Machine Translated by Google

Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41

Liste de conținut disponibile la ScienceDirect

Arhivele Biologiei Orale

pagina de pornire a jurnalului: www.elsevier.com/locate/archoralbio

Stresul condiționat de frică crește resorbția osoasă în leziunile

T
parodontitei apicale la șobolanii masculi Wistar
Emisael Stênio Batista Gomesa , Lucyana Conceição Fariasa,n , Luiz Henrique Silveiraa ,
Carlos Ícaro de Jesusa , Rogério Gonçalves da Rochaa , Guilherme Veloso Ramosa ,
Hanna Thaynara Alves Teixeira Magalhãesa , Manoel Brito-Júniora ,
Sérgio Henrique Sousa Santosc , Bruno Correia Jhamd , Alfredo Maurício Batista de Paulaa,n ,
André Luiz Sena Guimarãesa,n,⁎
aDepartamentul de Stomatologie, Universidade Estadual de Montes Claros, Montes Claros, Minas Gerais, Brazilia bDepartamentul de Clinică,

Chirurgie și Patologie Orală, Școala de Stomatologie, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brazilia
c
Institutul de Științe Agricole, Colegiul de Inginerie Alimentară, Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Montes Claros, Minas Gerais, Brazilia
d
Colegiul de Medicină Dentară – Illinois, Universitatea Midwestern, Downers Grove, Statele Unite

INFORMATII ARTICOL ABSTRACT

Cuvinte cheie: Obiectiv: Deoarece impactul stresului de frică condiționat asupra resorbției osoase apicale este necunoscut, scopul studiului
Leziune inflamatorie periapicală actual a fost de a utiliza un model de șobolan pentru a evalua impactul stresului de frică condiționat asupra resorbției osoase
Stres
a leziunilor de parodontită apicală inflamatorie.
Pierderea osoasă
Metode: Douăzeci și cinci de animale au fost împărțite în două grupuri. Aceștia au suferit o intervenție chirurgicală în primul
Anxietate
dinte molar inferior stâng pentru a expune pulpa dentară și a induce leziuni inflamatorii de parodontită apicală prin reținerea
Endodontie
contaminării (infecție bacteriană) pe o perioadă de 56 de zile. Animalele din grupul de caz au fost stresate zilnic prin utilizarea
stimulilor electrici (1,10 mA), în timp ce animalele din grupul de control au fost absente de la stimulii stresanți (șocuri). Testul
în câmp deschis a fost efectuat pentru a valida metodologia de stres. Maxilarele au fost îndepărtate și colectate pentru analize
histologice și radiografice.
Rezultate: Animalele stresate au prezentat niveluri crescute de pierdere osoasă și celule inflamatorii la vârful rădăcinii în
comparație cu grupul de control (P = 0,0001). Cu toate acestea, nu au fost observate diferențe radiografice între grupuri (P >
0,05).
Concluzii: Rezultatele noastre au demonstrat că stresul condiționat de frică ar putea modifica o leziune periapicală prin
creșterea dimensiunii pierderii osoase acolo. Stresul condiționat de frică a crescut, de asemenea, numărul total de celule
inflamatorii comparativ cu grupul de control. Ar trebui încurajate studiile care evaluează impactul stresului condiționat de
frică asupra leziunilor inflamatorii periapicale umane.

1. Introducere
Leziunile inflamatorii de parodontită apicală provin adesea din infecția bacteriană a
sistemului de canal radicular, care promovează inflamația cronică și resorbția osoasă
periapicală (Becconsall-Ryan, Tong, & Love, 2010; Kojima, Kumazaki, Ishii, & Miura, 1998).
Un stimul bacterian induce un răspuns al gazdei cu producerea de anticorpi și citokine,
cum ar fi interleukina (IL) -1, IL-6, factorul de necroză tumorală (TNF) și IL-1β (de Queiroz
și colab., 2016; Fonseca ). -Silva et al., 2012; Krajewski et al., 2009). Activatorii osteoclastelor
stimulează resorbția osoasă și distrugerea țesuturilor periapicale, printr-un dezechilibru
în RANKL/
Sistemul RANK/OPG, care este declanșat de procesul inflamator și de produsele acestuia
(Berar, Bondor, Matros, & Campian, 2016; Diegues, Colombo Robazza, Costa Hanemann,
Costa Pereira, & Silva, 2011; Fan et al., 2011; Jiang, Zuo, Chen și Holliday, 2003; Matsuo,
Ebisu, Shimabukuro, Ohtake și Okada, 1992). Studii recente au demonstrat că biologia
osoasă este legată de factori sistemici (Aguiar et al., 2013; Gomes et al., 2013; Wippert,
Rector, Kuhn, & Wuertz-Kozak, 2017).
Stresul psihologic influențează, de asemenea, progresia bolii parodontale la om
(Aguiar et al., 2013; Doyle & Bartold, 2012; Gomes et al., 2013; Semenoff-Segundo et al.,
2012; Susin & Rosing, 2003).
Cu toate acestea, în practica clinică, relația dintre psihologic

⁎ Autor corespondent la: Universidade Estadual de Montes Claros, Hospital Universitário Clemente Faria, Laboratório de Pesquisa em Saúde, 562 Av. Cula
Mangabeira Santo Expedito, Montes Claros, Minas Gerais, 39401-001, Brazilia.
Adresa de e-mail: andreluizguimaraes@gmail.com (ALS Guimarães).

