Histologie Curs 04 01/11/2001

ESUTUL CONJUNCTIV
I. Matricea conjunctiv extracelular
Componente obligatorii : - celule conjunctive - substan fundamental - fibre conjunctive Ultimele dou de mai sus formeaz matricea conjunctiv extracelular. Definiie : un ansamblu de macromolecule polizaharidice i proteice secretate de celulele conjunctive i asamblate local ntr-o reea mai mult sau mai puin omogen Rol : - iniial : stabilim din punct de vedere fizic esutul = mas inert - n prezent : intervine n : + migrarea celulelor + diviziunea i diferenierea celular + determinarea situsului funcional al fiecrei celule - la nivelul macromoleculelor matricei conjunctive se fixeaz hormoni i factorii de cretere = ansamblu de semnale pentru celulele conjunctive - macromoleculele polizaharidice proteice se fixeaz pe suprafaa celulelor conjunctive prin intermediu receptorilor membranari i glicoproteinelor de adezivitate - receptorii pot fi : + integrine + integrin-like + non-integrine - glicoproteinele de adezivitate - au rol de intermediari : + fibronectina + laminina Toate macromoleculele m.c.c. sunt secretate local de ctre celulele conjunctive (excepii : elementele figurate sangvine) Compoziia chimic depinde de : - tipul de celul implicat n secreie - gradul de difereniere a celulei - statusul metabolic celular Componente de baz ale matricei conjunctive : 1. Proteine fibroase - din structura fibrelor conjunctive : colagen i elastina : fibre de colagen, reticulin, fibre elastice - proteine structurale de adezivitate : fibronectina i laminina (?) 2. GAG i proteoglicanii

1/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

- proteine fibrilare dau rezistena esutului la traciune i ntindere, cele elastice asigur flexibilitatea i elasticitatea - rolul proteinelor de adezivitate stabilitatea din punct de vedere fizic GAG * molecule polizaharidice neramificate * au pe suprafaa moleculei numeroase sarcini negative datorit radicalilor sulfat i carboxil * cu excepia acidului hialouronic formeaz proteoglicanii prin legturi covalente cu miezuri proteice Att GAG ct i proteoglicanii atrag ioni osmotic activi de tipul Na, acetia la rndul lor atrag apa. Sunt responsabili de crearea unei consistene de gel puternic hidratat i gros, stare caracteristic substanelor fundamentale a esutului conjunctiv Creeaz presiunea de turgescen a esutului conjunctiv rezistena la compresiune Proteine fibroase din structura fibrelor conjunctive I. Colagenul - este una dintre proteinele structurale foarte rspndite n organism - 25% din proteinele structurale - 6% din greutatea corpului - molecula are o greutate de 28500 Da (Daltoni) i forma unui bastona cu lungimea de 300 micrometri i diametrul de 1,5 nanometri - este un triplu helix format din 3 lanuri 1 i 2 care se spiralizeaz fiecare n jurul unui ax propriu i apoi unul n raport cu cellalt triplu helix Un lan : + 1050 de resturi de aminoacizi + spiralizat n jurul unui ax propriu + pe fiecare tur de spir prezint 3 aminoacizi + la fiecare al treilea se gsete glicina - formula general a unui lan : -(-Y-Gly-X-)-n unde Y = hidroxilizina i X = prolina i lizina. - compoziia molecular : * Gly = 33% * Pro = 12% * HO-Pro = 12% * HO-Lys = 10% * restul alte reziduuri de aminoacizi care fac diferena dintre lanurile 1 i 2 * mai exist i fragmente oligozaharidice care se fixeaz la nivelul reziduurilor de hidroxilizin - moleculele de colagen = glicoprotein Colagenul are un component diferit fa de matricea conjunctiv Poate fi fibrilar sau afibrilar Se cunosc pn la 25 de tipuri de colagen, dintre care 5 sunt mai rspndite 2/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

