LP 11.

EXPLORAREA BIOCHIMIC A lichidului cefalorahidian (LCR):

REACIA PANDY, METODA HELLER, DOZAREA GLUCOZEI,
CLORURILOR

INFORMAII GENERALE
Lichidul cefalorahidian apare ca secreie a plexurilor coroide din ventriculii cerebrali
i prin difuziune liber din esutul nervos. Format in ventriculii cerebrali, LCR trece in
spaiul subarahnoidian prin trei foramene ale ventriculului IV. Resorbia LCR prin vilii
i granulaiile arahnoidiene este in echilibru cu secreia.

Rolul fiziologic al LCR este de protecie biomecanic (amortizare i meninere a

formelor anatomice proprii SNC) i biodinamica (eliminarea surplusului de lichid
interstiial, meninerea homeostaziei mediului in care funcioneaz neuronii).

Lichidul cefalorahidian este un fluid limpede, apos, care circul n meninge, n

mduva spinrii i n ventriculii cerebrali (cavitali). Lichidul are un efect de
amortizare, ajutnd astfel la protejarea esutului nervos, vital fa de agresiuni.

Rezultate
LCR normal:

- aspect - clar, incolor;

- examen microbiologic - steril;
- examen citologic - 0-3 limfocite/mm3;
- examen biochimic - proteine=15-40 mg/dl; glucoza=50-70 mg/dl; acid lactic=35
mg/dl; cloruri=680-730 mg/dl.

Rezultate normale ale punciei lombare, in urma analizei LCR:

Aspect:
- transparent, fr culoare.

Presiune:
- pentru aduli intre 50 i 180 milimetri (mm) ap;
- pentru copii intre 10 si 100 mm ap.

Proteine:
- aduli 15-45 mg/dl (miligrame pe decilitru);
- copii si btrni 15-70mg/dl.

Glucoza:
- 40%-80% din nivelul de glucoz din snge. Nivele mai mari se depisteaz
dac pacientul a mncat inainte de efectuarea testului.
 Numrul celule sangvine:
- nu se depisteaz celule roii;
- celule albe 0-10 celule pe milimetru cub.
Alte rezultate:
- nu se depisteaz prezena bacteriilor, ciupercilor, virusurilor sau altor
microorganisme.
- Nu se depisteaz prezena unei tumori.

Rezultate anormale ale punciei lombare, in urma analizei LCR

Aspect:
- prezena sngelui in lichidul cefalorahidian schimb culoarea acestuia;
- prezena unei infecii (meningit, abces la nivelul creierului) afecteaz
transparena lichidului.

Presiune:
- presiune ridicat indic hemoragie la nivelul creierului, infecie (meningit),
atac cerebral, probleme circulatorii.
- presiune scazut indica prezena unui blocaj al canalului spinal.

Proteine:
- nivele ridicate de protein indic: hemoragii in lichidul cefalorahidian,
prezena unei tumori sau a cancerului, diabet, infecie, leziune, sindromul
Guillain-Barr, hipotiroidism acut, etc.
- prezena anticorpilor (imunoglobinelor) in lichidul cefalorahidian indic:
afeciuni ale sistemului imun, infecii bacteriale sau virale.

Glucoza:
- nivele sczute de glucoz indic prezena unei infecii cu meningit, sau
hemoragie la nivelul creierului (hemoragia a inceput cu cteva zile inainte ca
nivelul de glucoz s scad).
- nivelele ridicate de glucoza sunt indicatori ai diabetului.

Numrul de celule sangvine:

- prezena celulelor roii in lichidul cefalorahidian este un semn al hemoragiei.
- prezena in numar mare a celulelor albe indic infecia cu meningit.
- celule tumorale precum i nivele anormale de celule albe sunt indicatori ai
cancerului.

Alte rezultate:
- pacientul este suspect de infecie cu sifilis dac se depisteaz prezena
anticorpilor, bacteriilor si altor microorganisme in lichidul cefalorahidian.
- pacientul este infectat cu meningita daca in lichidul cefalorahidian se indica
prezenta antigenilor bacteriali.
 RECOLTAREA LCR

Recoltarea LCR se efectueaz pe nemncate, prin puncie:

- lombar uzual
- suboccipital (in tensiunea intracranian)
- ventricular (in neurochirurgie)

Dup recoltare se msoar presiunea LCR, apoi examenul microbiologic si citologic

(LCR steril) i apoi examenul fizic i chimic.

