21.09.

2010

CLASIFICARE

GENUL SALMONELLA. MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SALMONELOZELOR

Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885) Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongori (Salmonella subterranea (din 2004)) Subspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica Majoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss S.enterica enterica cu peste 2500 de serovariante: S. London, S. Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc
Salmonella enterica subspecia enterica serovar Typhi sau
Salmonella Typhi

CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform structurii antigenice)

Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor n serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...) Fracii antigenice majore desemneaz grupa: O2 grupa A; O4 B, O6 C, O9 D, etc Fracii antigenice minore O1, O12 - sunt comune Ag H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene cromozomale diferite, care se exprim simultan sau alternativ (variaie de faz, frecvena 10 -4) Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7;

Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A) Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B) Ag Vi (K), poliozidic, termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei. Mascheaza Ag O. S. Typhi O9,12:Hd:Vi+ / O9,12:Hd:ViConform patogenitii pentru gazd se disting: I. Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A, S.Paratyphi B) II. Salmonele bipatogene (patogene pentru om i animale, ubicvitare) - majoritatea

Grupa A B

Serovarul Paratyphi A Paratyphi B Wien Typhimurium Derby

Antigenul O 1,2,12 1,4,5,12 1,4,12,27 1,4,5,12 1,4,12 6,7 6,7 6,7 6,8 9,12 1,9,12 1,9,12 1,9,12 1,9,12 3,10 3,10

Vi

Antigene H faza 1 faza 2 a b b i f,g 1,2 l,w 1,2 1,5 1,2 1,5 1,5 1,5 1,6 1,6

Paratyphi C Virchov Infantis Bovismorbificans

c r r r

Typhi Enteritidis Panama Dublin Gallinarum

d g,m l,v

g,p l,v e,h

London Anatum

21.09.2010

Caractere morfologice Salmonella bacterii gram-, mobile peritriche (S.Gallinarum, imobil), asporogene.

1.

Caractere de cultur

Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu bil, tetrationat), bulion cu selenit de Na 2. Medii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin, Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii negre) 3. Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-) Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative. Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etc EXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid; S.Paratyphi A H2S+/-, LDC-

21.09.2010

FACTORI DE PATOGENITATE

Fimbrii (adeziune) Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel) Endotoxina Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz) Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare (diaree) Siderofori (captarea Fe) Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului)

Majoritatea salmonelelor (98%) sunt sensibile la bacteriofagul O1. Exist bacteriofagi cu specificitate de specie i variant. Habitat: intestinul omului, animalelor, psrilor, reptilelor. Rezistena n mediul extern: salmonelele rezist la 70 C 30 min., rezistente la frig i concentraii mari de sare. Se nmulesc n produse alimentare la temperatura camerei.

ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMAN

I. II. III.

SALMONELOZE: Febre tifo-paratifoide Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastroenterite) Manifestri extra-digestive: - bacteriemii nontifoidice - infecii pleuro-pulmonare - afeciuni osteo-articulare (osteite, osteomielite, artrite septice, etc) - infecii nozocomiale - infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite) - infecii urinare - infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei) - infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc)

FEBRELE TIFO-PARATIFOIDE
-

Agenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C) Sursa de infecie omul bolnav, purttorul Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact direct Doza infectant 105 bacterii PATOGENEZA Traversarea epiteliului intestinal intact Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie) Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal)

I sptmn de boal (bacteriemie). Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinale II sptmn de boal (difuzie parenchimatoas) Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc. Din aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc. III-IV sptmn de boal (faza alergic). Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 - necroz, ulceraii

21.09.2010

I. II. III.

IV.

Manifestri clinice Perioada de incubaie - 1-3 sptmni Perioada prodromal (de invazie) 1-3 zile Perioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr 39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 710 zile. Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc. Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni)

Imunitatea celular, umoral 5-10% convalesceni purttori pn la 3 luni (cu depistarea salmonelelor n bil sau/i urin) 3-5% convalesceni (cu litiaz biliar) purttori cronici (1-10 ani toat viaa) Recidive sunt posibile (descrcri bacteriemice din focare profunde, forme L), se caracterizeaz prin simptome atenuate i evoluie de scurt durat