https://doi.org/10.1016/j.archoralbio.2018.10.004 Primit 10
iulie 2018; Primit în formă revizuită 27 septembrie 2018; Acceptat 3 octombrie 2018 0003-9969/ © 2018 Elsevier
Ltd. Toate drepturile rezervate.
Machine Translated by Google
ESB Gomes et al.
stresul și oasele nu au fost observate (Godinho și colab., 2011). Stresul de frică condiționat
este utilizat pe scară largă pentru a investiga structurile creierului și sistemele
neurotransmițătoare implicate în învățarea și memoria emoțională aversivă (Li, 2012).
Stresul condiționat de frică ar putea modula funcția limfocitelor, neutrofilelor și
macrofagelor, afectând astfel apărarea organismului și predispunându-l la infecții (Blalock,
1994; Mashaghi și colab., 2016). În plus, stresul condiționat de frică este un factor de risc
pentru reacțiile psihofiziologice ale organismului, stimulând o varietate de stimuli fizici sau
emoționali care interferează cu homeostazia organismului (Chrousos & Gold, 1992).
Mastocitul este esențial pentru procesul inflamator în neoplazie (Ribatti). , 2013; Souza et
al., 2010) și, de asemenea, în leziunile dentare inflamatorii (Fonseca-Silva et al., 2012). În
mod interesant, stresul psihologic activează mastocitele din piele (Caruntu, Boda, Musat,
Caruntu, & Mandache, 2014) și ar putea fi asociată cu inițierea sau exacerbarea cu indusă
de stres
procesele inflamatorii taneoase (Theoharides & Cochrane, 2004).
Din cunoștințele noastre, mecanismul legat de stresul condiționat de frică și
fiziopatologia resorbției osoase periapicale în cercetarea endodontică nu a fost investigat
anterior. Prin urmare, scopul prezentului studiu a fost de a utiliza un model de șobolan
pentru a evalua impactul stresului de frică condiționat asupra resorbției osoase a leziunilor
de parodontită apicală inflamatorie.
2. Materiale și metode
Aprobarea etică pentru acest studiu a fost obținută de la Comitetul instituțional de
îngrijire și utilizare a animalelor relevant (protocolul #1512008).
2.1. Animale și condiții experimentale
În acest studiu au fost utilizați șobolani masculi Wistar (Rattus norvegicus Albinus) în
vârstă de douăzeci și cinci de 60 de zile, cântărind 280-350 g. Animalele au fost ținute într-
un mediu cu o temperatură controlată de 21 ± 2 °C și cu un ciclu de 12 ore de lumină/12
ore de întuneric (luminile aprinse de la 12 ore, și au fost hrănite cu rații și apă filtrată.
Animalele au fost aleatoriu împărțit în două grupuri (13 animale în grupul de caz și 12 în
grupul de control).
În ambele grupuri, boala periapicală a fost indusă, dar numai grupul de caz
a primit stres condiționat de frică.
2.2. Test în câmp deschis
Activitatea locomotorie a fost evaluată printr-un test în câmp deschis pentru a cuantifica
stresul de frică condiționat de animale. Testul a fost efectuat în cutia unui câmp pătrat
deschis (1 m2 ) care avea podeaua împărțită în 25 de zone egale (20 cm2 ) (Aguiar și colab.,
2013; Gomes et al., 2013). Șobolanii au fost așezați individual în zona centrală și au fost
lăsați să exploreze o zonă liber timp de cinci minute. Traiectoria animalului a fost cuantificată
în centimetri parcurși folosind software-ul Image J (Wayne Rasband, National Institutes of
Health, Bethesda, MD). Câmpul a fost curățat cu 70% etanol după fiecare cursă, iar șobolanii
au fost apoi reîntorși în cuștile lor adecvate. Au fost efectuate două teste în câmp deschis
înainte de inducerea stresului de frică condiționat și înainte de sacrificiul animalelor.
2.3. Inducerea leziunilor inflamatorii de parodontită apicală
În testul în câmp deschis, ambele grupuri au prezentat o activitate locomotorie
similară. Boala periapicală a fost indusă la toate animalele. Leziunile inflamatorii de
parodontită apicală au fost induse la șobolani sub estezie generală cu 70 mg/kg ketamina
(Vallée, Montes Claros, MG, BR) și cu 10 mg/kg xilazină (Vallée). Expunerile pulpei au fost
efectuate la primul molar din stânga jos, folosind vârfuri de diamant # 2214 (Fava, Pirituba,
SP,
36
Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41
BR) cuplat cu un contraunghi (D700, Dabi Atlante, Ribeirão Preto, SP, BR) atașat la un motor
electric ( Beltec LB 100, Araraquara, SP, BR). Freza a fost introdusă în fosa distală, situată
medial față de cuspidul distal pe fața ocluzală a dintelui, la o adâncime de aproximativ 1
mm, cu precauție pentru a evita perforarea furcației. Dinții au fost condiționați pentru
expunerea pulpară cu scopul de a induce contaminarea bacteriană și dezvoltarea în
consecință a leziunilor inflamatorii de parodontită apicală.
2.4. Inducerea stresului de frică condiționat de animale
Metodologia stresului de frică condiționat utilizată în acest studiu a fost descrisă
anterior (Aguiar și colab., 2013; Gomes și colab., 2013). Pe scurt, începând cu ziua după
expunerea pulpei, șobolanii au fost supuși la sesiuni de stres de frică de condiționare timp
de 50 de zile consecutive într-o cameră de stres de frică de condiționare (37 cm x 25 cm x
21 cm, Skinner Box, ELT-02, El trones, Joinville). , SC, BR). În fiecare secțiune de stres,
animalele au primit prezentarea unui stimul condiționat neutru (sunet care durează două
secunde) înainte de a avea loc un șoc (cinci secunde de 1,10 mA). În timpul secțiunii de
stres, au fost eliberate șase șocuri, iar intervalul dintre fiecare șoc a fost de 25 s. Luând în
considerare procedurile, fiecare secțiune de stres a durat 185 de secunde. Animalele din
grupul de control au fost, de asemenea, plasate individual în cameră și supuse acelorași
condiții experimentale, dar sunetul pe care l-au auzit a fost doar stimulul fără șocuri
(Material suplimentar 1). Testele au fost efectuate într-o cameră experimentală cu câte un
animal la un moment dat, pentru a preveni alte animale să audă zgomotele eliberate de
animalul care a fost supus experimentului. Camera a fost curățată cu etanol 70% înainte și
după ce fiecare șobolan a intrat în ea.
2.5. Sacrificiul animalelor
Animalele au fost sacrificate prin decapitare printr-o ghilotină.
La scurt timp după sacrificiile lor, echipamentul a fost curățat și igienizat cu alcool 70%,
astfel încât șobolanii să nu poată mirosi sângele animalelor eutanasiate anterior. Imediat
după aceea, capetele fiecărui animal au fost duse individual într-o altă cameră experimentală,
unde fălcile au fost îndepărtate și separate în două hemimandibule cu un bisturiu (Bard-
Parker®, Caledonia, MI). Materialul a fost plasat în recipiente etichetate corespunzător și a
fost fixat în soluție de formol 10% timp de 48 de ore.
2.6. Radiografii și analize histologice
După fixarea cu formol în soluție de formol 10% timp de 48 de ore, s-au obținut
radiografii periapicale. Pe baza studiilor anterioare (Teixeira et al., 2011), a fost creat un
model experimental pentru a permite poziționarea standardizată a probelor, în care a fost
folosită o cutie acrilică pentru a introduce un senzor radiografic digital (WYS, Softys Dental,
Franța). O amprentă a senzorului a fost făcută cu rășină acrilică pentru a permite senzorului
să fie introdus în aceeași poziție pentru toate radiografiile. Cutia ac rylic a fost plasată peste
o platformă radiografică, întotdeauna în aceeași poziție pentru a produce radiografii
standardizate. Ma, 25 mm distanta intre tub si senzor, precum si un timp de expunere de
0,04 s. Software-ul ImageJ (Schneider, Rasband și Eliceiri, 2012) a fost utilizat pentru a
măsura aria și intensitatea radioopacității corespunzătoare leziunii periapicale radiografic
(De Rossi, Silva, Leonardo, Rocha și Rossi, 2005).
2.7. Pregătirea și analizele histologice
Toate tehnicile de laborator au fost efectuate conform protocolului
Machine Translated by Google

