CURS 4 Mecanismele activrii LT

Mecanismele activrii LT
Activarea LT, care reprezint momentul central al majoritii rspunsurilor imune
fa de Ag timodependente NU se realizeaz n orice ipostaz, ci doar dac sunt strict
ndeplinite anumite condiii ce sunt diferite in vivo/in vitro.
Condiii in vivo
1. LT sunt activate NUMAI de Ag timodependente
2. Activarea LT se realizeaz strict n organele limfoide secundare (ganglioni,
splin), doar n conditiile unei cooperri celulare la care este absolut necesar
prezena i activarea APC

- Ag timodependente native NU pot stimula direct LT pentru c LT NU dispun pe

membrana lor de receptori de captare Ag.
- LT NU expun receptori pentru complement si IgG
- Exist alte celule (APC) care prezint pe mebrana lor din abunden receptori de captare
Ag. Ele le capteaz, endociteaz, scindeaz => epitopi. Unii sunt ulterior prezentai n
complex cu moleculele MHC. Ei sunt apoi recunoscui de LT prin TCR+CD3
3. Cooperarea i activarea care rezult pentru a conduce la un rspuns imun eficient
trebuie s fie bidirecional (APC i LT trebuie s se stimuleze reciproc una pe
cealalt)
Distingem n cadrul cooperrii 2 tipuri de activare:
a. activarea anterograd
- se desfoar dinspre APC spre LT i la finele ei se realizeaz activarea LT. Se
numete activare anterograd pentru c ea se exercit n acelai sens cu
prezentarea i respectiv recunoaterea antigenic
- prin transmiterea unor semnale ctre LT pe 2 ci principale:
primul semnal e transmis pe calea principal (TCR CD3). El ia
natere ca urmare a recunoaterii de LT a epitopului prezentat. El
are 2 roluri foarte importante:
1. conduce la activarea metabolic a LT

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

b.
-

2. contribuie la declanarea diviziunii mitotice a LT =>

crete numrul de limfocite T per clon activat => 2
modificri clonale: activarea clonal i expansiunea
clonal
cale accesorie: implic activarea receptorului CD28 prezent pe
suprafaa LT. El e activat dac angajeaz legturi cu un
contraligand prezent pe APC proliferate (CD80). n CD28 =>
semnale transmise ctre limfocit. Ele:
1. contribuie la activarea diviziunii mitotice a LT
2. contribuie la maturarea funcional a LT
3. contribuie la maturarea funcional a clonei
clona sufer 3 modificri foarte avantajoase:
1. activare
2. expansiune
3. maturare
Cu o asemenea clon => va declana un RI eficient

activarea retrograd
dinspre LT deja activate ctre APC
la finele ei => activarea total, definitiv, maxim a APC
ea se exercit n sens opus prezentrii i recunoaterii Ag
se realizeaz prin eliberarea de ctre LT activate a unor IL cu rol activator pentru
APC (IFN, IL-4). Ele stimuleaz producia i expresia pe membrana APC a
moleculelor MHC II (n special) => creterea prezentabilitii Ag => activarea
suplimentar a LT
LT activate suplimentar activeaz suplimentar APC, etc
Ele se activeaz reciproc pn n momentul n care este atins i depit valoarea
prag a declanrii RI
Valoarea prag a declanrii RI = atingerea i depirea cnd clona sufer cele 3
modificri: e activat, expansionat i maturat
Activarea anterograd
trece ntotdeauna prin 2 etape:
1. Etapa Ag nespecific a activrii LT
n cursul ei se realizeaz legtura ntre membranele APC i LT prin cuplurile de
adeziune intercelulare
primele legturi se realizez pe seama cuplului de adeziune de linia I (CD2 pe LT
i LFA-3 CD58 pe APC). Aceste legturi sunt stabile pentru lungi perioade de
timp. Numrul lor este imens de la bun nceput (sute de mii de asemenea legturi)
apoi se stabilesc legturi de linia a II-a, ntre LFA-1 (pe LT) i ICAM. Ele apar
mai trziu datorit faptului c cei 2 liganzi au o afinitate n general mic. Ele sunt
instabile i iniial numrul lor este mic.

