ de sdvenlo a o
dratarea se cepln lrecereaseclunorin bd de acoOl de concentra,deSttesc Oare, ma
bale lind de ap
sle
Decarece se iu le au grodme mul mai mi decat esde deSut,durala"eslor i
le
denlem de
e : :
mede
at g
up
dd
ap 000
"
C101 09en
qrup n crO10010
observ
la m coscopui blonic,ce tt e o apar translucidei peniru a l
,i cFOF199e
Un compus
,i de prezenia simunan
lo auxoclome
a grup
acestula
loare,
acttma
mul lmp posib a coloran,lor,1(0 0blinerea unulindi de rel ie,i grad de transparettb aVantttos
Lumh
alttdd
R
alb
efle.1ii
lunihri ta;ie
cu
anhid care nu esle miscib
ica
fl
12oresaulatemperaluracamereLdarfe
@nfwi Nb{ca
C,
mediului de monlare.
Onlne
grup
auxolrome
branttp
Fre,
:
rganid
"dooo
lS,,S Jba de
descrescafOa
O-70-apl
' tl
1
t secv"lede idralare/deShifrararecusOlyerF
alpelllr deshirra veJ
are 170-
crboo certt ,7 cresc
e
rlarea lamelei re
dis attp"lr
901Flri
hidralare,
:
ctfm m
CiasttCarea coloran
D ottghC I
30
FeF19aza prOp
mll
lor
TSaude
CdoranJselmpa
e ttgdtt
i
=
tta10xill
'i
:i
Ciasifictti ca,rl
4elodele
1 l
arrl
D
ol raF
rJ
o/J ar
Ol
"
luxin
acid
albastru de ani
, tt fObStta saJ
ba eh bn
bastru de loluidinh
ctl10area
albastru
zttndu
se
va abile
ace la
numil d HZOCrOmit(Sudan
"
grup Q t bazl"La pH_dl do C,prOleinde lsuhtt specttce pot pttzen inc turl
i :llT :
: %i:
el T
l
:
sunt substan hldrOfObe solubile la rnitt in solvenli polan.Cand acesle soluJi de cOlottre vin
de absorbua coloran,Ior in inlelorui substratulul.Un errlplu de coloFare pln acest mecanbm este
colorarea pdelor cu ooloranl nepola
rantJJe me tenO J i
ttSl Se iace o supra191ap care p"nde J ate struclutt cdubre detatcele dottle,dup
care oce l ecoloranieslemJ SubsuttLdeCOI ntesau dferenralo"lde eXem
substrat celu:aF
"
inteFaCJunea cOlorant
1 11
Aoostea
)nln
n n 0 omb
p"
bom
:t:
l : :
llatt
le
celulare,
IPTttZenla
luclui
n eozin
Colora,a hematoxi
1::
m l
bdl h cdOmmafrottu
: ,tttun l
FI rl
MJn
1
,u
metodeideobinerediniemn.
33
32
Zatelttm
ruli",
9
f
Cdoraratrcromi Masso
,hama10=sanga Xylon=iemn(g
t Lizo
lre
ll
:
: :1
; :
ll
Sila oo
D
" Ver Se fac incerc
- 249
or c91o
`ct
aa
Var
Verde de mell
Tabelul l caradertl
colora,a
telorelemente a e unuileSut
_direc ,atund cand cdOmntd se nxeaz p n drnp J contactcu sectul odottreacu eozn
- 1kJoSau pttrdttQO cand es necesar prez_ nta unw medb10r_ u mordant(daun
dm
n ,sau
cu di
te
sare de]:
de lc sullll,
fd"
legatta
Ca mordant o
li :lil, ]iI: :
re , a
B.
9,
Citoplasma
mov
rosu
Colagen
albastru
3 Spalarea n
ap curg
ale
10 in.:
c'(alcoO1 96% loo mll solule de aCid Clorhld"c-0.5m
7 Splarea
1/0,
ooloc Hf:ogura
3 4)
Nucle
Nucloo
dttu
albastru
roz
Ergastoplasma
albastru
Colagen
roz intens
X J1 :
diferen,at Structun
Albaslrul de metilen 9i azurul de metilen sunt coloranli bazicidin clasa tiazinetor. Ca gi albastrul
de toluidini, un alt colorant din aceastd clas{, ei prezintd proprietatea de metacromazie c6nd vin in
contaot cu anumite structuri celulare (de exemplu granulaliile bazotilelor),
Tehnica de colorare: este o coloralie combinati dubl6, in care se folosesc succesiv doud sclulii
de colorare neutre:
lsdaredalortafenOmendd de compellol,
emarO`rlle a e ,cuoa
Oagri.Se a apd co orantu c10phSmarO. ra ag
care se_flxeaza_pe struaunb ttd ,PHn bbjrea untt pO add(ac bS mttbdentt se deSp nde
1.
hc
are,care asfel pot l
re
de
diferenfab`
_ _
arttal.ca va
_ _
n ,
, 9 Si
fe
de la robineti
34
Pe lamele agezate cu frotiul in sus se picurS 10-'15 piciluri din solulia May-Grirmuald,
pentru a se acoperi
soluliaMay-Griinwald;
solulia Giemsa.
albastru viOlet
Citoplasma
Giernsa (MGG)
mp de l 2 minl
Este o coloralie folositd in studiul de rutind al elementelor flgurate pe frotiul de s6nge. Este o
colorafie panopticd deoarece evidenliazb, pe lingi nucleii gi citoplasme acestor celule, 9l elernente
Goloralia May-Griinwald
2,
gi neutrofile, Se
3.
lasi
1-2 min,
4.
5.
6,
Se
spali
A/166:(vezl19unle 3 27
28)
rO u
9ura 3
.2 Fy, erferea g cog
V flj3 i Ht nten
Nucle
JpJde CrOmaln
1 1 lo fll
0'O de
vell JII
, ,
f
JJ ,j br
Jtt
=m 10
cOtt
e
pan L 0, , J
JJ
_____
ln nxa10 alC00ici
Citoplasma eritrocitelor
roz
(lXa10 l
Citoplasma bazofilii
albastru deschis
cu1loscute:
Trombocitele
albastru-violet
Granulalille neuirofile
brunivlolet
Granula{iile bazofile
albastruwiOiet inchiS
roz intens
ele collora
a
,u
Schiff(PAS)
9 up me
OlinVednale
l19ura 3 8)
in gndde.
