Hidrogel polimeric cu poteniale aplicaii n ingineria tisular
-Chitosanul-
Introducere
Polimerii utilizai n medicin trebuie s ndeplinesc o serie de condiii
eseniale. n principal acestea sunt: biocompatibilitatea, non-toxicitatea, non- imunogenicitatea i biodegradabilitatea. Aceste caracteristici variaz n funcie de sursa i proprietile fizico-chimice ale polimerilor n discuie i devin indispensabile n elaborarea de sisteme de eliberare de medicamente. Exist numeroase situaii cnd medicamentele de mas molecular mic administrate clasic nu reuesc s ndeplineasc profilele terapeutice impuse datorit cilor fiziologice de aprare a organismului uman. Astfel apare necesitatea elaborrii unor structuri complexe care s rspund punctual n mediul cu care sunt puse n contact. Aceste structuri au la baz polimeri reticulai fizic i/sau chimic i se prezint sub diferite forme: burei, filme, nanoparticule, etc. Reticularea polimerilor confer materialelor obinute proprieti distincte fa de cele ale constituienilor macromoleculari. De aceea, se poate spune c posibilitile de combinare a acestora i a agenilor de reticulare sunt infinite. Dintre aceste biomateriale hidrogelurile simple i multicomponent ce formeaz reele interpenetrate sau semi-interpenetrate au luat amploare n domeniul eliberrii controlate de medicamente dar i n domenii ca ingineria tisular unde biomaterialele polimerice ndeplinesc numeroase funcii. Pentru controlul proprietilor fizice al acestor hidrogeluri se recurge la reticularea polimerilor liniari att prin metode chimice ct i fizice. Hidrogelurile au captat tot mai mult interesul cercettorilor n ultimul deceniu datorit proprietilor intrinseci pretabile aplicaiilor medicale. Biocompatibilitatea acestora, capacitatea de a elibera din reeaua polimeric compui hidrosolubili i versatilitatea n modelarea proprietilor fizicochimice permit generarea de noi biomateriale cu aplicaii n domeniul eliberrii controlate de medicamente. Principalele metode de obinere a hidrogelurilor pe baz de polimeri naturali sau/i sintetici sunt identificate i sunt enumerate proprietile i aplicaiile poteniale ale acestor materiale. Hidrogelurile pot fi obinute prin dou mecanisme principale: hidrogeluri cu legturi covalente sau ireversibile i hidrogeluri cu legturi reversibile sau fizice. Cea de-a doua categorie cuprinde subclase variate cum ar fi interaciunile ionice (hidrogeluri reticulate ionic sau complexe polielectrolitice) i interaciuni secundare (hidrogeluri nclcite, hidrogeluri grefate sau complexate, etc.). Procesul de reticulare reprezint o metod prin care hidrogelurile se pot adapta cerinelor fiecrei aplicaii (viteza de biodegradare, proprietile mecanice, gradul de umflare, capacitatea de includere/eliberare principii active, porozitatea, etc.). Chitosanul
Chitosanul, poli-(1,4)-2-amino-2-deoxi--D-glucan (Fig. 1), este un copolimer
policationic, constituit din uniti de glucozamin i N-aceti l-glucozamin legate glicozidic n poziia 1-4, derivat de chitin cu diferite grade de deacetilare (de la 70 la 95%) i cu mas molecular medie ce variaz de la 10 la 1.000 de kDa.
FIGURA. 1. Structura chitosanului
Acest polizaharid natural este lipsit de toxicitate i prezint o bun
biocompatibilitate i biodegradabilitate, care-i asigur o gam larg de aplicaii, printre care amintim: formulri topice n oftalmologie, implanturi sau ca soluii injectabile i ca agent ce faciliteaz ptrunderea substanelor hidrofile prin mucoasa epitelial. Totodat, chitosanul i-a dovedit eficacitatea ca agent antimicrobian, hemostatic, antioxidant, regenerant tisular i cicatrizant, biocompatibilitatea acestuia fiind un element important n reducerea inflamaiei locale. Este studiat, de asemenea, cu rezultate ncurajatoare n medicaia antitumoral, precum i n reducerea nivelului de colesterol seric. Cea din urm proprietate a fost explicat printr-o serie de mecanisme, printre care: interaciunea electrostatic dintre lipide i aminopolizaharide, ceea ce duce la inhibarea absorbiei lipidelor, precum i creterea excreiei acizilor biliari, fapt ce duce la creterea cantitilor de grsimi eliminate prin fecale.