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

Funciile acestei etape:

Prin formarea cuplurilor de adeziune membranar APC i LT vin
n contact intim pe suprafee foarte mari
Conteaz pentru pregtirea activrii LT. n momentul n care se
stabilesc legturi CD2 LFA-3, PLC, care n cazul LT e
poziionat mai interior, vine n contact cu CD2 => migreaz la
suprafa, unde poate fi activat
ea are loc permanent. Legturile NU au loc NUMAI n situaia n care APC
prezint un Ag, dar el NU a fost nc recunoscut. Ea are loc i n situaia n care
APC NU expune epitopi (moleculele MHC ale APC sunt goale)
faptul c LT stabilesc contacte continue cu APC => LT controleaz permanent
APC dac expun sau NU Ag => supraveghere imunologic
2. Etapa Ag specific a activrii LT
e ocazionat de prezentarea i recunoaterea Ag
epitopii sunt recunoscui de TCR
la TCR se asociaz laurile CD3 , i i la ele se asocialz cel mai frecvent 2
lanuri lungi, identice ntre ele, lanurile . Apoi se mai asociaz, tot prin puni
disulfurice, CD45
2 coreceptori:
CD4, dac e TH
CD8, dac e TC/TS
CD4/CD8 se afl n citoplasm n contact cu o enzim, PTK (varietatea p56
LCK). n centrul catalitic exist o timozin, n poziia 505, cu rol reglator pentru
PTK

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

-

Activarea LT e rezultatul declanrii n succesiune a 2 categorii de stimuli:

1. Apare pe calea CD4/CD8. El e generat n momentul n care CD4/CD8
angajeaz legturi cu domeniul monomorf al moleculei MHC => stimul ce se
transmite prin CD4/CD8, el fiind un stimul inhibitor. El se transmite prin
segmentul intracitoplasmatic al CD4/CD8 ctre PTK. Primind stimulul, PTK
sufer modificri conformaionale => exteriorizarea Tyr din poziia 505.
Exteriorizat, ea se autofosforileaz spontan, ceea ce duce la inhibiia
TOTAL a PTK. Inhibiia are rolul unui mecanism de protecie, prin care este
mpiedicat activarea LT n situaia n care APC NU prezint nici un epitop
(moleculele MHC sunt goale). Dac NU ar exista, LT ar reaciona fa de
MHC i ar exista anse ca LT s distrug APC. Dac MHC NU sunt vide,
atunci e declanat un al 2-lea semnal
2. apare pe calea TCR CD3. El e un semnal activator i se transmite din lan n
lan de la TCR prin toate lanurile CD3. atinge lanurile => urmeaz 2 ci:
una scurat (a) i una lung (b)
a. de la lanurile ctre CD45. cd 45 se activeaz i ncepe s
funcioneze ca o PTP (fosfataz). CD45 preia (P) de pe Tyr din poziia
505 => o defosforilare a PTK p56lck. Acum ea se activeaz. Ea
fosforileaz enzime => activarea metabolismului intermediar al LT. n
al doilea rnd, ea fosforileaz secvenele ITAM. Fosforilndu-le, ele se
activeaz i devin capabile s fosforileze alte enzime (kinaze). Cea mai
important e kinaza ZAP-70. ea se fixeaz de lanurile (ZAP =
Protein asociat lanurilor , are GM de 70 kda). Stimulii sunt trimii
pe calea b.
b. De-a lungul lanurilor i n final au acces la ZAP-70, care tocmai s-a
fixat. ZAP-70 se activeaz i fosforileaz prelund fosfatul de pe
CD45 i l trimite la PLC, care fiind fosforilat, se activeaz. n mare,
activarea declaneaz cascada fosfatidil-inozitolilor. PLC hidrolizeaz
PIP2 (fosfatidil inozitol disfosfat) => Inozitol trifosfat (IP3) i
diacilglicerol (DAG)