Principiul metodei

Pentru recoltarea LCR se puncioneaz spaiul subarahnoidian i extragerea LCR in

vederea examinrii.

Tehnica de lucru

- se aseaz pacientul intr-o anumit poziie in funcie de starea i locul

punciei (pentru puncie lombar pacientul este culcat pe pat, in decubit
lateral, cat mai aproape de marginea patului. Brbia trebuie s fie in piept
i genunchii strni i poziionai pe abdomen. Astfel spatele pacientului va
fi curbat, la marginea patului);
- se badijoneaz locul punciei cu tinctur de iod i/sau alcool;
- se execut puncia;
- dup scurgerea ctorva picaturi se extrag 10-20 ml LCR in eprubete perfect
curate i sterile;
- se scoate brusc acul de puncie i se comprim locul cu o compres steril;
- se aplic un pansament steril;
- pacientul va ramne in decubit dorsal, fr pern timp de 8 - 24 ore.

!!!!TEHNICA DE PUNCTIONARE SI PRELEVARE VA FI COMPLET ASEPTICA.

MSURAREA PRESIUNII

Principiul metodei

Msurarea presiunii LCR se efectueaz in primul moment al puncionrii cu ajutorul

manometrului Claude.

Tehnica de lucru

- se aeaz pacientul adecvat in funcie de starea i locul punciei (pentru

puncie lombar pacientul se va aeza n decubit lateral);
- se badijoneaz locul punciei cu tinctura de iod i/sau alcool;
 - se execut puncia;
- se msoar presiunea LCR cu ajutorul manometrului Claude in primul
moment al introducerii acului de puncie;
- se scoate brusc acul de puncie si se comprim locul cu o compres steril;
- se aplic un pansament steril;
- pacientul va rmne in decubit dorsal, fr pern timp de 8 - 24 ore.

Valori normale
Aduli:
- in poziie de decubit lateral 7 20 cm apa
- in poziie eznd 20 25 cm apa

Copii 5 10 cm apa

Variaii fiziologice
Presiunea LCR variaz in funcie de :

- poziia bolnavului;
- nivelul punciei;
- cantitatea de lichid.
- Crete in tuse si in timpul efortului fizic

Variaii patologice

Presiune mare in:

- hipertensiune intracranian;
- tumori;
- abcese;
- encefalit
- afeciuni meningeale;
- hidrocefalie

Presiune mic in:

- traumatisme craniene;
- puncii lombare repetate

MSURAREA PH-ULUI

Principiul metodei

pH-ul se determin cu ajutorul hrtiei de pH universal sau cu pH-metrul.

Tehnica de lucru
- se introduce timp de 1-2 sec. o fie de hrtie indicator de pH universal in
proba de LCR;
 - dupa 30 sec. se compar culoarea hrtiei de pH cu scala de culori.

Valori normale

pH LCR 7,25 7,45

MASURAREA DENSITATII

Principiul metodei
Densitatea LCR se determin cu ajutorul unor areometre speciale sau densimetre, de
dimensiuni mici.

Rezultate

Densitatea normal: 1004 1009

MASURATORI ORGANOLEPTICE LCR: ASPECT (CULOARE,

CLARITATE)

Principiul metodei
Aprecierea cu ajutorul analizorului vizual a insuirilor senzoriale ale probei de LCR

Tehnica de lucru

Se observ recipientul cu proba de LCR comparativ cu un recipient cu ap.

Rezultate

Aspectul LCR normal este un lichid clar, incolor, ca apa de stnc, care nu face sau
face puin spum la agitare.

Modificri de aspect
- hemoragic, in defecte de puncie, in hemoragii meningiene, meningite
hemoragice;
- xantocromic in hemoragii meningiene vechi;
- tulbure in meningite purulente;
- icteric (galben-verzui)
- aspect particular formarea unui vl de fibrin la suprafa in cazul
meningitei tuberculoase i rareori in meningita limfocitar.