ESB Gomes et al. Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41

descrise anterior (Aguiar et al., 2013; Gomes et al., 2013). Pe scurt, după radiografii,
maxilarele au fost supuse decalcificării într-o soluție de EDTA 10% timp de 30 de zile,
cu modificări zilnice de soluție. După demineralizare, probele (hemi-mandibulare) au
fost incluse în parafină. Exemplarele au fost supuse secțiunilor în serie completate.
Fiecare secțiune de 5 μm a fost obținută folosind un microtom (Easy Path EP-MR10).
După ce toate mandibulele au fost secționate, fiecare a cincea secțiune (25 μm) a
fost colorată cu tricrom Gomori. Perforarea dintelui a fost, de asemenea, o referință
pentru analize. Treimea apicală atât a rădăcinii meziale cât și a celei distale colorate
cu tricrom Gomori a fost utilizată pentru a calcula dimensiunea leziunii. Im

Secțiunea posterioară mediată a secțiunii alese cu tricrom Gomori a fost, de

asemenea, colorată cu hematoxilin-eozină (HE) în scopuri de dublă verificare.
Următoarea secțiune posterioară a HE a fost colorată cu albastru de toluidină.
Probele au fost acoperite cu lame de sticlă în scopul observării și cuantificării
histologice prin microscopie (Olympus Fsx100, Center Valley, Palo Alto, CA) (Material
suplimentar 2).

2.8. Cuantificări

Cuantificarea ligamentului parodontal a fost efectuată la o mărire de 42x în

treimea apicală. Tot în treimea apicală, în interiorul ligamentului (leziunea)
parodontal, a fost evaluat numărul de celule inflamatorii. Morfologia și citochimia în
tricromul Gomori și HE au fost utilizate pentru a cuantifica celulele inflamatorii
(Material suplimentar 3). Polimorfonuclearleucocitele (PMN) sau leucocitele
mononucleare (MNL) au fost numărate folosind HE. Pe de altă parte, mastocitele au
fost cuantificate pe baza morfologiei celulare și a citochimiei conform colorării cu
albastru de toluidină. Trei câmpuri de pe punctul fierbinte al regiunii inflamate au
fost fotografiate folosind un microscop (FSX100, Olympus, Center Valley, PA, SUA),
cu o creștere de 200x fiind utilizată pentru cuantificarea celulelor inflamatorii. Toate
măsurătorile morfologice au fost efectuate folosind software-ul ImageJ (Schneider
et al., 2012), care a fost utilizat anterior (Aguiar et al., 2013; Gomes et al., 2013)
Fig. 1. Cuantificarea stresului de frică condiționată prin testul comportamentului
animal: Inducerea stresului de frică condiționată promovează schimbări
comportamentale la animalele stresate. Stresul de frică condiționat a promovat o
reducere semnificativă a distanței parcurse a fost observată la animalele stresate (P =
0,0001). Diagramele cu bare reprezintă medii, iar barele de erori reprezintă abaterea standard.
evaluat cu radiografii mandibulei. Nu au fost observate diferențe semnificative între
caz și grupul de control în ceea ce privește dimensiunea zonei de pierdere osoasă
(Fig. 2C).