IP3
substan hidrosolubil
difuzeaz n ntreaga citoplasm, pn ajunge la nivelul REN, care prezint
receptori specifici pentru IP3 => activarea REN cu eliberarea masiv n
citoplasm a Ca2+ (hipercalciie). Efectul ei foarte important e acela ca Ca2+
activeaz calcinemina (o fosfataz calmodulin dependent). Ea influeneaz
indirect anumite funcii nucleare. Ea exercit aceste efecte printr-un factor
transcripional = NF-AT (factor nuclear al LT activate). NF-AT e un factor
polipeptidic prezent n mod continuu n citoplasma LT, dar atta timp ct LT se
afl n repaus NF-AT e inactiv pentru c e fosforilat. Activarea NF-AT se face
prin defosforilalrea sa sub aciunea calcineminei. Defosforilat, NF-AT trece n
nucleu i aici activeaz marea majoritate a genelor pentru IL => o sintez crescut
de IL => naturarea LT
DAG
- substan liposolubil
- NU difuzeaz n citoplasm, ci rmne la nivelul membranei
-

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

Aici DAG activeaz o kinaz (PKC). Ea, indirect, poate activa anumite funcii
nucleare prin intermediul unui factor transcripional (NF-KB = factorul nuclear
pentru lanurile uoare K ale Ig a LB)
- NF-KB a fost evideniat acum 20 de ani, n cazul LB mielomatoase
- NF-KB factor polipeptidic prezent n mod continuu n citoplasma LT. Cnd sunt
n stare de repaus NF-KB e inactiv, fiind cuplat cu un inhibitor proteic. Activarea
se realizeaz sub aciunea PKC, care fosforileaz inhibitorul => desprinderea lui
de pe NF-KB. NF-KB devine liber i poate trece n nucleu. Activeaz marea
majoritate a genelor pt IL sau CK i n mod cu totul special activeaz foarte intens
2 gene: gena pentru IL-2 ct i gena pentru receptorul IL-2
- LT devine productor de IL-2 i are i cu ce s o recepteze => se activeaz cu
prpria IL-2 => o activare autocrin cu IL-2 => activarea metabolismului i
maturarea LT
Stimularea diviziunii mitotice
- rezultatul transmiterii unor semnale pe 2 ci: TCR-CD3 i calea CD28
- factorul cel mai implicat n stimularea mitozelor e MPF (mitosis promoting
factor)
- MPF-ul e un heterodimer format din 2 molecule de ciclin B, asociate la o
component kinazic, reprezentat de P34cdc (cell division cycles). Activarea se
realizeaz prin cuplarea unor fosforilri i defosforilri
- Defosforilarea sub aciunea CD45, care defosforileaz ciclinele B => ele se
desprind de pe kinaz
- n paralel kinaza e activat prin defosforilare de o alt PTK, reprezentat de P60src
(sarcoma cells). P60src se fixeaz de lanurile scurte ale CD3
- Odat activat MPF sunt activate kinazele ciclin dependente CDK care
acioneaz n punctele de restricie ale ciclului mitotic situat ntre faza G2 i faza
M => aceste celule au toate ansele sa ptrund n mitoz
- n faza G2 ajung ca urmare a transmiterii unor semnale pe calea CD28. ele apar
cnd CD28 angajeaz legturi cu CD80 => semnale activatoare n CD28 ce se
transmit la o kinaz asociat la CD28 i care se numete fosfatidil inozitol 3
kinaza (PI3K). Ea activeaz cascada MAP kinazelor (proteinkinazele asociate
mitozelor). MAPK stimuleaz kinazele ciclindependente responsabile de trecerea
celulelor din faza G1 i S a diviziunii mitotice (punctul 2 de restricie) => celulele
ajung n faza M
Consecinele morfofuncionale ale activrii LT
- Activate, LT i modific att aspectul mologic, ct i funcia
- LT n stare de repaus
- Activat antigenic, trece din faza G0 n faza G1, apoi faza S n faza G2
- LT din G1-S-G2 se afl n interfaz
- Ele devin mai mari, cu aspect neregulat i prezint o citoplasm foarte abundent
- n citoplasm crete numrul de mitocondrii => activarea metabolic a LT; crete
RER => produc IL, CK; se modific i expresia fenotipic: expresia de TCR pe
suprafaa lor (capacitate mai mare de a recunoate Ag prezentate), crete expresia
de LFA-1 (crete capacitatea de aderare a LT la APC)
- n faza M marea majoritate a limfocitelor rezultate n urma diviziunilor devin LT
efectorii (TH, producnd IL sau TC, producnd CK)
-