Acidul pelodic transfo ma aceste grup 1 ln grup H aldehldlce,care apoisuni puse tn cMden
Coloratii soecifice
a
rp..ifrce permit evidenlierea anumitor substarr,|e sau a unor struciuri celulare 1i
a
diferen!at5
Colorarea
celulare
componentelor
fald
de
restul
localizdrii lor intraceluhre, diferenliat
de cifochrmie' in
celulare pe Oaza-pioprieialitor chimice specifice poarti numele
C.1filffi
elementelor
l.
n sau HE.
Rezallale oolo
l granulele de gHcogen apar colorate in ro,u vlolet iFOura 3 9)
loare de mucus
n10Stln, ama
ilr
r,)[:l,lli::,:]:ttlffinit.r,
neurofibrilele.
9 ooproteineie ,i
optime.
alcoolici (de'exemplu flxaiorul carnoy) peniru oblinerea unor rezultate
loa citoplasma lmpingand nucleulla penfe el ln alle ipu de celule,de exemplu in hepatoclle,sunt
ilil'r*oliifi*a
utat'Ro1-ui.at
cu formarea de
Se U.jua.e peiidroliza acid6 a ADN-ului cu acid olorhidric diluat,
grupari
--
celuldl.
in
violeti selelalte
-comRolelle ,celulare
de fond cu verde luminos'
necolorate (figura 3.6), sau'verde deschis daCA s'a folosit colorarea
apar
pironini
(dbozomii 9i
structurile care conlin ADN (nucleul) .de cele care conlin ARN.
a ADN'ului, pe care il coloreaze in
pe
dublu-citenard
siructura
fixeazd
metil
se
de
Verd'ele
nucleolut),
prezenlei regiunilor.monocatenate cu baze
verde albastrui. Pironina se fixeazi pe ARN, datoritS
mai bune
purini.. qi pirimidinice libere. ARN-ul sL coloreazi in rogu.cu pironina. Coloralia di rezultate
piter.diza
ir.uluru]..,
celulele secretorii)'
ribozomi abundenli in citoplasmS (de exemplu hepatocitele,
le m(
IT ili
rilpfdJOr
LI fa7
b
,
oplasI
Reactia Feulgen
-'-l-'
laer"rea
reaz
dde dn leSa de
lu
'n
in sOlven,1 0rganic
propne 0010ranf10r fOlosll iZOCroml exlrem de solubin
asemeneal dalo
preparate:e nu pot i monlate cu med anhidre care necedtl deshidralare,i clanlcare,ci se va folosi
un mediu de monlare apos cum e gelauna,
Colorarea pidelor se face cu zocromi(cO10 ani solub in g simi).MeCanismul p n care
n negru albttstru
in o,u
izalttzoCrOmi suntcoloranl"
U,at agent care coloreaza npidele este tetraoxldul de osmiu:care esle si un bun txalor
de t
hteraclonandcu acl
l gra
gura
3.13).
: [
1
37
pe ,iVasO or de sange,pam
tl
sii
01 r par 3chl
o,9
11,3e)Oi
elas1la l,(071 1
ll J=:,,
n,,a)
:
lu
"
ia cold
,:i;lorcrea iittravit:,li
si inglchate in lirozorni,
3.24).
cu rezorcina cand se
EVIDENTIEREA CITOCHIMICA
A STRUCTURILOR
M
38
pin
cu hematoxilind
mucoasa mlecistului
eozine. Se obseryd
citoplasna roz.
intensitd[i gi
at
t lmaginile provin din hisioteca proprie, precum gi din sursele bibliograflce 4, 6, 9, 13,
16.
de
colagen
Mc
m"
re,smclJra ge e l apa
depbJ
dor
l : .1
Cled
lo verdo a i
rord.
cilop s
l ro,cal
'Oo10ra
de
cu
PA$
'
glicogen din
=
,
portocaliu.
depozite
de lipide de
dimensiuni
mai mici
41
in
ci
J orceip
"
o i
ltlyclet
l es pttF
Jool
001'1'e
colorateln rcgu,
rogu.
Figura
violet.
42
cJ
ooforalie b pe apa
u Ces"
[ e
"are d"
s
peri9
,J rlerry_
rers
"aFpald
43
gtt b 1
oolorale m
1,'11:111l
ri 1 11:lti
1 1,`11
11
1, .11111 1i:1
1 11 1:li
li ,Iti
l
:=:
t ' :
'11 ,(It `'
'C
1 RI le nll,
SI ,05 p:upise:Jar
1 r111
li3
1,,1
:jt,lat
:: .1 1411
t 1
,Il:
,411
=:iti'I
1
0
ie ,11 ttt
'
,i3 ,dial
'
11,
lll1
l,
:o
o()
0 : o
=`ecutarea un
lc
11
1:
.
I
1:'=:
' 1 : r
J .
C011:
b 3.23o
r.jrl.tri
ii
II1
t 1:ll l
lo oangt:
:]
: i
llim
!:
G3:ulolo san
,p ri 8 ic evi
ato ri olorali6 3 r
'
Sittnsa( G6)
F
3.27 c a al tta e
1agi
F titul (hemttta)3
ccLJa pto ,pata,li 39 90Se3o l
[ titot
idru
11 citole
J3,6,il h
oe :
"
siMey
la
Jsf bi ae
i)
fr/f6 "la
o sc"cttttrul ,arJ
(`
`a
lll13
o ,dscjdal, 4 l
l 1 dt te o cdutt a)
inornbrana liula
tr
un di
l1/03o
os
ctttJt 16 o ,11
au o o
rrofu^G miziu
pe io ul de sange i
Giemsa
I :
5 m se g 50Sc in
I bocttelo L( aChetde sangunO)au drllengum care va"a25 intre 2
sangele pe"lenc in numl de 150,000 400.00 lllm3. IrOmbtlcnele tt formeazi tn m duva
Trombodmi aduh es
,Cu
ocil
exl.Ese" 0 nd
forlntt de lerrila oo
de b d la
JC tdn
,po"Oo J et`,
li
ixa g m3. al
[1
granu!ocitele;
,Dup
aStt a gttnma
aztt pln p
ntt h d
[ fore se camc
leucod
lmpJ
I netttttb)ettin ,b7oli ,Se m nume
i
T
"ab m
h
lperO d:[i
]] :
[:iteschsansdepe licin
el
3i 1
f
i :
rlropO
e deO.51dnttul lle
11
16
1.