Colagen fibrilar : cnd e secretat n spaiul extracelular, polimerizeaz spontan n fibrile i apoi n fibre de colagen (exemplu : colagen I, II, III, V, IX, X, XI). I, II, III, V, XI poate realiza fibrile omogene cu acelai tip de colagen IX, X poate realiza fibrile heterogene cu colagenul de tip II Colagenul afibrilar : IV, VI, VII, VIII; nu se organizeaz n fibrile dac att la captul NH3 terminal ct i COOH terminal prezint domenii globulare - se poate ataa periodic fibrelor de colagen care poate forma reele ZD n lamina bazalis Cele mai rspndite tipuri de colagen : Tip I : + 90% din cantitatea total de colagen + compoziie : 1; 3 lanuri de 1 (I) + localizare : esutul conjunctiv din piele, tendon, ligamente, dentin, scler, fascii i capsulele organelor parenchimatoase + rol : de rezisten la ntindere i tensiune Tip II : + 3 lanuri de 1 (II) + localizare : cartilajul hialin i elastic, notocord, discuri intervertebrale, formate din fibrocartilaj + rol : asigur forma i rezistena la deformare Tip III : + 3 lanuri de 1 (III) + localizare : formeaz fibrele de reticulin , stroma conjunctiv a unor organe (uter, ficat, splin, rinichi, plmni, etc.), structurile muchiului neted, endoneurium, vase de snge i pielea fetal + rol : asigur suportul structural i elasticitate Tip IV : + colagen amorf + compoziie : 3 lanuri de 1 (IV) i 3 lanuri de 2 (IV) + localizare . lacunele bazale ale epiteliilor, ale endoteliilor vasculare, ale glomerulilor renali i n structura cristalinului + rol : suport i barier de filtrare Tip V : + compoziie : 2 lanuri de 1 (V) i 1 lan de 2 (V) + localizare : formeaz lamina bazalis ale fibrelor musculare netede i striate, celulelor Schwann, ale celulelor gliale, epiteliul placentar + rol : suport i alte roluri Modalitatea de sintez a moleculelor de colagen Biosinteza colagenului Cea mai activ celul care secret colagen este fibroblastul Sinteza de colagen are loc n 2 etape : intracelular i extracelular I. Etapa intracelular 1. Endocitoza prin care celula i procur aminoacizii eseniali de tipul Pro 2. Transcripia i traducerea 3. Modificri posttranslaionale

3/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

2. Transcrierea i traducerea Cele 2 lanuri 1 i 2 sunt codificate de cromozomii 7 i respectiv 17 Pentru fiecare lan pro- (la nivelul RER) se va sintetiza o molecul de ARNm care va copia informaia de la cromozomul 7 i 17. Molecula de ARNm ajung n citoplasm i vor traduce informaia copiat n sinteza lanului pro- Fiecare lan pro- este mult mai mare dect lanul final . Lanul pro- are la capete peptide de extensie . la captul N terminal 150 aminoacizi = peptid semnal ; iar la captul C terminal are 250 de aminoacizi = grup de aminoacizi extra Aceste peptide de extensie au rolurile: + peptidele de la captul C terminal iniiaz i controleaz spiralizarea lanurilor n jurul axului propriu i formarea triplului helix + peptidele de la captul N terminal va ptrunde prima n canalul RER i va fi scindat de nite peptidaze existente n lumen, clivarea servind pe post de semnal, fiind momentul cheie pentru nceperea celei de-a 3 etape. 3. Modificri posttranslaionale a) hidroxilarea reziduurilor de Pro i Lys - o reacie enzimatic catalizat de peptidil prolin hidrolaz i respectiv de peptidil lizin hidrolaz - n urma reaciei de hidroxilare rezult 3 HO-Pro, 4 HO-Pro i 4 HO-Lys - reacia de hidroxilare necesit vitamina C, fier, -cetoglutarat i oxigen - lipsa vitaminei C determin lipsa de hidroxilare a colagenului care se va autodigera la nivelul fibroblastului lips de colagen n matrice fragilitate vascular cu sngerri la nivelul mucoaselor (epistaxis) - se va administra vitamina C post operator pentru cicatrizare b) glicozilarea reziduurilor de hidroxilizin - se realizeaz cu ajutorul a 2 enzime : glicozil transferaza i galactozil transferaza - se aduc fragmente de oligozaharide (glucozil- i galactozil-) la hidroxilizin astfel nct molecula nu mai este un peptid pur ci o glicoprotein c) formarea triplului helix - formarea moleculei de colagen la nivelul RER - intervine peptida semnal de la captul C terminal care iniiaz spiralizarea , rezult molecula de procolagen cu poriunea central triplu helix, iar la capete lan 1, 2 rmn paralele ntre ele fiind spiralate doar n jurul axului propriu d) mpachetarea procolagenului n microvezicule golgine e) micarea microveziculelor secretorii asistat de microfilamente i microtubuli f) exocitoz n spaiul extracelular II. Etapa extracelular