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

-

O mic parte rmn n rezerv = LT cu memorie. Ele NU mai revin niciodat n

faza G0 a ciclului mitotic, ci rmn ntr-o etap intermediar, ntre G0 i G1. Ele
rmn n stare preactivat. La un nou contact cu Ag, acestea vor rspunde foarte
rapid.

Limfocitele B
Caractere generale
- aproximativ 15-20% din totalul limfocitelor circulante
- distribuite primar n ariile bursodependente ale organelor limfoide
- celule puin recirculante
- au durat de via n general scurt (luni de zile)
Receptori de suprafa
- 3 categorii:
Receptori de recunoatere Ag
Receptori cu rol accesor n activare (CD45, CD25 sau IL-2R)
Receptori de adeziune intercelular (LFA-1)
I.
Receptori de recunoatere Ag
- recunoaterea Ag se realizeaz printr-un complex receptorial, format din 2
componente:
BCR (Ig transmembranare IgM form monomeric, IGD, IgG,
IgA, IgE). El e format din asocierea a 2 perechi de lanuri ( 2 grele
H orientate cu capetele C-terminale n citoplasm). Prin
capetele C-terminale se afl n legtur cu o PTK. Lanurile uoare
(L) sunt poziionate extramembranar

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

- aceste lanuri la capetele N-terminale se vor asocia ntre ele i

formeaz 2 caviti = situsuri combinative pentru Ag (SCAg), prin
care pot fi recunoscui determianii Ag conformaionali prezeni la
suprafaa Ag nativ.
- dei are 2 SCAg, ele sunt identice ntre ele => e recunoscut 1 singur
determinant Ag => BCR e receptor monospecific
Funciile BCR:
1. recunoaterea Ag
recunoate de regul Ag native aflate n stare solubil
n cazul LB NU e necesar niciodat prezentarea Ag. Ele singure pot s-si capteze
Ag prin BCR la care se asociaz receptorul de captare CR i FcR
2. generarea unor stimuli activatori
acetia NU pot fi trimii de BCR, de aceea se asociaz nc 2 lanuri cu funcie de
transducie a semnalului activator (Ig i Ig)
De fapt ele sunt lanuri unice care n segmentul extracelular prezint cte un
domeniu poziionat excentric
Actualmente Ig = CD79a i Ig = CD79b
Ele se asociaz la BCR prin puni disulfurice, ca i la CD45
CR i FcR
Activarea LB
mult mai complex dect activarea LT
activarea se datoreaz trnsmiterii semnalelor activatoare pe 2 ci:
1. scurt
de la BCR la PTK
activndu-se, PTK preia (P) din citoplasm i l trimite ctre diferite
substrate (segmentele intracitoplasmatice ale Ig i Ig, care sufer
modificri conformaionale ce permit trecerea unor semnale activatoare pe
calea lung
2. lung
la CD45, care se activeaz i preia (P) de pe Ig i Ig i l trimite la PLC
=> activarea PLC i declanarea cascadei fosfatidil-inoyitolilor

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

Consecinele morfofuncionale ale activrii LB

LB se transform i morfologic, dar mai ales funcional
LB trec din faza G0 n faza G1, apoi din S n G2
Ele trec n interfaz, unde devin nite limfoblati B, care sunt mari i cu aspect
neregulat i prezint o citoplasm foarte abundent ce nconjoar nucleul
n citoplasm gsim mitocondrii abundente i RER
Pe membran crete expresia de LFA-1 i expresia de MHC II!!! Ele devin nite
APC!!!
n faza M ncep s se divid. Cea mai mare parte devin plasmocite (produc Ac). O
mic parte rmne n rezerv sub form de LB cu memorie (rmn ntr-o etap
ntre G0 i G1). La un nou contact ele vor aciona mai repede (memorie scurt
pentru c LB mor repede)