[d
"n
b)
47
00
111 I:te to lui
=3]
11lle l
4,
"eti
Jr:itar,tl:-ili
Prohi rnalLrsi
In ll3slta
E;re dE nFit --
unta a
fun mental a bm
,dezvdtare reprOducere,pttcunl J
.rllr
: l:
ll
: :
: ; :in
=lnt p
la
i euca ote.Dintre
mtt d
d parl
,L:ci : T1
dde
9F
Fsrma celulelor
Celulele eucariote prezint5 o mare diversitate de forme, in special in organismele animale.
Celulele din organismul uman, de exemplu, pot fi clasificate, pe baza formei gi a structurii aga cunt se
pot observa la microscop, in aproximativ 200 de tipuri celulare. Multitudinea de forme este determinatd
//
atAt de facfol inierni dintre care cel mai important este activitatea funclionalS (dar gi vdrsta,
v6scozitatea citoplasmaticS, structura interne 9i caracterele suprafefei celulare) cAt 9i de factori erterni
(ca presiunea sau viscozitatea mediului). Celulele pot avea forma variabili sau formi constani6.
Celulele cu formd
vaiabildt
Din aceasti categorie fac parte celulele care igi desfdgoard activitatea lntr-un mediu lichid (de
:p
'inoasQ
modiflci forma capitdnd un contur neregulat prin emiterea de peudopode. Existd insi 9i celule din
lesuturi care igi pot modifica forma - un exemplu il constituie celulele epiteliului mucoasei vezicale
urinare,_care !e$lelfea4-{gnd cand aceasta se destinde prin acumulare de urini.
'pdq!9.-c!hryafixdt
Marea majoritaFa celulelor din organism sunt organizate sub formi de lesuturi solide, Acestea
mlra
funcl
lespecitcettgullll
oxempiu celule sangvine), avdnd in mod obignuit o formd sfericd sau ovalara. Dinhe acestea, celulele
sistemului fagocitar plrdsesc vasul gi trec in lesuturi: granulocitele (in special cele neukofilele) i9i
cu
a)
pecete'.
2. Celule cubice
J r
R lq
5 a mblbl 0 Mbib tb unl ttudul sp d oe nb ..:
i
tinate,ln a , a ap lo p a zecl de lF"J )
SycOmeo se lhttv
, lS 0
3 3Fe d
1 loJ::
, { o a4 n
1 11
i3 11 lni , tit':tre
l lo
cP,:
=it`
,cu()`
1loldieni pl
t'
Stanih aln
ndrlli
co old
scoatta cerebe10as
celu cle
spe
la(o2o:`11(5_61111)'i
d nd ce
e din
).
m3
modmc in
,l i!ldependent de m
mea
des ,Oa
ad ltatta,lcu va
celulele adulte sa
cu un d arlei
da as l
un
geala
nconlu
lo
citoplasrna ce conlne numeFOaSe Or9ani
neu
9 WTeLi: F
propuST
prelundlp
cetul
II
tbservacelulettd
e)
11
gdb
eauna acelea,:indittrent de
deschls )
Tmi:1:
1:
d
liesc h e
c I nWttp 1 ll iF
btt m
lttlesecrttb m
1
m tt h
ba
m t
Figura4.1
a*g
Formecelulare,Formacelulelorvariazdinfuncliedeadiitateaspecifrcd,
16l
Mirimea celulelor
HEM10ESM020M
Mirimea celulelor esie apreciatb de reguli liniar prin diametrul celulelor, sau prin evaluarea
volumului $i prin calcularea masei celulare'
in'mod obignuit celulele din organismul uman au un diameku intre 1&30 Um. Putem lns}
din
int6lni celule cu diametrul in afara limitelor medii, ca de exemplu: ovocitul - cea mai mare celulS
53
:"
i`lamina
cu doutt regl
ii ettctlono denSe SOpante tle O
C=LULAR
v
_a MOlg oocJ nu
11
el de
Din punct de vedere blochlrric estt alcatul din restunlo 91uCidiCe ale plolelnelor,1
Jd VeJ 19um 4.
celula
li
11
membttna
0,1 cunoa,lerea
1t
nf 1
celubre,de asemenea pa idp1 ln mttC le supttfelei celulare cOn Invd JJ Ce
asld
or:de disc b oncat aF Ca Supor asamblarea,pednc a
OlaSICi le.De exemplui forma hema
]1ll
pidelo din
lM.
41
IVeliSuttcd
"
frei re
Venirea lor la fo
ltatea hema
or ia trecerea pHn
lelaSlCilale),
Din puncl de vedere biochinlic este alcttul din proleine de tpul acttnel,spectr nei,an
gum
4.4o.
gura
"net elc
omerilDr c aspeclyl
plasmalema care derimile" 19
O tnaminar c do regiFFi eleclro de,se separa de o regiv71e ele6 fro17o lrarspa ,
l
a Jtt
4.4
tsrT `
;
arkilineilaplasmalema sffa elemertele abschelettJ
h`
b
l
ittf
celtflarlaclin . ]
_
=
1
d
, ,
sla lre
eancOrt tecom
OnCliunl
1
du
#
m acesl
I: :: :W
s
`
ex emill
.malrcel
13al
CO Fo
Z
O rl 120m
e cel
r attacerFe al
'
tt corl
Cette/e s pa
ltt Jne
scop decim ,ca a
:ill
m9 jmea mbCa J
:de
l li
unlei
sunt
dr!