2.9. analize statistice

3.3. Stresul de frică condiționat a crescut pierderea osoasă histologică

O analiză statistică a fost efectuată folosind software-ul PASW Statistics18 – SPSS

Au fost efectuate analize histopatologice pentru a compara profilul de inflamație
(IBM, Armonk, NY). Probele care au avut distribuție neparametrică (testele
al leziunilor de parodontită apicală între grupuri.
Kolmogorov-Smirnov și Shapiro-Wilk) au fost supuse unui test T independent, iar
Dezvoltarea leziunilor de parodontită apicală inflamatorie este ilustrată în Fig. 3A-D.
probele care nu au urmat această distribuție au fost supuse unui test neparametric
Destul de interesant, stresul de frică condiționat a crescut dimensiunea histologică
Mann-Whitney.
a leziunii periapicale în comparație cu grupul de control (p = 0,006, Fig. 3A).
Analiza statistică care arată încrederea peste 95% (P < 0,05) a fost considerată a fi
semnificativă. Graficele au fost create folosind GraphPad Prism 5 (GraphPad
Software, Inc., San Diego, CA).
3.4. Frica condiționată a crescut numărul total de celule inflamatorii, dar nu a
3. Rezultate schimbat profilul inflamației

3.1. Stresul de frică condiționat a redus activitatea locomotorie Stresul de frică condiționat a crescut numărul total de celule inflamatorii în
comparație cu grupul de control (p = 0,0004, Fig. 4A). Cu toate acestea, nu au fost

Activitatea locomotorie generală a măsurat stresul de frică condiționat. S-a observate diferențe în raportul dintre PMN/leucocite mononucleare (datele nu sunt

demonstrat că stresul condiționat de frică reduce activitatea locomotorie generală a prezentate). În plus, stresul condiționat de frică nu a schimbat numărul de mastocite

animalelor (Aguiar et al., 2013; Gomes et al., 2013). În studiul actual, s-a observat că dintre grupuri (Fig. 4B).

stresul condiționat de frică a redus distanța parcursă (p = 0,0001, Fig. 1 și Material

suplimentar 4). Mai mult, se observă o reducere a activității locomotorii generale ca
o consecință a comportamentelor de îngheț (Material suplimentar 1).
3.2. Stresul de frică condiționat nu a schimbat caracteristicile radiografice
Au fost efectuate radiografii de mandibule pentru a evalua aspectul macroscopic
al leziunilor de parodontită apicală (Fig. 2A). Dimensiunea radiografică a leziunii
periapicale a fost similară în loturile de caz și de control (Fig. 2B). Intensitatea
leziunilor de parodontită apicală a fost, de asemenea,
4. Discutie
Datorită limitărilor de realizare a acestui tip de cercetare la om (Poswar Fde et
al., 2015), studiul de față a fost realizat folosind un model animal, în care au fost
utilizați șobolani în vârstă de 60 de zile deoarece erau animale adulte tinere, arătând
maturitate sexuală activă. Primul molar din stânga jos a fost ales pentru inducerea
leziunilor de parodontită apicală datorită ușurinței accesului endodontic și radiografic,
precum și asemănării anatomice cu dintele uman (Dammaschke, 2010). Utilizarea
modelului de boală periapicală indusă experimental în șobolani reușesc