Organizarea sistemului imun

Distingem 2 componente:
1. componenta central
2. componenta periferic

Componenta central
-

reprezint sectoarele de repartiie primar a tuturor clonelor limfocitare

reprezint sectorul tranzitat n mod continuu de APC
reprezint sectorul n care poate avea loc cooperarea APC limfocite
reprezint sectorul n care limfocitele pot fi i activate
a. Splina

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

2 zone: pulpa roie (fr funcie imunologic) i pulpa alb (funcie imunologic)
Pulpa alb: dispus sub forma a 3 manoane, dispuse n jurul unei arteriole
centrale
- Primul manon (PALS intern) zon timodependent, populat de LT dispuse
omogen
- Al 2-lea manon (PALS extern) zon bursodependent, populat de LB prezente
n aglomerri celulare = foliculi limfoizi
- A 3-a = zona marginata, populat mai ales de Mcf
Funcii
Genereaz RI fa de Ag circulante, fa de care pot apare RIU,
care se desfoar integral n splin, sau RIC, care sunt doar
iniiate n splin i se desfoar n esutul Ag
Etapele desfurrii RIU intrasplenice
- declanate de Ag circulante care pot fi prezente n circulaie ca Ag solubil sau Ag
transportat
- Ag ajunge sub ambele forme n pulpa alb
1. Ag solubil
- mai repede ajunge sub form de Ag solubil i ptrunde n toate cele 3 zone, declannd
RI doar n zona bursodependent (Mcf NU au capacitatea de a capta Ag solubile, LT NU
pot capta Ag)
- Ag e recunoscut de LB, ele se activeaz i se transform n limfoblati B. Dup activare
celula ncepe s se ndeprteze de contactul antigenic, rmnnd n PALS extern
2. Ag transportat de CDS
- CDS se afl n PALS intern, unde se transform n IDC
- prezint Ag LT prezente aici
- dac Ag e recunoscut, LT se activeaz i se transform n limfoblati T. Dup un anumit
interval de timp, celula se desprindede la locul cooperrii i migreaz, ns migrarea e
foarte pronunat i de regul limfoblatii T ajung n PALS extern, unde vin n contact cu
limfoblatii B i ncep s coopereze
- consecine: activarea complet a limfoblatilor B, care se transform n plasmocite.
Dup un interval de timp ele migreaz i la distan mare de cooperare => Ac ce sunt
eliberai
b. Ganglionii limfatici
- 3 zone n parechim:
Corticala (Cx) bursodependent LB distribuite n aglomerri
celulare = foliculi limfoizi. Care NU sunt stimulate => foliculi
lifoizi primari
Paracorticala (Pc) LT distribuite omogen
Medulara celularitate mixt (LT, LB, Mcf, Plasmocite, etc)
Funcii:
Locul generrii unor RI fa de Ag tisulare => 2 rspunsuri:
RIU integral n ggl
RIC doar iniiat n ggl, n rest se desfoar n esutul Ag
Etapele intraganglionare ale RIU:
- declanat ca urmare a drenrii prin limfaticele aferente a unor Ag tisulare. Ele
stimuleaz LB din foliculi, care i modific aspectul, devenind foliculi limfoizi
-

Laura & Daniel

CURS 4 Mecanismele activrii LT

secundari (au dimensiuni mari, enorme i avanseaz ctre Pc). Modificrile se

datoreaz faptului c LB stimulate se activeaz i se divid, iar pe de alt parte
migreaz.
Foliculul are 3 zone:
Subcapsular (cap) format din LB mici (neactivate)
Central, format din puine LB (zona clar). Ele sunt LB mici. Sunt
puine pt c LB stimulate au migrat de aici i au trecut n paracortical
Zona dens, format din limfoblati (Pc). Limfoblatii din Pc rmn n
contact cu LT de aici i coopereaz => se transform n plasmocite, care
migreaz, ajungnd cel mai frecvent n medular, unde elibereaz Ac.

Laura & Daniel

10