11:
11 }
spra10r
]# llllit
e"
I
l
reaHzeaz
DeSmOZOm
e minarea
t:
Plasmalema
Jllal CentrJ lnoo ural de nOutt perec de m ,olubJi penfe d`Axonema se ancoreaz
edoplasma apicaltt a cetulel,unde se 9ase,le corpuscului bazal al c
in
drucluli
Nel
2 t l
:11
J ttb
2)Stere00
c
or
lcml
se
de
.
ale
pln num rul
,i rOlu di
deosebeste de cea a ci
W
L
1
i [llii
ttnIWll I
geani {lalJ
57
6111um
56
t
z
a
e
dlpq1tncJra /qr
SI OF Se Cettfa
il
cciliar
> Ribozom"
O 8rile
gererarOare tt ellergi
> Milocond
e
Orga
rele digesliei ce
>Z070m"
re
> PeroxizomH
D.
ri
4.2`l CiTOPLASMA
doua
:ct
asma
a dlo aSmd,ea
] 1: :
e:
11:
::tttfl
[
Microfilamentele gi microfubulii
Centrul celular
A.
Se C
RIBOZ'OMII
membrane, fomate
de
protelnelor.
Sunt prezenli in citoplasma tuluror celulelor, cu excep[ia eritrocitelor. Pot fi de doui tipuri:
ribozomi liberi in citoplasmi (izolali sau grupali in poliribozomi) 9i ataqgtj de membranele reticulului
endoplasmic Ai de fala citoplasmatici a inveligului nuclear.
Au diametrul este cuprins intre 15 - 30 nm, deci nu pot li observali la microscopul fotonic. in
celulele in care se desfdgoari'procese intense de proteogenezi (neuroni, hepatocite), ribozomii
formeazd zone intens bazofile in citoplasmd. La microscopul electronic apar sub forml de granule
ovalare sau elipsoidalo care prezinE doiri subunittti: mare gi micd.
Rlbozom
tihttll l l:plptidic
se
li
ORCANITELE CELULARE
W
58
(enzime, hormoni,
Figura 4,8S a
:rilbozomar
020m e
molecL la
as s b[ 1 r OZOma
ttJ olipep prin asam aa m ullcr
copr are acJ J a
OlilD" [41
IiI
'
Ur )'/j;:i.ii
rrir 'rir:
:,"!
"'t
Ir' :''r
seoell i
VeJ
ca oo zi c
. La
Retir:uiulencloplasmiceslededoudiiouri:tiErugos(granular)liREnettid
de dibnle rn
Reticulendoplasmic
neted
Reticulendoplasmic
rugog
IT
"
RE
_._l
(1)paChete de cisttrne
aplauzatej
oVe2cdeJ
(2)m
)VeJCutt
RE r
mi
de secFeJe
::
buhdent in celde
nd
a 1
i
gJ
nentatt
catre
asmJem
3 0rga Je
i
i
oo linuilale slryc
.ll,2
MOt(ergastoJasm )
loluidin
O10ran
001 area
slrucfJrlle
la pol
na b
lunglme,ide O,5
m
,n funtte de lpd celuh dar in
grodme fom
bi
lgttnuhre,dungttel.Forma vanaz
7 m
e deim Oaa
u,ln lbra muscma stHath dh
n sislem
COttPLEXUL 00L01-esle
se obse
inh
celulele lxale.
rl
60
1 1!
1
!1:
61
ll :x
v,(p n
gt:
L3
:loroscoptl olocOo ic
de nliate do 0
e sunt
ilooond
membran dub rmat dn dou
membrane t lamelare:
I
eXleFna,
Memtrrana
t't
Pe
2omil ttnl
darea aciz
de ene ge
Care
La
9ra,,i in
ozomtt
apar
alctttuil
dint 0
i Spalul dlnire
ele dou
mbrane se num9,te camera
exlerna:1, 1'tre membrana htern
membran de mtant ,i o ma ce
nz020mal
mittr
secundar
camera
crOSlele n1looondlde se an
Membrana
alc tuitt
dint
La
eSte
intern
un ansamblu de
le
patticule ,10menlare unl
le care,unt JoatJ dnt un
tl
cap sfenci o ti
patrulater
ndHC
o baz
Figura 4.f
, o
granulari;
omogend
fin
perOxlzOm
iar
in
electronic
membran 1 laminar
a
n fosforilarea
im
microscopul
Figura 4.'12 lmagini de microscopie electronicit reprezenfind a) lizozomi primari gi sewndai aflali in
diferlte stadii de digestie a mateialelor inglobate gi b) peroxizom propriu-lts {cu diametru mare gi
structurd neonogend) gi microperoxizom. 1lz1
'"
9i
digestie,'au
7i
enziriatice digestive, cu talil mai mare 9i mrttic6 hbierogeni - ace$ia po1 fl hbteroiagozomi sau
autofagozomiiln a doua categorie inh6, de asemenea, corpii multiveziculan ce reprezent6 lizozomi
secuniari in care procesele de digestie s-au lerminat gi corpii reziduali in care persisti reziduuri
nedigerate de enzimele lizozomale.
prezenla in matricea
Lizozomii sunt organite celulare responsabile de digestia intracelulard prin
lizozomala
'
iunt vacu6le
62
0.4 pm).
Elementele citoscheletului sunt reprezenlate de trei tipuri de tilamente care shibat citoplasma
conferind rezistenfi celulelor 9i fiind implicate in migcdrile celulare:
MICR0FILAMENTELE
citoplasms tuturor celulelor, cu predileclie in acele celule care prezinti accentuate migcdri de deplasare
intracitoplasmatice,
in celulele nemusculare ale eucariotelor, cele mai multe microfilamente suntformate din actini
9i numai un numir redus de microfilamente con$n miozini,
Acffna apare fie sub formi polimerjzati, filamentoasi (actina F) in rnicrofilamente, fle
G) in citosol. Microfilamentele de actini au diametrul de
aproximativ 5-7 nm 9i lungimi diferite. Mioilnase gdsegte in cantilate redusd in celulele nemusculare,
depolimerizalE, monomericd (actina
alungite care se unesc cap la cap 9i se infdgoard intr-o structurd asemindtoare unei fr6nghii, Au
celulelor vegetale
izolati.
