Metode optice de determinare a concentraţiei unei soluţii:

Spectrofotometria

Asist. Univ. Dr. Filippi Alexandru

 Unde longitudinale/Unde transversale

Ex.: Sunet Ex.: Lumină

1
v=f∙ λ f=
𝑇

http://www.goodrichscience.com/6-aa-logitudinal-and-transverse-waves.html http://hyperphysics.phy-astr.gsu.edu/hbase/wavrel.html#c2
Unde electromagnetice

https://commons.wikimedia.org/wiki/File:EM-Wave.gif
 Spectre
• Totalitatea valorilor pe care le poate avea un
parametru care caracterizează un sistem.
Spectrul electromagnetic
 Metode spectrometrice

UV-Vis
 Toate corpurile emit radiații
electromagnetice

https://physics.stackexchange.com/questions/304299/
how-heated-metal-colors-relate-to-black-body-color-at-the-same-temperature http://www.sun.org/encyclopedia/black-body-radiation
 Toate corpurile emit radiații
electromagnetice

http://www.spitzer.caltech.edu/images/2154-sig08-004-Hands-in-a-Bag-color-Visible-vs-Infrared-Light
Tipuri de spectre

Spectru continuu

Spectru de linii – emisie

Spectru de linii – absorbție

Absorbția și emisia de lumină de către
atomi

https://montessorimuddle.org/2012/02/01/emission-spectra-how-atoms-emit-and-absorb-light/
http://www.pixelsham.com/2019/11/28/space-bodies-components-spectroscopy/
Moleculele sunt mai complicate decât atomii...

Spectrul de absorbție în vizibil al apei

https://chem123chirp.chem.ubc.ca/conformation-section/
Fiecare moleculă are un spectru de
absorbție specific
 Spectrofotometru

S M B/P D A I
 Legea Lambert-Beer

𝐼 = 𝐼0 ∙ 10−ε∙𝐶∙𝑙

𝐼 I
𝑇 = = 10−ε∙𝐶∙𝑙
𝐼0
𝐼
T(%) = ∙ 100
𝐼0

1 𝐼0
𝐴 = 𝑙𝑔 𝑇 = 𝑙𝑔 𝐼

𝑨=𝜺∙𝑪∙𝒍
 Absorbanța este proporțională cu
lungimea parcursului luminii în probă

𝐼1

𝐴1 = 𝜀 ∙ 𝐶 ∙ 𝑙

𝐴2 = 𝜀 ∙ 𝐶 ∙ 2𝑙

𝐼2
𝑨𝟐 = 𝟐 ∙ 𝑨𝟏
Absorbanța este proporțională cu
concentrația probei

𝐼1

𝐴1 = 𝜀 ∙ 𝐶 ∙ 𝑙

𝐴2 = 𝜀 ∙ 2𝐶 ∙ 𝑙

𝐼2 𝑨𝟐 = 𝟐 ∙ 𝑨𝟏
Absorbanța este proporțională cu
concentrația probei

~138 µM

https://www.edinst.com/blog/the-beer-lambert-law/
 Condiții pentru a putea aplica legea
Lambert-Beer
• Fasciculul incident să fie să fie monocromatic
 Condiții pentru a putea aplica legea
Lambert-Beer
• Fasciculul incident să aibă raze paralele și să fie perpendicular pe probă

• Amplitudinea fenomenelor de reflexie și absorbție la nivelul pereților

probei să fie neglijabile
 Condiții pentru a putea aplica legea
Lambert-Beer
• Parcursul prin probă să fie constant pe întreaga arie
de secțiune a fasciculului

𝑨=𝜺∙𝑪∙𝒍

?
 Condiții pentru a putea aplica legea
Lambert-Beer
• Proba să fie omogenă și relativ diluată

𝑨=𝜺∙𝑪∙𝒍
Proba să fie relativ diluată

Aprox. 10mM

𝑨=𝜺∙𝑪∙𝒍 𝑨 = 𝒇𝒖𝒏𝒄𝒕𝒊𝒆
𝒄𝒊𝒖𝒅𝒂𝒕𝒂 𝒅𝒆 𝑪
 Exemplu practic

1. verificați dacă în
10mM
ambele cuvete se află
aceeași substanță (la
concentrații diferite)

1. Aflați concentrația
probei cu concentrație
?
necunoscută
 Exemplu practic – identificarea substanței

0 mM

10mM

?
Exemplu practic – determinarea concentrației

2,5 1,25 0,63

10mM 5mM 0 mM
mM mM mM

la 560 nm 10 mM 5 mM 2.5 mM 1.25 mM 0.625 mM x

Absorbanta 1.50 0.78 0.41 0.21 0.10 0.55
Exemplu practic – determinarea concentrației
la 560 nm 10 mM 5 mM 2.5 mM 1.25 mM 0.625 mM x
Absorbanta 1.50 0.78 0.41 0.21 0.10 0.55

𝑨 = 𝜺𝒄𝒍
pt 10mM: 1,5 = 𝟏𝟎𝜺𝒍 𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟓
pt 5mM: 0,78 = 𝟓𝜺𝒍 𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟓6
pt 2,5mM: 0,41 = 𝟐, 𝟓𝜺𝒍 𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟔𝟒
pt 1,25mM: 0, 𝟐𝟏 = 𝟏, 𝟐𝟓𝜺𝒍 𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟔𝟖
pt 0,625mM: 0,1 = 𝟎, 𝟔𝟐𝟓𝜺𝒍 𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟔

𝜺𝒍 = 𝟎, 𝟏𝟓𝟗𝟔

Pt. x: 𝐶𝑥 = 3,5 𝑚𝑀
0,55 = 𝑥 ∙ 0,1596 𝑥 = 3,45 mM
Vă mulțumesc pentru atenție!

- Întrebări -