4/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

a) Moleculele de procolagen sunt atacate de procolagen peptidaze n spaiul extracelular i se transform n tropocolagen. Procolagen peptidazele vor aciona la capetele moleculei de procolagen scindnd din capetele nespiralizate b) Polimerizarea colagenului nu nainte de a realiza la nivelul HO-Lys o dezaminare oxidativ cu ajutorul liziloxidazei - aldehide reactive responsabile de formarea unor cross-link-ri (puni de legtur ntre aldehidele apropiate din moleculele vecine); rezult fibrile de colagen care pot avea dimensiuni de 20200 de nm. Fibrilele vor forma fibrile de colagen (20 microni diametru) sau reticulin (1 micron diametru) dc+di= 69 nm datorit aezrii moleculelor de colagen n cadrul fibrilei Se aeaz n iruri lsnd un spaiu de 35 nm (gap) irurile se dispun ntre ele paralel i echidistant, dar se defazeaz fiecare ir cu 69 nm. La capete moleculele de colagen se ataeaz de metale grele, rezultnd aspectul striat caracteristic al fibrei de colagen La microscopul optic cele mai groase fibre conjunctive cu diametrul de 20 microni, nu se ramific, nu se anastomozeaz, au capacitatea de a forma benzi(panglici) se aeaz paralel ntre ele formnd benzile ce se pot dispune paralel sau n reea Din punct de vedere al tehnicii de colorare fibrele de colagen se pot colora cu HE n roz (acidofile) sau cu tehnici topografice : Van Giesson brun rocat; Azan albastru; Malory albastru; Masson verde. Fibrele de reticulin (colagen III cu coninut mare de oligozaharide) nu se coloreaz n HE se poate expune prin impregnare argentic brun nchis spre negru. Tehnica Pass colorate n rou-violet Fibrele de reticulin sunt mai subiri, se ramific i se anastomozeaz fibroreticul din structura esutului conjunctiv reticulat Celulele productoare de colagen: - fibroblaste - celule mezenchimale - miofibroblaste - celule perineuronale - cementoblaste (de la cementul dentar) - odontoblaste (tapeteaz cavitatea pulpar) - osteoblaste - celule cartilaginoase - unele celule musculare netede - celule epiteliale - adipocite - celule Schwann - toate celulele gliale

5/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

ELASTINA Formeaz fibrele elastice Sinteza de elastin se face n aceleai celule ca i colagenul i este corelat cu sinteza acestuia G = 72000 Da Are : - 33% glicin - 10% prolin - urme fine (28-34 de reziduuri) de lizin - 55-60% reziduuri de aminoacizi nepolari de tipul desmozinei i izodesmozinei acestea fac ca molecula de elastin s fie puternic hidrofob , n procesul de polimerizare ntre monomeri se stabilesc legturi covalente i necovalente distanate aspect ncolcit al moleculei de elastin i elasticitatea moleculei Sinteza de elastin are 2 etape : intra i extracelular I. Etapa intracelular Respect n mare timpii sintezei de colagen Lipsete hidroxilarea n cadrul modificrilor posttranslaionale i spiralizarea lanului polipeptidic Se obine tropoelastin II. Etapa extracelular Tropoelastina polimerizeaz (nu nainte ca lizil oxidaza s catalizeze reacia de dezaminare oxidativ a resturilor de lizin Polimerizarea se face prin realizarea unor puni de legturi distanate ntre aldehidele reactive din moleculele apropiate Molecula de elastin este rezistent la fierbere i la aciunea tripsinei, e degradat de elastaza din sucul pancreatic n procesul de formare a fibrelor de elastin e necesar prezena unei alte proteine fibrilare fibrilin care e sintetizat concomitent cu elastina n celula conjunctiv n obinerea fibrelor mature sunt 3 etape : 1. Obinerea fibrelor de oxitalam (oxitalamice) Fibrilina n momentul cnd e secretat n mediul extracelular formeaz microfibrile care se dispun n mnunchiuri fibre oxitalamice (se gsesc i n esuturile adulte ligamentul alveolo-dentar, dermul pielii, zonula lui Zinn 2. Formarea fibrelor de elaunin Molecula de elastin polimerizat se aglomereaz n grmezi de forme i dimensiuni diferite, cu aspect amorf la microscopul electronic; ce vor disocia microfibrilele de fibrilin, rezultnd fibre de elaunin, care se gsesc i n esuturile adulte : dermul pielii n jurul glandelor sudoripare

