DETERMINAREA PREZENEI I NUMRULUI DE ENTEROCOCI

(STREPTOCOCI DIN GRUPA D)

Enterococii fac parte din flora normal a intestinului uman, prezint 12
specii, din care 10 s-au izolat n infecii umane. Speciile Enterococcus faecalis i
Enterococcus faecium se caracterizeaz prin capacitatea lor de a se dezvolta pe
medii de cultur care conin concentraii de 6,5% NaCl sau pe medii cu bil 40%.
Materiale necesare: mojar cu pistil, pense, foarfeci, bisturie, nisip pentru
mojarare, omogenizator electric cu recipieni pentru omogenizare, termostat de
30-370C i 44,50C, eprubete de diferite mrimi, lame de sticl, microscop cu
obiectiv de imersie, trus de colorare Gram, anse bacteriologice, plci Petri,
mediul bulion azid de sodiu (anexa II - 74), bulion azid de sodiu i purpur de
bromcrezol (anexa II - 75), bila esculin azida.
Tehnica de lucru
Testul de prezumie: din trei diluii zecimale succesive se nsmneaz
cte 1 ml n cte 3 eprubete coninnd 10 ml bulion azid de sodiu pentru fiecare
diluie. Se incubeaz la 30 - 37 0C, timp de 48 de ore. Dup incubare se
consider prezumtiv pozitive, eprubetele care prezint mediul tulbure, cu sau
fr sediment la baz.
Testul de confirmare: din fiecare eprubet considerat pozitiv la testul de
prezumie, se fac treceri cu o pipet Pasteur (1-2 picturi) n alte eprubete cu
cte 10 ml bulion azid de sodiu i purpur de bromcrezol. Se incubeaz 24-48 de
ore la 44,50C. Virarea culorii mediului n galben i depunerea unui sediment sub
form de buton pe fundul eprubetei, atest prezena enterococului.
Mediul agar bila aesculin azida de sodiu este utilizat cu bune
rezultate pentru evidentierea prezentei enterococilor fecali in produsele
alimentare. Se cultiva prin inglobare, inundare sau chiar prin striere cu ajutorul
ansei bacteriologice. Se incubeaz 24 - 48 de ore, la 44 0C, aceasta fiind
temperatura optim de dezvoltare a enterococilor fecali. Streptococii fecali sunt
capabili s reduc clorura de 2,3,5- triphenyltetrazolium din mediu de cultura, la
formazan i s hidrolizeze aesculina din mediul de cultur, la temperatura de
44C. Produsul final - 6,7- dihydroxycoumarin, se combin cu ionii Fe(III) pentru
a da un compus de coloraie neagr care difuzeaz n mediul de cultur, dnd un
aspect caracteristic, observabil pe plcile Petri.
Pornindu-se de la o colonie caracteristic, se realizeaz un frotiu care se
coloreaz Gram i se examineaz la microscop cu obiectivul de imersie. Dac se
observ celule sub form de coci ovalari, izolai, n pereche sau n lanuri scurte,
Gram pozitive, se certific prezena enterococului n proba analizat.
Stabilirea numrului cel mai probabil de streptococi grup D (enterococi) se
face ntocmai ca i la bacteriile coliforme.