37
Machine Translated by Google
ESB Gomes et al.
Fig. 2. Cuantificarea radiografică a pierderii osoase: O caracteristică radiografică a leziunilor periapicale în grupul stresat și control (Fig. 2A). Nu a existat nicio diferență între grupurile de caz
și de control în densitatea leziunilor radiografice (Fig. 2B). Nu au fost observate diferențe semnificative între grupul de caz și grupul de control în ceea ce privește dimensiunea zonei de
pierdere osoasă (Fig. 2C). Diagramele cu bare reprezintă medii, iar barele de erori reprezintă abaterea standard.
posibilă studierea dinamicii evoluției leziunilor endodontice (Stashenko & Yu, 1989;
Stashenko, Yu, & Wang, 1992; Stashenko, Wang, Tani-Ishii, & Yu, 1994), permițând o
cuantificare histologică și radiografică ( Torabinejad, Corr, Buhrley, Wright și Shabahang,
2011).
În studiul de față, numărul comportamentelor de îngheț a fost mai evident la
animalele supuse șocurilor, ceea ce sugerează că stresul de frică condiționat a fost indus
cu succes. Un test în câmp deschis dezvăluie modificări ale comportamentului de anxietate,
care se caracterizează printr-o scădere a activității locomotorii în evaluarea efectuată prin
intermediul testului, care este apoi utilizată pentru a cuantifica stresul fricii condiționat de
animale (Choleris, Thomas, Kavaliers și Prato, 2001; Prut ). & Belzung, 2003; Ramos &
Mormede, 1998). Rezultatele noastre au arătat că șobolanii stresați au prezentat pierderi
osoase periapicale șifonate. Sa demonstrat că fluctuațiile de dispoziție pot influența
inflamația prin afectarea producției de citokine (Matsunaga și colab., 2011). Celule
polimorfonucleare, cum ar fi macrofagii (Hofbauer et al., 1999); celule mononucleare, cum
ar fi neutrofilele (Morimoto, Yamasaki, Nakata, Tsuji, & Nakamura, 2008); și osteoclastele,
reprezintă mecanismul principal responsabil pentru pierderea osoasă care decurge din
celulele și mediatorii inflamatori implicați în distrugerea osoasă în leziunile parodontitei
apicale induse la șobolani (Palmqvist et al., 2006; Wang, Sun, Liu, & Peng, 2014) . Citokinele
inflamatorii proinelor activează căi comune asociate cu resorbția osoasă (Solanki,
Aminoshariae, Jin, Montagnese și Mickel, 2013; Takeichi, Saito, Tsurumachi, Moro și Saito,
1996). Citokinele precum IL-1β, IL-6, TNF-α și PGE-2, printre altele proinflamatorii, au fost
legate de patogeneza leziunilor toperiapicale (Gazivoda și colab., 2009). În parodontologia,
a fost stabilit efectul stresului condiționat de frică asupra pierderii osoase (Aguiar et al.,
2013; Branco-de-Almeida et al., 2012; Gomes et al., 2013). De asemenea, rezultatele noastre
au sugerat că stresul condiționat de frică poate juca un rol în dezvoltarea leziunilor de
parodontită apicală.
În acest studiu, leziunile de ontită inflamatorie a perioadei apicale induse experimental
la șobolani au promovat expansiunea și resorbția osoasă, în acord cu alte studii (da Silva,
Ferreira, De Rossi, Nelson-Filho și Silva, 2012; Dill și colab., 2015; Kawashima ). și colab.,
2007; Menezes și colab., 2008; Morimoto și colab., 2008; Solanki și colab., 2013; Takeichi și
colab., 1996; Zhang, Yu și Miao, 2012). In general, parodontita apicala inflamatorie
38
Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41
este diagnosticat pe baza asocierii rezultatelor radiografice clinice și convenționale
(Diegues et al., 2011). Pentru a simula modul în care un clinician ar percepe parodontita
apicală, studiul actual a folosit radiografii convenționale. Analiza radiografică nu a indicat
diferențe în pierderea osoasă atât pentru animalele stresate, cât și pentru cele nestresate
din
perioada de dezvoltare (60 de zile) a leziunilor de parodontită apicală. Rezultatele noastre
ar putea fi explicate prin limitarea acurateței radiografice în detectarea modificărilor
periapicale până la 90 de zile de evaluare (Carrillo et al., 2008).
Pe de altă parte, evaluarea histologică este standardul de aur pentru diagnosticul
leziunilor de parodontită apicală inflamatorie (Diegues et al., 2011), dar la pacienți nu este
posibilă efectuarea de rutină. Nu s-au observat diferențe în raportul dintre PMN/leucocite
mononucleare. În plus, nu a fost verificată nicio diferență semnificativă între grupuri în
raport cu unele mastocite. Aceste rezultate coroborează studiile anterioare care au evaluat
efectul fricii condiționate asupra stresului
boli parodontale (Aguiar et al., 2013; Gomes et al., 2013). Nu există studii morfologice
cantitative privind leziunile induse de parodontită apicală la șobolani supuși stresului
condiționat de frică. Destul de interesant, în studiile anterioare cu oameni, numărul de
mastocite a fost legat de tipul de boală (Fonseca-Silva et al., 2012; Shiromany et al., 2014).
Cu toate acestea, dezvoltarea apicală în leziuni inflamatorii a fost demonstrată anterior
(Stashenko și colab., 1992). Obiectivul studiului actual este resorbția osoasă. Astfel,
tehnicile de screening morfologic prezentate aici nu au evidențiat diferențe în modelele
patologice. Tehnicile viitoare la scară largă ar putea fi utile pentru a distinge dacă există
diferențe moleculare (Khurshid și colab., 2016).
În concluzie, rezultatele noastre au demonstrat că stresul condiționat de frică ar putea
modifica leziunea aperiapicală prin creșterea dimensiunii pierderii osoase acolo. Stresul
condiționat de frică a crescut, de asemenea, numărul total de in
celule inflamatorii comparativ cu grupul martor. Ar trebui încurajate studiile care evaluează
impactul stresului fricii condiționate asupra periapicalului uman în leziunile inflamatorii.
Declarație privind conflictul de interese
Autorii neagă orice conflict de interese legat de acest studiu.
Machine Translated by Google

ESB Gomes et al. Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41

Fig. 3. Evaluarea histologică a leziunii periapicale: Comparația pierderii osoase între grupuri a fost prezentată în săgeți verzi (Fig. 3A-D). Îngroșarea ligamentului parodontal; unde arată o
pierdere osoasă mai semnificativă în grupul de caz decât în grupul de control (P = 0,006) (Fig. 3A și B). Imagine utilizată pentru a cuantifica suprafața și reprezentarea regiunii de interes (ROI)
a ambelor grupuri (Fig. 3C și respectiv D). Diagramele cu bare reprezintă medii, iar barele de erori reprezintă abaterea standard.