9i
Diametrul
Subunl
7nm
Acth
12nm
,r:ur:
i1
care
a unui centroioi,
nucleului ru
ce.i d.oi centrioli agezili perpenoiiutar unul
secfronaf fransvers al gi celaialt longittrdinal).
lt3)
pe
situat in
ceraialt'(inul este
INCLUZII.JNILE CELUTARE
Sunt produse ale activitilii eelulare depozitate in celule
sub forma substanlelorcle rezervh sau
3'
functie de tesut
Filamente intermediare
5.
Tub n
25 nm
oJ
granule de
mdrimi in hepa[ocite gi celuleie mugchilor scheletici,
^diferite
evidenliate cu coloralia pAS;
subslanfe/e ninerale-fier,siliciu, evidenliate prin tehnici de citochimie;
pigmenli - nelanina, lipofuscina
10i lll
glicogenul
Microtubuli
rylJ J a careCrerlsltt
Microfiiatnente
ngura
gmat h aprO erea nuded ,conlnand dd centtdi,inOo urav de C ZOn dto aSmdic ma da
IttIX
l
i
64
= tr
rt`:
1.
tt
F
tt
ll
l
Fof7d
65
:lu
I=4.1 ll('31
7,
17ra
" `11re il fr
Je,
lo
as lla
le
L.steoskucturiintracitopiasmatrcil'('hra'-ltrrl;l:'rccl':leloteucarlrl'e'cilicll:''r"r;'i-i"i
-*11tic
coorrlon"aza rnys2q6 36{rvitate
r,irronLrlui (canioneazb iuf,tn''ti"gu;utica)Ei
t:elt:la' rru:l',::l'
ciclrtlL.
f;;;'ciclulL,i ce Jlar in irrierfaza
Asoecrrrt nucleului
iio rnai nurr'!qie
caie
penti'u
nrotiv
arnintite,
iun.liru
structura morfologic6 Uinu oetinrla iriaepii.ini
'
dif#;il
'"' ii
a,doua
i w
ngu14
u dund_h cdude sferlcQ CdJde
: i Iit:
: : tuslforme
II
::1f-J-'f;'Ii"rff.Id::litH'':1
cntmczomi.
s` a
J c
1.
a de
oc
me J lll s'0'b/1e
c qo s
e ,1 "
er
nutreLimeiabolicre,
elapi a cicluiur
31ll'l'i^,t*
se conserv este cromatrna
singura sa componenti care
3" `!scu
lb
'
a)
StFudura nucle lu
La M0, nucleul interfazic apale ca un organit vezicular, delimitat de o membrarii bine vizibild,
la interior are 1-2 nucleoli refringenli, cromatina 9i carioplasma sau sucul nuclear (figura 4.1 9).
1, Menbrana nucleard apare ca o linie {ind care separd con{inutul nulcleului de cel
citoplasmatic (la M0), ln rnicroscopia electronicl inveligul nuclear apare consiituit din rioui membrane
trilaminare separate printr-un spafiu clar - cistema sau spaliul perinuclear, cu o grosime de 10-15 nm,
Membrana externd se continui cu membranele reticulului endoplasmic rugos, iar pe fala citoplasmatici
are atagali ribozomi.
Din loc'in loc, anvelopa nucleari este skdbdtuid de canale
realizeazA pasajul macromoleculelor intre citopiasmd gi nucleu,
porii nucleari
prin Bare se
Ivlembrana nucleart
celulele cilindricel
Nucleolutr
Pori nuclearl
_ Nucleu-ln monoCile:
(5, 6) inmugurit (7)' lobat
roilnd (i, 2, 3), tufit (4), atungil
Figura 4.16 Diferiteforme ate nucreilor:
renifom o.121
(B)'
mooific#
il#*F i- *r.*d *u
ar'
fi
acumularea de
figura 4.17),
nucleu in celule:-. .Fioura 4,17 Difeite pozilii ocupate de
5)' pl
nedio'bazatit (3)' bazatd (4'
',:;;;;i;i,iiiii,ii
til,
iJng;Ty?l'rfl';ft5'cqu*
tunclie de fazete
ciclului*t,.,5ilL"i'J#ffi;l'ffiffiite
mai
o'ganism sunt mononucleate' dar
l' t'
pt
exista:
cursul
' 'diio'iin
celule anucleate - *ffi;il iliue "*tu'tt
o celuli
pt'tt' iirli'' *tixoti166 - proeritroblastul - este 3'27);
hematopoiezei, ttr'r' i"p'iu uJ'it
;u hemoglobin6 - ligura
ti*putiflerl.fi*i'pi,irOr *.f.ut se
- crrur. .u li'tY'ift'i'"'l'JiliiliitiiJ'Ja;6t
gi
nucleatd care in
- [i][fr'rf::iJ"]'l[ffiXli';rovine
binucleate
prin
'iilpiu
tu:'9l1*'mairnultor
:,}r.*'$i,1.-"x:11!fi'ffi,fl:,*1['.Til'l,Jii,Jib
cerut, inigat mononucleati
incarca
(;1ili[q'"[;'il;t
dintr.o
scheletici (flgura 4.18b).provine
ali nucleului flri divilunea
*rrt'pru JiuiAuni
2,. Cromaflna se prezinti sub forma unor granule; este dispusd sub
doui aspecie:
a.
condensatd
in
coloranli specilici.
Cromatina este alcitulti din punct de vedere chimic din ADN in cantitate mare cuplai cu
proteine; se va evidenfia cu coloranli bazici iqcoloraliile de rutind sau prin colorare specificd penku
ADN cu colorant Feulgen (coloreazd ADN-ul ln ncau violet),
3, Nucteolii sunt de formi sferici; conlin o cantltate mare de ARN gi au rol in sinteza
ribozomilor. Nucleolul se poate observa la microscopul optic, liind intens bazofil in coloraliile de rutind
- pkonind cAnd se coloreazi in rogu (verdele are alinitate pentru ADN color6nduI in verde, pironina are afinitate pentru ARN color6ndu-l in rogu).