EXAMENUL MICROSCOPIC AL LCR (CITOLOGIA)(ASPECT NORMAL)

- Se efectueaza in primele ore dupa recoltarea LCR, pentru c in timp

celulele se lizeaz;
- Numrtoarea elementelor celulare se efectueaz in camere de numrat
Fuchs-Rosenthal;
 - Sedimentul de LCR centrifugat poate fi format din limfocite, granulocite
neutrofile, monocite, plasmocite.

DETERMINAREA PROTEINELOR (PROTEINORAHIA)

Dozarea proteinelor din LCR se face prin metode calitative si semicantitative

asemntoare dozrilor in sange (metoda biuretului).

Valori normale: 20 40 mg% dintre care 75% albumine si 25% globuline.

Proteinorahia este crescuta in toate inflamaiile SNC: in inflamaiile acute cresc
albuminele iar in cele cronice globulinele.

1. Determinarea proteinelor LCR (proteinorahia)

Reactia Pandy
Principiul metodei
O solutie saturata de fenol 10% va precipita proteinele din LCR cand acestea au
valori crescute peste cele normale.

Reactivi
Solutie saturata de fenol

Proba
LCR

Tehnica de lucru
Pe o sticl de ceas asezat pe un fond negru se pipeteaza 1 ml soluie saturat de
fenol. Cu ajutorul unei pipete Pasteur se adaug 2 picturi de LCR la marginea
reactivului.

Interpretarea rezultatelor
Reactia este pozitiva in cazul aparitiei unei opalescente sau a unui precipitat alb
in masa lichidului.
LCR clar = LCR normal
Opalescenta foarte slaba = rezultat incert
Opalescenta slaba = reactie + (slab pozitiva)
Tulbure usoara = rc. ++ (pozitiva)
Tulbure intensa = rc. +++ (intens pozitiva)
Aspect lptos = rc. ++++ (foarte intens pozitiva)

Valori normale: 20 40 mg% (3/4 alb; globuline)

Variatii patologice
Reactia Pandy este pozitiv in: meningite, boli infecioase, tifos, pneumonie,
paralizie general progresiv, tumori ale mduvei spinrii, in general in toate
inflamaiile SNC.
 2. Determinarea proteinelor LCR (proteinorahia)
Metoda Heller
Principiul metodei
Precipitarea proteinelor sub forma unui inel la limita de separare dintre LCR si
reactivul nitric-nitros.

Reactivi
Reactiv nitric-nitros acid nitric si nitrit de sodiu

Proba
LCR

Tehnica de lucru
Intr-o eprubet de hemoliz se pipeteaz 1 ml LCR.
Cu ajutorul unei pipete Pasteur se introduce in LCR la fundul eprubetei i se
elibereaz uor, 1 ml reactiv nitric-nitros, astfel inct cele dou lichide s nu se
amestece.

Interpretarea rezultatelor
Reacia este pozitiv dac se formeaz un inel opalescent de precipitare la limita
de separare a celor dou lichide.

DETERMINAREA GLUCOZEI (GLICORAHIA)

Determinarea glucozei (glicorahia). Reactia Fehling

Principiul metodei
Glucoza reduce la cald reactivul Fehling cu formarea de oxid cupros colorat in
rou caramiziu.

Reactivi
Reactiv Fehling I: CuSO4, acid sulfuric, ad
Reactiv Fehling II: NaOH, tartrat dublu de sodiu i potasiu
In momentul utilizarii se amesteca 1/1 Fehling I si Fehling II

Proba
LCR

Tehnica de lucru

Determinarea hipoglicorahiei
Cand exist informaii sau se presupune c avem o concentraie mic de glucoz
in LCR se procedeaz astfel: intr-o eprubet se pipeteaz 2 ml LCR si 0,2 ml reactiv
Fehling.
Eprubeta se inclzete pe baie de ap la fierbere.
 Interpretarea rezultatelor
Pt. hipoglicorahie
LCR cu hipoglicorahie (20 30 mg) are o proprietate reductoare slab aa
inct culoarea reactivului rmne neschimbat culoare albastr
LCR normal culoare portocalie