39
Machine Translated by Google
ESB Gomes et al.
Fig. 4. Evaluarea histologică a celulelor inflamatorii: Cuantificarea celulelor inflamatorii totale a fost prezentată în Fig. 4A; o diferență semnificativă între grupuri a fost demonstrată în
analize, grupul de caz prezentând un număr total mai mare de celule inflamatorii în grupul de control (P = 0,0004). Numărarea mastocitelor a fost prezentată în Fig. 4B. Nu au fost
observate diferențe de mastocite între grupuri (P = 0,114). Diagramele cu bare reprezintă medii, iar barele de erori reprezintă abaterea standard.
Mulțumiri
Acest studiu a fost susținut de granturi de la Conselho Nacional de Desenvolvimento
Científico e Tecnológico (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível
Superior (CAPES) și Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais
(FAPEMIG)). Dr. Guimarães, Dr. Santos și Dr. de Paula sunt bursieri de cercetare ai CNPq.
Anexa A. Date suplimentare
Material suplimentar legat de acest articol poate fi găsit, în versiunea online, la doi:https://
doi.org/10.1016/j.archoralbio.2018.10.
004.
Referințe
Aguiar, JC, Gomes, EP, Fonseca-Silva, T., Velloso, NA, Vieira, LT, Fernandes, MF, ... Guimaraes, AL
(2013). Fluoxetina reduce progresia bolii parodontale într-un model de stres condiționat de
frică la șobolani. Journal of Periodontal Research, 48(5), 632–637.
Becconsall-Ryan, K., Tong, D. și Love, RM (2010). Leziuni inflamatorii radiotransparente ale
maxilarului : o analiză de douăzeci de ani. International Endodontic Journal, 43(10), 859–865.
Berar, AM, Bondor, CI, Matros, L. și Campian, RS (2016). Evaluarea radiologică, histologică și
imunohistochimică a leziunilor inflamatorii periapicale. Revista Română de Morfologie și
Embriologie, 57(2), 419–425.
Blalock, JE (1994). Sintaxa comunicării imuno-neuroendocrine. Immunology Today, 15(11), 504–
511.
Branco-de-Almeida, LS, Franco, GC, Castro, ML, Dos Santos, JG, Anbinder, AL, Cortelli, SC, ...
Rosalen, PL (2012). Fluoxetina inhibă răspunsul inflamator și pierderea osoasă într-un model
de șobolan de parodontoză indusă de ligatură. Revista de parodontologia, 83(5), 664–671.
Carrillo, C., Penarrocha, M., Ortega, B., Marti, E., Bagan, JV, & Vera, F. (2008).
Corelația dimensiunii radiografice și prezența laminei radioopace cu constatările histologice
în 70 de leziuni periapicale. Jurnal de chirurgie orală și maxilo-facială, 66(8), 1600–1605.
Caruntu, C., Boda, D., Musat, S., Caruntu, A., & Mandache, E. (2014). Activarea mastocitelor indusă
de stres în pielea glabră și păroasă. Mediatori ai inflamației, 2014, 105950.
Choleris, E., Thomas, AW, Kavaliers, M. și Prato, FS (2001). O analiză etologică detaliată a testului
în câmp deschis la șoarece: Efectele diazepamului, clordiazepoxidului și a unui câmp
magnetic pulsat de frecvență extrem de joasă. Recenzii de neuroștiință și biocomportament,
25(3), 235–260.
Chrousos, GP și Gold, PW (1992). Conceptele de stres și tulburări ale sistemului de stres.
Privire de ansamblu asupra homeostaziei fizice și comportamentale. Jurnalul Asociației
Medicale Americane, 267(9), 1244–1252.
da Silva, RA, Ferreira, PD, De Rossi, A., Nelson-Filho, P., & Silva, LA (2012). Toll like receptor 2
soareci knockout au arătat o mărime crescută a leziunii periapicale și a numărului de
osteoclaste. Journal of Endodontics, 38(6), 803–813.
Dammaschke, T. (2010). Dinții molari de șobolan ca model de studiu pentru cercetarea directă a
acoperirii pulpare în stomatologie. Animale de laborator, 44(1), 1–6.
40
Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41
de Queiroz, AM, Arid, J., Nelson-Filho, P., Lucisano, MP, Silva, RA, Sorgi, CA, ...
Silva, LA (2016). Corelația dintre nivelurile de endotoxine bacteriene din canalele radiculare
ale dinților primari și zona leziunii periapicale. Journal of Dentistry for Children, 83(1),
9–15.
De Rossi, A., Silva, LA, Leonardo, MR, Rocha, LB și Rossi, MA (2005). Efectul instrumentației
rotative sau manuale, cu sau fără un pansament intracanal de hidroxid de calciu/1%
clorhexidină, asupra vindecării leziunilor periapicale cronice induse experimental.
Chirurgie orală, Medicină orală, Patologie bucală și Radiologie orală, 99(5), 628–636.
Diegues, LL, Colombo Robazza, CR, Costa Hanemann, JA, Costa Pereira, AA și Silva, CO (2011).
Corelația dintre diagnosticele clinice și histopatologice în leziunile inflamatorii periapicale.
Journal of Investigative and Clinical Dentistry, 2(3), 184–186.
Dill, A., Letra, A., Chaves de Souza, L., Yadlapati, M., Biguetti, CC, Garlet, GP, ... Silva, RM (2015).
Analiza polimorfismelor multiple de citokine la indivizii cu leziuni carioase profunde netratate
relevă IL1B (rs1143643) ca factor de susceptibilitate pentru dezvoltarea leziunilor periapicale.
Journal of Endodontics, 41(2), 197–200.