4. &ioplasma arc aspect omogen la microscopul oplic. La microscopul electronic se observd
o relea de proteine fibroase in ochiurile cdreia se gdsesc celelalte componente.
ciioplasmei;
67
:T:: :restt
:ll
zunali
e_mitya
(khctocorlene)
cirtro?onril la
polll fu6ulul
i nucleulul ,i a
ca urmare a diviz
(klnclocoriene)
kinetocori,
aromo:oml,
2)
cromalidi
dink-o
cromozomi formali
i pl modiul
cu
migrarea simultand,
Milom esle o diviziune indirec
doutt celde l
17
1:
caracle
fontlat Jn c mozomi
cei doi
poli ai celulei, iumltate la un pol, cealaltb
llbr.lo'
klnetocorlena
r. scwt8qi
!tll F:i
aptt lvlvim
ed ddo.
ulo
jumitatela celilalt
Telofaza:
5,TEL0FAZA s.tqldesomoiohi
ogura4,20).
Bi
pol.
in
aceasti etapi au
fenomerG**i6 rcfacerc
msJ de d
despkalizarea comozomilor,
sa formcza
loc
nucleului:
apar[ia
prometafaza,
9i
metafaza,
esrhhloei
(fenomenul de citodierezd).
Figura 4.20 Etapele nitazei gi procese/e celulare speciftce fiecdrei etape. X1
69
68
celule somatice = toate celulele corpului cu exceptia celulelorsexuale, care se gdsescin gonade
2 diploid
2N - setul complet de cromozomi al celuleior somatice; la om 2N . 46 de cromozomi.
1
ae
brJe pol re
anafaza $i
telofaza,
profaza,
celul
3)
aceeagi vitezd, a
92 de cromozomi monoqomatidieni); 9i
413.l MITOZA
1
I
modia na,
lr
Obttnut ia
:T:
W
F 1
dMJuno.
dilrectt lani10
3.METAFA
z ea
execut6nd migcdri.
oscilatorii in citoplasmd,
meloza.
s u se lmpa o,n:
4
ea
tt a celulelor somarrc
d
iunoa
la ndul
sau amiloza
etapa
se
aceasti
urmatt de dbt bu,a aCestui mate alin celulele lice in lmpul dlviJuni:
ilctt ca
in
se spiralizeazd la maxim 9i
za
Prometafaza:
cromatina
celulel,numi
nuclear cu citoplasma.
fi1gmnte de
m?mbrana
nucl.ard
a llmp t intre
diviziunea celulatt se
loate celulele or9anlsmulul uman, n alara cel lelor nert/oase sunt capabile Ctt se mutt phce,
nttbilTil:
loot
l :
aceastl etapa au
ln
Ptrjazq:
1 ROF
LARA
A,
=iti
onimzo I
6ului
=
iZi
1= =
care ll m!to=
ca
lill,
Fustl `9_J
3oHdolFea'lo
ino2omi,l sc 11'ndi
:iatO" ,i5o3:urige3c,
`
Z31= 110Farea
'0
ea
:
=allz1lld 311,
11
=13c
trj cn lo :lb 1
Crl: 02prnlof,,1'brtl
poi3it(,111 30 010SC I
pla
llce pe radaciri
1.
4:.
:LOm
Tili
1} 1
:i
'ltil
::
n placa
mOtafazic1 1l metalazli
O mtta
Figura 4.21 Reprezentare schenatied dupd imagnea de rnicroscopie electronicd a fusului da diiilune
cu cromozonii atagali o pafte din librele fusului au cronazanl atagali (fibre kinetocoriene sau
cronozomiale) gi o parle din fibre se unesc in planul ecuatoial d celulei (iibre palare), P.,74)
, J
Ct oz,nl"-looare cromo
om este alc
lv
m urma
;
spira z
`i ct`
inbrlse
a nlame1ltulul
cromatni
asocteroa
rrrOteinc.
Celo doutt de
croma
de sunt
mte de pttntr
o folrarune
cenmm J
es
numitt uv
pe ttsul
3 lult
mer
4.3.2 METOZA
care
de diviziunet_
etocat
dm dd
Meioza este
cesUdrfiPtuiui
zonei inttrni ,i eX
Pttn zcna inbmi se
301ida 20aZtt
lib.6le crom6iominls
bu
rrl
klnetocodo"
de diviziune.
Extttlni
le CrOma delo sunt bine de nilla
ta o ,in
rofm
8flc2zeF
ib:oDmalde,
Figun 4.
(23 do pettch
Str cttra"",ozcttlJfl
2
,
]
anumrti
cFomatlda
etapi
celulele rezultate in urma meiozei se diferenliaza, fere a se mai divide, rezultdnd gamelii,
celule inalt diferenJiate cu rol in reproducerea or$anismului (ovulul la sexul feminin gi
Eermatoioiziiia
sexul masculin). Meioza este deci,
diviziune pe care o suferl celulele iiniii germinale
exisl
`6 de
dezvoltdrii lor, prin care dintr-o celuli mami diploidd rezulti patru celule flice haploider,
in urmia ooua
diviziuni celulare succesive denumite meioza I 9i meioza ll.
.ultima
se numesc ! ol
cro
rhaploirj=N-sehrldecmmozomialcelulekrsexrale(game{i);homN=23decromozomi.
in
hap10dii
da Z
num
l
i
re
m L
ib
l:: :
:!
1 d
u ind
lei , J
II
:1
eJ
TELO AZAl
eh,J" L
PROFAZA
Je
METAFAZA
ANAFAZA II
TELOFAZA
0
Se fo,mOaza
4J 0 1ico
: ][])
:NTERFAZA
PROFAZAI
METAFAZA l
fuo&za ll: are loc spiralizarea cromonemelor, disparilia membranei mucleare 9i formarea
fusului de diviziune.
Prometafaza
naploid, care incep
si
in set
Anafaza
i de
taJ
lcromozor2o
cele
malerial
do l celyle ttce.
Ica metalazlc
C m
72
731
4 4 13El_
^ LgiN
toNIEX
1lS
EX FttA t.ULAttA
liii
ittthr_a
l :
:LttTIilill l 1:
Tl
celula ,Mat
cea eXtracelula esle Cel mal blne reprezentati Fn lesutul coniunciVi maCromoleculele
matncei sunt sinlelizale loca:de celUle numile nbroblaste.
el tli
is
lole,ular
b ,PAS
sau mudcarmin
amenlett
nse pol m na s
JtteW 1
1r
bFan,ad
se peste lot in
mecante
romdttb
pOZllia matrtt hn
Dm
aoroarl d! Itoltoglicatrl
FIBRELE DE RFflCULINA sunt, de fapt, alcituite din colagen de tip lll, S-a crezut iniliat cd
sunt formate din proleine diferite, deoarece se comportd diferit fald de coloranlii citologicl
au o
alinitate crescuti pentru serurile de argint, fiind eviden{iate specific prin impregenare argenlici (figura
gi
Elastlna
ni
8Ml
sp ma .r]
dlmersimf
l!