Pt. hiperglicorahie
LCR cu hiperglicorahie (>70 mg%) culoare portocalie
LCR normal culoare albastr

Determinarea hiperglicorahiei
Cand exist informaii sau se presupune c avem o concentraie mare de
glucoz in LCR se procedeaz astfel: intr-o eprubet se pipeteaz 0,6 ml LCR si 2 ml
ap distilat si 1 ml reactiv Fehling.
Eprubeta se inclzeste pe baie de ap la fierbere 1 min.

Interpretarea rezultatelor

Pt. hiperglicorahie
LCR cu hiperglicorahie (>70 mg%) culoare portocalie
LCR normal culoare albastra

Valori normale
Glicorahia 45 80 mg%
Glicorahia variaz cu glicemia

Variaii patologice
Hipoglicorahie: meningit TBC, meningit purulent
Hiperglicorahie: tumori, deficiene cerebrale, encefalite, abcese, DZ

DETERMINAREA CLORURILOR

Determinarea clorurilor: principiul metodei, interpretarea rezultatelor,

valori normale, variaii patologice

Metoda Mohr

Principiul metodei
Clorurile sunt precipitate direct cu azotat de argint.

Reactivi
Cromat de potasiu 10%
Azotat de argint N/50
Tehnica de lucru
Intr-un balon de sticl se pipeteaz 1 ml LCR centrifugat, 10 ml ap distilat, 3
picturi cromat de potasiu. Se titreaz cu soluia de azotat de argint pn ce culoarea
vireaz spre crmiziu.

Calcul
g ml LCR = nr. ml AgNO3 folosii la titrare x 5,85

Valori normale
Copii 7,0 0,5 g ml LCR
Aduli 7,3 0,15 g ml LCR

Variaii patologice

Valori crescute: uremie, nefrite, abcese, tumori cerebrale

Valori sczute: meningite (meningita TBC), staza rahidian
< 5 g ml LCR aproape sigur meningita TBC
> 6,5 g ml LCR exclud meningita TBC

Valorile NaCl 5,5 6,5 g se interpreteaz in legtur cu modificri ale proteinelor i

ale formulei leucocitare:
- Limfocitoza indic meningita TBC;
- Polinucleaza exclude meningita TBC

DETERMINAREA TRIPTOFANULUI (METODA HOPKINS-COLE)

- Se efecueaz pentru a diferenia meningita tuberculoas de meningita de

alt etiologie.
- Este pozitiv doar pentru meningita tuberculoas

Principiul metodei
In mediu acid, triptofanul in prezena oxalatului de Mg d o culoare violet.

Tehnica de lucru
- intr-o eprubet se pipeteaz 5 ml oxalat de Mg si 2 ml LCR
- se agita usor
- se adaug la fundul eprubetei 1 ml acid sulfuric conc. a.i. cele 2 medii s
nu se amestece

Interpretarea rezultatelor

- Reacia este pozitiv cnd la limita celor dou medii apare un inel violet
care arat prezena Trp.
- Reacia pozitiv apare doar in meningita TBC.
 - Daca nu apare nici un inel sau apare un inel de culoare brun atunci reacia
este negativa.

DETERMINAREA ACETONEI

- Este o reacie foarte sensibil

- Se efectueaz pentru diagnosticarea comei diabetice sau a cazurilor de
acidoz.

Principiul metodei

Acetona reacioneaz cu aldehida salicilic, in prezena hidroxidului de potasiu

formnd un compus colorat in rou-portocaliu

Tehnica de lucru
- Intr-o eprubet se pun 2 ml LCR, 2 picat. solutie de aldehida salicilica 10%
in alcool 95% si o pastila de hidroxid de potasiu
- eprubeta se incalzeste usor
- se observ culoarea

Interpretarea rezultatelor
- Reacia este pozitiv dac apare o culoare roie-portocalie in jurul pastilei
de hidroxid de potasiu, ceea ce semnifica prezena acetonei