Doyle, CJ și Bartold, PM (2012). Cum influențează stresul parodontoza? Jurnalul de
Academia Internațională de Parodontologia, 14(2), 42–49.
Fan, R., Sun, B., Zhang, CF, Lu, YL, Xuan, W., Wang, QQ, ... Yin, XZ (2011).
Activator receptor al ligandului factorului nuclear kappa B și expresiei osteoprotegerinei în
parodontita apicală cronică: asociere posibilă cu celulele inflamatorii. Chinese Medical
Journal (Anglia), 124(14), 2162–2166.
Fonseca-Silva, T., Santos, CC, Alves, LR, Dias, LC, Brito, M., Jr, De Paula, AM, ...
Guimaraes, AL (2012). Detectarea și cuantificarea mastocitelor, a factorului de creștere
vascular și dotelial și a densității microvaselor în chisturile și granuloamele periapicale
inflamatorii umane. International Endodontic Journal, 45(9), 859–864.
Gazivoda, D., Dzopalic, T., Bozic, B., Tatomirovic, Z., Brkic, Z., & Colic, M. (2009).
Producerea de citokine proinflamatorii și imunoreglatoare de către celulele inflamatorii
din leziuni periapicale în cultură. Journal of Oral Pathology & Medicine, 38(7), 605–611.
Godinho, EL, Farias, LC, Aguiar, JC, Martelli-Junior, H., Bonan, PR, Ferreira, RC, ... Guimaraes, AL
(2011). Nicio asociere între boala parodontală și GHQ-12 într-o populație de poliție braziliană.
Medicina Oral, Patología Oral y Cirugía Bucal, 16(6), e857–863.
Gomes, EP, Aguiar, JC, Fonseca-Silva, T., Dias, LC, Moura-Boas, KP, Roy, A., ...
Guimaraes, AL (2013). Diazepamul inversează pierderea osoasă alveolară și interleukina-1beta
și interleukina-6 din hipocamp, îmbunătățite de stresul condiționat de frică în boala
parodontală indusă de ligatură la șobolani. Journal of Periodontal Research, 48(2), 151–158.
Hofbauer, LC, Lacey, DL, Dunstan, CR, Spelsberg, TC, Riggs, BL și Khosla, S.
(1999). Interleukina-1beta și factorul de necroză tumorală-alfa, dar nu și interleukina-6,
stimulează expresia genei ligandului de osteoprotegerină în celulele osteoblastice umane.
Os, 25(3), 255–259.
Jiang, J., Zuo, J., Chen, SH și Holliday, LS (2003). Hidroxidul de calciu reduce li
formarea de osteoclaste stimulată de popolizaharide. Chirurgie orală, medicină orală,
patologie orală și radiologie orală, 95(3), 348–354.
Kawashima, N., Suzuki, N., Yang, G., Ohi, C., Okuhara, S., Nakano-Kawanishi, H., ... Suda, H.
(2007). Cinetica expresiilor RANKL, RANK și OPG în leziunile periapicale de șobolan induse
experimental. Chirurgie orală, Medicină orală, Patologie bucală și Radiologie orală, 103(5),
707–711.
Khurshid, Z., Zohaib, S., Najeeb, S., Zafar, MS, Rehman, R. și Rehman, IU (2016).
Progresele științelor proteomice în stomatologie. Jurnalul Internațional de Științe
Moleculare, 17(5).
Kojima, S., Kumazaki, T., Ishii, S., & Miura, K. (1998). Structura primară a streptomicelor
Machine Translated by Google
ESB Gomes et al.
metaloendopeptidaza II griseus. Bioștiință, biotehnologie și biochimie, 62(7), 1392–1398.
Krajewski, AC, Biessei, J., Kunze, M., Maersch, S., Perabo, L., & Noack, MJ (2009).
Influența lipopolizaharidei și a interleukinei-6 asupra expresiei și eliberării RANKL și OPG
în celulele ligamentului parodontal uman. Acta Pathologica, Microbiologica, et
Immunologica Scandinavica, 117(10), 746–754.
Li, X. (2012). Utilizarea modelului animal de stres condiționat de frică (CFS) pentru a înțelege
mecanismele neurobiologice și tratamentul farmacologic al anxietății. Shanghai Archives
of Psychiatry, 24(5), 241–249.
Mashaghi, A., Marmalidou, A., Tehrani, M., Grace, PM, Pothoulakis, C. și Dana, R.
(2016). Substanța neuropeptidică P și răspunsul imun. Cellular and Molecular Life Sciences,
73(22), 4249–4264.
Matsunaga, M., Isowa, T., Yamakawa, K., Tsuboi, H., Kawanishi, Y., Kaneko, H., ... Ohira, H.
(2011). Asocierea dintre nivelurile de fericire percepute și nivelurile de citokine
proinflamatorii circulante periferice la adulții de vârstă mijlocie din Japonia. Neuro
Enocrinology Letters, 32(4), 458–463.
Matsuo, T., Ebisu, S., Shimabukuro, Y., Ohtake, T., & Okada, H. (1992). Analiza cantitativă a
celulelor imunocompetente în leziunile periapicale umane: corelații cu constatările
clinice ale dinților implicați. Journal of Endodontics, 18(10), 497–500.
Menezes, R., Garlet, TP, Letra, A., Bramante, CM, Campanelli, AP, Figueira Rde, C., ... Garlet, GP
(2008). Modele diferențiate de activator de receptor al expresiei ligandului/osteoprotegerinei
factorului nuclear kappa B în granuloamele periapicale umane: asociere posibilă cu natura
progresivă sau stabilă a leziunilor. Jurnalul de Endodontie, 34(8), 932–938.
Morimoto, T., Yamasaki, M., Nakata, K., Tsuji, M. și Nakamura, H. (2008). Expresia elastazelor
de macrofage și neutrofile în leziunile periradiculare de șobolan. Journal of Endodontics,
34(9), 1072–1076.
Palmqvist, P., Lundberg, P., Persson, E., Johansson, A., Lundgren, I., Lie, A., ... Lerner, U.