La microscopul optic se evidenliaz6 cu coloran$ specifici (de exemplu orceina - figura 3.18); la
microscopul elechonic apare ca o structur6 amorf6 dispusd in skaturi de formi neregulati (figura
4,28b).
74
75
Se poate ulrselva ca ir: unllr r.nk,turarii iJiiereiifialo riu si, obiin or-ganiie 1il sia;e
fracliuni ceiulare care contin mai inulte strucfuri cu i.-rarirne gi densitate asemanitoare.
sTuDlt
cirij
tLULE
S,1:I:11
smo0enElul
p.ntru
lildrpaifi gruF{ri
da
Populafii de celule pot fr analizate biochimic prin fragmentarea lor gi fraciicnarea conlinutului
r!lulr
nsha0mrnhlr,
prin uitracenlrifugare. Organitele celuiare sunt astfel izolate 9i purificate pentru a putea fi siudiate:
compozifia gi tuncfia lor,
rxlhcelulam
vitezi
Suspensia rezultati - conline numetoase organite, liecare avdnd mdrime 9i densitate diferiti.
care separi grupuri
Acestea sunt separate prin centrifugare: centrifugarea diferenliald
(fracfiuni) de organite cu mirimi 9i denbitdli apropiate, urmatd de centrifugarea in gradient de densitate
- in care se separi organitele din frac{iunile ob[inute anterior,
Centrifuqarea diferentialS consld in cenlritugdri repetate, la vitezb progresiv crescute, pentru
separarea din omogenat a compnentelor sale. ln general, cu cit o sbucturi celulard este mai mici, cu
atAt mai mare este forla centrifugd necesard pentru a o sedimenta. Valorile tipice ale diferitelor etape
ale centrifugirii diferenliale sunt:
viteze mici - 1000 gt timp de '10 minute;
Omogenat
(suspensle
d materhle
dln celulel
fragmentate)
Gheata
ruperea
preveni
izotoni, pentru
Tub de stcla
omogenlzatorlrlui
celular.
Cen iFuga
vitezd mare
vitezi
lni$al omogenatul este supus centrifugirii cu viteza micd la care sedimenteazi doar organitele
mari cum sunt nucleii (9i celulele rimase eventual intregi). La fo46 cenkifugi mai mare, organitele mad
sunt sedimentate
in
din
suspensie mlcrozomii (fragmente de membrane din citosol care formeazi vezicule inchise, provenind
in principal din reticulul endoplasmic), 9i ln final ribozomii (figura 5.2). Acest ultim pas necesiti o
ultracentrifugd, care se se roteasci cu vitezi foarte mare (75.000 rota$i/min,), pentru a genera fo(a
centrifugd ceruti de aceasti etapi. Odati ribozomii indepirtafi, supernatantul va conJine faza solubili
a celulei (citosoluD.
decenm"bp n
milcarea
laraaro10rulttlfottCen ga
'FottreM
esbmamarebttcenm a decaluadeancliegraubuonJ
78
"g
79
Om
o,01nl l
ii
eaza r
ettte 1 a t
sed
re
c
Irl
rr
\,
"\./
zo
conlilltFale
[]
./'
tt cettiFttga a J
90
e ,177
m Iclzo
Monomeri de
detergenl
t :
i
i
i
"den,t
derttel
] 1
:
]1
:u
, r9, t
dder" 1 Or Se as aza ctl cele ale prole elor, llpd %iar cele e yfa oo,Facl c j71ediJl
apos.
lTai
:Tl
1
li
ao
za ttua s u
1Fl!
a md ttu une
DOd6
30d
fSO
TnlonX lo0
Figura 5,6 Formula chimicd a doi dintre cei mai utiliz$ detergenfi pentru solubilizarea proteinelor
formali dittr"ul lan! de acid gns sau altd structurd hidncakonaft fi o grupare pobri', gl
Odati izolate qi puriflcate anumite proteine din membrane, acestea pot fi incorporate In
vezicule fosfolipidice adificiale (lipozomi) penhu a li se studia funclia. De exemplu, in acest mod a fost
demonslrati functia pompei de Na-'K*, care mentine concenlralia intracelulari a acestor ioni prin
p0mparea a doi ioni de Na* cdtre exteriorul celulei gi a kei ioni de K"de la exterior cdke interioi.
5;2.2 CROMATOG.RAFfA
Cromatogtalia reprezinti metoda prin care un componentele unui amestec (de reguli dizolvate
intr-o ,JazI mobild') sunt separate prin deplasarea de"a lungul unei matrici poroase (,,faza sta{ionard").
Faza mobilS poate fl lichidd sau gazoasS, ln vreme ce faza stalionard poa{e fi solidi sau lichidi.
Majoritatea tehnicilor utilizate sunt de qonatografie tichidit in care compnentele amestecului
se aslciaze preferenfal cu una din cele doui faze - faza mobild lichidi, un solvent 9i faza stalionard
solidi, o matrhe poroas6 prin care solventul se migcd. Matricea poroasi esie dispusd, de reguli intr-o
coloan6 subfhe, faza mobili incircal5
I
i
80
liclitddpecoloand.
Ia celdlalt
capit
croinatografie
r,ri'
Proteinele ce trebuie separate sunt dizolvate ln stilvent gi tecute prin coloani. Malerialul care
alcAtuiegte faza sta$onari conline situsuri de care se pot lega proteinele din solulie, Dacd moleculele
unei proteine interacJioneazd cu materialul matricei, progresul lor prin coloand'este incetinit. Gu cdt
81
] ]
,,cac
icF"
Caa{ja iridrofiri:i.