6/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

3. Fibrele de elastin matur Zonele acestea de elastin conflueaz, iar microfibrilele de fibrilin rmn disparate la periferie, radial La microscopul optic : dimensiuni intermediare 5 microni Sunt fibre care se ramific i se anastomozeaz Se coloreaz inconstant cu eozin (n funcie de fragmentele de oligozaharide) Tehnici de colorare : - orcein fibre colorate brun rocat - rezorcin-fuxin albastru - aldehin-fuxin Gomeri negru GAG I PROTEOGLICANII Sunt molecule polizaharidice neramificate formate din uniri dizaharidice repetitive O unire dizaharidic fiind format dintr-un acid uronic i un glucid aminat (Nacetil glucoz-amin, N-acetil galactoz-amin) Moleculele sunt puternic ncrcate negativ, atrag Na i respectiv apa n matrice Din respingerea reciproc a sarcinilor negative rezult rigiditatea moleculei care va duce la ocuparea unui volum mare n matrice n raport cu greutatea moleculei formarea matricei proaste puternic hidratate GAG au proprietatea de a se lega covalent de miezuri proteice, rezultnd proteoglicani cu excepia acidului hialuronic care nu are grupri sulfat 1. Acidul hialuronic Format din acid glucuronic i N-acetil galactoz-amin 2. Dermatan sulfatul Are n componen acid iduronic i N-acetil galactoz-amin 3. Heparina (heparinsulfatul) Format din acid iduronic i N-acetil glucoz-amin 4. Condroitin sulfatul Alctuit din acid glucuronic i N-acetil galactoz-amin 5. Keratan sulfat Alctuit din galactoz i N-acetil glucoz-amin Acidul hialuronic Cea mai mare parte din GAG Are form de bastona cu lungimea de 1 micron Nu este sulfonat i nu se epimerizeaz n timpul sintezei Are n alctuire 50000 de uniti repetitive dizaharidice Nu este legat covalent de miezul proteic

7/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

Nu se sintetizeaz n complexul Golgi sinteza se face la nivelul membranei celulare, iar elongarea lanurilor se face prin adugare de fragmente oligozaharidice la capetele reduse n spaiul extracelular molecula nu se ndeprteaz foarte mult intr n structura glicocalixulului Gsim acid hialuronic n : - esuturile embrionare - corpul vitros - articulaii, lichid sinovial - cordon ombilical, gelatina lui Wharton Nu se sulfateaz i nu se ep. n timpul sintezei (deci nu se sintetizeaz n complexul Golgi) Ceilali GAG au molecule mult mai mici, maxim 300 microni respectiv G moleculare mult mai mici, se sintetizeaz n complexul Golgi, se sulfateaz, se epimerizeaz i formeaz legturi covalente cu miezurile proteice - proteoglicani Proteoglicanii Miez proteic de care se leag covalent 1 sau mai multe molecule GAG de aceleai tip sau tipuri diferite. Componenta proteic se sintetizeaz la nivelul ribozomilor din RER la intrarea n RER. La nivelul radicalilor sterici se va fixa un trizaharid de legtur format din 2 molecule de galactoz i o molecul de xiloz care constituie un primer pentru ataarea urmtoarelor grupri glucidice la nivelul complexului Golgi. Moleculele de proteoglicani exocitate n spaiul extracelular particip la hidratarea matricei extracelulare, la migrarea celulelor, proliferarea lor, la nutriie. Unii dintre ei rmn ataai la membrana celular i prin intermediul lor se pot ataa alte molecule din matrice. Exist proteoglicani care contribuie la polimerizarea colagenului. Tipuri de proteoglicani : 1. Caracteristic cartilajului agreganul agregat de proteoglicani format dintr-o molecul de acid hialouronic pe care se prind necovalent numeroase molecule de proteine globulare de linkare. Proteoglicanul este format dintr-un miez proteic pa cere se leag n molecule de keratan sulfat i condroitin sulfat Asigur rezistena i elasticitatea cartilajului. 2. Rmn ataai la membrana celular prin miezul proteic o protein integral a plasmalemei Exodomeniul leag ntre 3-8 molecule de heparan sulfat Asemenea proteoglicani se gsesc ataai de endoteliile vasculare. R. - au specificitate celular pentru colagenul individual

8/9

Histologie Curs 04 01/11/2001

- au abilitatea de a lega fibronectina i alte molecule de adezivitate - implicate --- n stabilirea jonciunilor celulare tip celul-celul sau celul-matrice - reglarea comunicrii intercelulare celul celul - coagulare - metabolismul lipo-proteinelor LDL - controleaz creterea muchiului neted - controleaz creterea neuronilor - controleaz permeabilitatea membranelor bazale 3. Proteoglicani cu greuti moleculare mici n toate esuturile conjunctive Formate dintr-un miez proteic i 3-5 molecule de GAG de tipul condroitin sulfatului, keratan sulfatului, Dermatan sulfatului. Acetia au rol n : - organizarea matricei conjunctive extracelulare - hidratare i consistena de gel poros - polimerizarea colagenului Glicoproteinele de adezivitate Molecule ce mediaz adezivitatea 1. Glicoproteinele structurale (proteine de ancorare celular) - fibronectina - tanasceina - laminina - entactina - trombospondinina - condronectina 2. Receptori de membran

9/9