H. (2006). Inhibarea osteoclastogenezei stimulate de hormoni și citokine și a resorbției
osoase de către interleukina-4 și interleukina-13 este asociată cu creșterea
osteoprotegerinei și scăderea RANKL și RANK într-o cale dependentă de STAT6.
Journal of Biological Chemistry, 281(5), 2414–2429.
Poswar Fde, O., Farias, LC, Fraga, CA, Bambirra, W., Jr, Brito-Junior, M., Sousa-Neto, MD, ...
Guimaraes, AL (2015). Bioinformatica, analiza rețelelor de interacțiune și rețelele neuronale
pentru a caracteriza expresia genică a chistului radicular și a granulomului periapical.
Journal of Endodontics, 41(6), 877–883.
Prut, L., & Belzung, C. (2003). Câmpul deschis ca paradigmă pentru măsurarea efectelor
medicamente pentru comportamente asemănătoare anxietății: o revizuire. Jurnalul European de Farmacologie,
463( 1-3), 3–33.
Ramos, A., & Mormede, P. (1998). Stresul și emoționalitatea: o abordare multidimensională și
genetică. Neuroscience & Biobehavioral Reviews, 22(1), 33–57.
Ribatti, D. (2013). Mastocitele și macrofagele exercită efecte benefice și dăunătoare asupra
progresiei tumorale și angiogenezei. Scrisori de imunologie, 152(2), 83–88.
Schneider, CA, Rasband, WS și Eliceiri, KW (2012). NIH imagine to imageJ: 25 de ani
a analizei imaginii. Nature Methods, 9(7), 671–675.
Semenoff-Segundo, A., Porto, AN, Semenoff, TA, Cortelli, JR, Costa, FO, Cortelli, S.
41
Arhivele de biologie orală 97 (2019) 35–41
C., ... Bosco, AF (2012). Efectele a două modele de stres cronic asupra parodontitei induse
de ligatură la șobolanii Wistar. Arhivele de biologie orală, 57(1), 66–72.
Shiromany, A., Sood, R., Akifuddin, S., Sidhu, GK, Khan, N. și Singla, K. (2014).
compararea mastocitelor și a celulelor inflamatorii din leziunile periapicale și compararea
mastocitelor degranulate între zona fibroasă și cea inflamată în chisturile radiculare: un
studiu imunohistochimic. Jurnalul de cercetare clinică și de diagnosticare, 8(12) ZC61-64.
Solanki, P., Aminoshariae, A., Jin, G., Montagnese, TA și Mickel, A. (2013). Efectul acidului
docosahexaenoic (DHA) asupra expresiei IL-1ss, IL-6, IL-8 și TNF-alfa în macrofagele
normale și stimulate de lipopolizaharide (LPS). Quintessence International, 44(6), 393.
Souza, LR, Fonseca-Silva, T., Santos, CC, Oliveira, MV, Correa-Oliveira, R.,
Guimaraes, AL, ... De Paula, AM (2010). Asocierea densităților mastocitelor, leucocitelor
eozinofile și microvaselor în cheilita actinică și carcinomul scuamos al buzelor .
Histopatologie, 57(6), 796–805.
Stashenko, P. și Yu, SM (1989). Inversarea celulelor T helper și T supresoare în timpul
dezvoltării leziunilor periapicale induse de șobolan. Journal of Dental Research, 68(5),
830–834.
Stashenko, P., Wang, CY, Tani-Ishii, N. și Yu, SM (1994). Patogenia leziunilor periapicale induse
de șobolan . Chirurgie orală, Medicină orală, Patologie bucală și Radiologie orală, 78(4),
494–502.
Stashenko, P., Yu, SM și Wang, CY (1992). Cinetica celulelor imune și a osului re
răspunsuri sorbtive la infecțiile endodontice. Journal of Endodontics, 18(9), 422–426.
Susin, C. și Rosing, CK (2003). Efectul stresului cronic moderat variabil asupra bolii parodontale
induse de ligatură la șobolanii Wistar. Acta Odontologica Scandinavica, 61(5), 273–277.
Takeichi, O., Saito, I., Tsurumachi, T., Moro, I., & Saito, T. (1996). Exprimarea genelor de
citokine inflamatorii in vivo de către leucocite polimorfo-nucleare derivate din os
alveolar uman izolate din locurile inflamate cronic de resorbție osoasă.
Calcified Tissue International, 58(4), 244–248.
Teixeira, RC, Rubira, CM, Assis, GF, Lauris, JR, Cestari, TM și Rubira-Bullen, I.
R. (2011). Evaluarea radiologică și histopatologică a leziunii periapicale induse experimental
la șobolani. Journal of Applied Oral Science, 19(5), 500–504.
Theoharides, TC și Cochrane, DE (2004). Rolul critic al mastocitelor în bolile inflamatorii și
efectul stresului acut. Journal of Neuroimmunology, 146(1-2), 1–12.
Torabinejad, M., Corr, R., Buhrley, M., Wright, K. și Shabahang, S. (2011). Un model animal
pentru studiul endodonției regenerative. Journal of Endodontics, 37(2), 197–202.
Wang, L., Sun, Z., Liu, L. și Peng, B. (2014). Exprimarea CX3CL1 și a receptorului său,
CX3CR1, în dezvoltarea leziunilor periapicale. Jurnalul Internațional de Endodonție, 47(3),
271–279.
Wippert, PM, Rector, M., Kuhn, G. și Wuertz-Kozak, K. (2017). Stresul și modificările oaselor: o
perspectivă interdisciplinară. Frontiers in Endocrinology (Lausanne), 8, 96.
Zhang, M., Yu, Y. și Miao, Y. (2012). Expresia și semnificația activatorului receptor al ligandului
factorului nuclear kappaB și osteoprotegerinei în chistul periapical și granulomul
periapical. Hua Xi Kou Qiang Yi Xue Za Zhi, 30(4), 360–363.