'\
, Cail iliiiioili
(19 Ha54)
pl,1
;riir, tr:rlirri,j r.cimpicxe :;oiLtLrtio'in ;rpa i:ii pri:;i:,i;r.:il ii;r,.i.;l; rflgi-nijianaie iiti;i,r;; i;.11, i.,,;,
rietergen{i $Uni i.Jilici avirid r1 grupare'incirr;aii, {jLjilr ei-ilij rir'rilcr;ii.:iulfeiul de sc.riii; (liD!i), ai!1i iL;rri
neicnici. cun ar li Triton X-100 (iigura 5 ri)
,-i0
Dooarece ieca
Celoa
dinitatea llnel prok)ine perltru rnabice este lai rlale,cu atat rnal lent
Deoarece diferitele proteine din amostec au ainitate dlFerit
di
7 intr o
ca Frac
n pane
cetinlte
n grado
ei
p ntr
nuclelo)in
te poroz[ ,
)de di
presupunem
Ittl IU
L`F trarea
Sd
sa pl l coloar)
sette de tubun PrOteine e din amestec cu cea mai slab anillatO pentru matnce apar
in plmeleiacloni Ca
p
,i picur
ostt ti
proteina ce
masa
trebuie purificatd arc
moleculari de 125 kDa gi este
prezenta in solu{ie cu doui proteine
Amestec cu
trei proteine
1
_ ._.
printr-o coloani
de agarozi
avind
5.9). 0dati
contaminante
ce
toate
proteinele
au trecut prin
coloan5
iegind la partea sa hferioari, moleculele
de receptor insulinic pot fi detagate prin
Tttf
COn minante(
un
iF
1
li:
le
'
bgarea io ca a protdnelor de o matice inettacum ari celJoza decaresunt ata,ale covdent grup
inc
zale mat d
esle
na diem_amhO.ell(DEAE)celu10Za care este
lreceprol
alogr
o slngu
1
m
de
pOale
in
modilici continuu
d
l
(in
Amestec
de proteine
lncarcate +
si-
Matrice de
DEAE.
celuloza
incrcata
pozitiv
se
gradien$.
F
Chi177" a
rega 2
82
ttsic" 1
cttale
Oecud m ab
i
al cirei pH
"
incbrcat pozniv,i decileaga moleculelo inc rcate negatv,lind considerat un lschimbitor de anionr,
Alle tpu de matnci actiOneazO ca schimb loH de calloni(carbOX mel celuloza).
i7
wcdoaro Oa
:insu l
a pe gelde pol
d4e
:
lP=ded
f
83
a ttg
3, 1
potanbmidi
Film de
p ide
lle
--1ffi
.,.
:,:.
-:: i::
:;'"
:'
:.'
::
d CdO 111 penh
301 ,a de al a=
oJ
Cobranlulest o
doud
mblh
cOif::liiriiilv
i:t
Latt:
iiliti itJl+
u ntt al
l :
pr
de ar9
,ndol
: 3:
lttli
lt,
TI [
1
1i
: ,,
::attT
li
::i
mlc6 migeaz,
[oleinebr
EhclEdd
pozifiv
(mdul)
cetre
st stttdio
pentu descr 3
cu masA
inainlea
Rezmrulinleriorculmtrf,
opuse,
Su6Bdedrenl
Grcubr. mol6{lrra
"
Fzoble
,
ettballa ett.,al
attoa
tlpJ 9J ttCttm
arker " g u
02J3 g
0 C
a
pr9 Pelo olll
s 3a
get de
i.:'iie
si
0unt inti:
din l lembrma
declangAnd
sarcini
Fr 11
as o,den,3p ,la
[1 0oonias3:es
maseilor nlolec la
cu
negaiiv
(cetodul)
electrodul
I
1
Eudrcd!l
compartimentul superior.
poliacrilamidi,
deplasarea proteinelot
11 11
godeurile de
intre cele
godeun
de
cu un
`:
si L ria: ,of l li r
-^ il
----''....areslmalS
Proba
s
a dislrlb
e prolc i19o
eF a
sps_
"
"
PAG
ib1 4 111
ceea
ce
proteinelor
produce
dea
dep/asarea
lungul unor piste
,i
Deplasarea proteinetor prin gelul de poliacrilamidd depinde de: densitatei sarcinitor, mdrinea
forma moleculei proteice. Proleinele cu densitatea sarcinilor mare sunt atrase mai puternic c5lre
84
lota lalealehnulorttn
munip cate tn
afara organismului
carecelulelesuntmenlnu
ln Vial Sau
conslderenlei
mttOnttea
Jle di
cuttu
lor puJ
nln
de celule;
85
F' t
,
l =t
l ::111
cel la ,tttns,o,
1 11:
11,I 1 :
=::
111::111 r.qli
c`lCatteni
- le siudi
381o : 11 1a li
sp
,3
=tan
S ,3
ii:lii:,
i:ii
!'ilii.ir:,::,,
i-';i
srf
(care
v sau nenutllvi
poale lo atti nui
buio
n din iesui
3b adere
g sesc
dut
mSedslng
!
:.1
ii
',.;ir,:?'i
lt 111
lr,= ltm
,10.3in ztt pl lo11 :
ma"
Oo
ll
1 ,01
Frirgmentare
lncubare cu
tripsina
V
FHtrtte
de Culu
LI
lru ipilc
suspenSi de : e
3.
ca
J 1
vate,oJldtte sunt c
and
urmeatt a n c
pentru cuttu
Celuiele exlrase din organism pentru a n cutivate pot ppveni din doua s
o gan
e_le din
un de celde emb"onare,Cat
,le dh emb oni
cele dn lesutu" addlel se gasesc intr o stare m nedferenI ,puandu.se apd dilelen,a in
culltl
diferte tpul !dare,sub a lunea unOr faclori specttd.Cel lele dlll i" e adlre
necestt dO obcd med
une
a prdi Fa eXCeple
ac cetu:ele lIPIorafre care au pbrdut mocattsmele normale de conlrol ale ddtlld celularl se dwid rapicI
guros re9
e de
:rw
; 1
li
a sunt periOdl
asepsle,
EX:
ta
efettarea unor cultu de nbrObla i din Sut de ernbtton de gttin .Se oo: a
exlracdttaFe de proleindor
medaztt
adez
ooa 1 a hgen,lbFOnCttin
,protoo
an
t:
] fh:
87