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL FEBRELOR TIFO-PARATIFOIDE PRELEVATE: snge (perioada febril, n special I sptmn de boal), urin (ncepnd cu a II sptmn), materii fecale (II-III sptmn de boal), exsudat din rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil, mduv osoas

METODE DE DIAGNOSTIC

Examenul microscopic RIF, Gram

Examenul bacteriologic Hemocultura 10-15 ml snge se insmneaz n 100 ml bulion biliat, mediul Rappoport, bulion glucozat 1% pentru mbogirea salmonelelor. Se incubeaz la 37 grade i n zilele 1, 2, 3, 5, 7 i 10 se repic pe mediile DD (Endo, Levin, Ploskirev, W-B) pentru izolarea culturii pure. Coloniile lactozo- se repic pe mediul Kligler (Olkeniki) pentru acumularea culturii pure i identificarea preliminar.

21.09.2010

Identificarea final - n baza studiului caracterelor morfotinctoriale, de cultur, biochimice, antigenice (RA pe lam cu seruri imune polivalente ABCDE, seruri monovalente anti-O de grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri monospecifice anti-H (de variant), seruri anti-Vi, sensibilitatea la bacteriofagi). Rezultatul definitiv negativ-n ziua a 11.

Rozeolocultura (exsudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat) Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat) Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare, 5-10 ml bil se ntroduc n BP) Se examineaz ca i hemocultura Coprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire. Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura)

Serodiagnostic (din II sptmn) 1. RA Widal - la diluii ale serului bolnavului se adaug diagnosticuri OH din S.Typhi, Paratyphi A i B. Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n dinamic a titrului 2. RA modificarea Felix (utilizarea separat a diagnosticurilor O i H). Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua 7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III). Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut de reconvalescen (sptmna a IV) titrul Ac anti-O i anti-H se egaleaz. 3. RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O)

INVESTIGAREA PURTTORILOR
1.

2. 3.

Coproculturi repetate Urocultura Bilicultura Serodiagnostic Reacia de Vi-aglutinare (eritrocite sensibilizate cu Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40 Reacia de latex-aglutinare Determinarea claselor de imunoglobuline Ig M sau Ig G

TRATAMENTUL I PROFILAXIA
Tratament: Fluorochinolone Cefalosporine de generaia III Cloramfenicol Ampicilin Cotrimoxazol Profilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc) Vaccinul chimic TABTe Vaccinul atenuat Ty2 (administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor - Vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen, imunitate 3-5 ani)

SALMONELOZE DIGESTIVE (gastro-enterite, toxi-infecii alimentare) Consecutive consumului de alimente contaminate cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, lactate, etc). Agenii cauzali: salmonele bipatogene Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg, S. Derbi) Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C) Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin) Gr. E (S. Anatum)

21.09.2010

PATOGENEZA GASTROENTERITELOR

Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici) Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct. Doza infectant 105-1010 microorganisme (n funcie de receptivitatea gazdei, vrst, utilizarea AB, inocul, etc) Salmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, penetrnd si multiplicandu-se n enterocite, celulele M i macrofage. Urmeaz o reacie inflamatoare intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor), endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie. Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii.

Manifestri clinice: Perioada de incubaie 8 - 48 ore Debut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu diaree, vom, febr, cefalee, stare de ru. Evoluie sever la sugari, btrni, imunodeprimai (n special bolnavi cu SIDA).

TOXIINFECII ALIMENTARE Survin ca urmare a ingestiei unui aliment n care s-au acumulat cantiti mari de mi/o (105 107). Nimerind n intestin, bacteriile se distrug, iar endotoxina eliberat provoac semnele clinice de intoxicare. Alte forme de salmoneloze (septicemii, meningite, infecii urinare, infectii nosocomiale, etc) se dezvolt la persoane cu rezistena sczut

Diagnosticul de laborator al salmonelozelor Prelevate: mase fecale, mase vomitive, snge, splturi gastrice, urin, puroi, resturi de alimente suspecte. Metode de diagnostic: 1. Examenul bacteriologic de baz (coprocultur, hemocultur, urocultur...) 2. RIF pentru diagnostic rapid 3. Serodiagnostic - RHAI

21.09.2010

Profilaxia salmonelozelor nespecific Tratamentul simptomatic, antibioterapie la necesitate, n forme grave de infecie