Tehnici de lucru
Metoda de preparare a hidrogelurilor CG obinute prin dubl reticulare
Metoda de preparare a hidrogelurilor obinute prin dubl reticulare se poate observa schematic n Figura 2. Pe scurt, hidrogelurile pe baz de CG i CP au fost preparate printr-o reticulare covalent parial cu AG urmat de o reticulare ionic cu Na2SO4/TPP. Condiiile de obinere au fost urmtoarele: polimerii, ntr-o cantitate total de 125 mg, au fost dizolvai timp de 24 de ore n 5 mL soluie acid acetic 2% (v/v), la temperatura camerei. Cantitatea specific de AG necesar pentru a reticula 20% dintre gruprile aminice libere ale chitosanului i gelatinei a fost adugat, n picturi, sub agitare energic, peste soluia de polimeri. Gruprile aminice libere ale gelatinei au fost calculate innd cont de compoziia aproximativ a aminoacizilor diamino monocarboxilici din gelatina de tip B. Gruprile aminice ale polizaharidului au fost calculate n funcie de gradul de deacetilare al acestuia. Cantitatea minim optim de AG pentru ca filmele s prezinte stabilitate mecanic minim a fost fixat n urma unor teste preliminare. Amestecul obinut a fost supus ultrasonrii la baia de ultrasunete pentru a se ndeprta bulele de aer formate n timpul agitrii manuale. Ulterior, hidrogelurile au fost introduse n etuv timp de o or la temperatura de 40C pentru a usca parial hidrogelurile i a permite umflarea n soluia de reticulant ionic. Apoi, acestea au fost imersate n soluii apoase de sulfat de sodiu/tripolifosfat de sodiu de concentraii diferite timp de 30 de minute. Cantitatea corespunztoare de agent de reticulare ionic a fost dizolvat n 10 mL ap distilat. Pentru optimizarea proprietilor hidrogelurilor s-a urmrit influena raportului masic ntre polimeri, a tipului de reticulant ionic i a cantitii acestora.
FIGURA. 2. Reprezentare schematic a procesului de obinere a hidrogelurilor
complexe dublu reticulate Metoda de preparare a hidrogelurilor CP obinute prin dubl reticulare Au fost obinute hidrogeluri dublu reticulate pe baz de CP prin aceeai metod descris anterior (Figura 2) cu meniunea c hidrogelurile reticulate covalent au fost imersate n soluii de reticulant ionic de concentraie 1% n toate cazurile. Parametrii variai au fost tipul de reticulant ionic i raportul ntre cei doi polimeri.
Studiul comportrii la umflare n PBS a hidrogelurilor dublu reticulate
Hidrogelurile pe baz de chitosan/gelatin i chitosan/poli(alcool vinilic) au fost caracterizate din punct de vedere al capacitii de umflare n soluie tampon fosfat pH=7.4, dat fiind c aceast caracteristic influeneaz semnificativ procesul de eliberare prin difuzie a medicamentelor incluse. Capacitatea de umflare a hidrogelurilor obinute, evaluat prin gradul maxim de umflare atins dup 48 ore, este dependent de tipul i cantitatea de agent de reticulare ionic, dar i de natura polimerului partener la co-reticulare cu chitosanul. n cazul hidrogelurilor pe baz de CG, gradul maxim de umflare dup 48 de ore depete valoarea de 1200% ajungnd pn la 1700% pentru sistemele reticulate cu sulfat de sodiu. De asemenea, umflarea este mai redus cu creterea cantitii de chitosan, pe de o parte datorit densitii de reticulare mai mari determinat de numrul mai ridicat de grupe aminice (respectiv ioni amoniu) participante la reticulare, pe de alt parte datorit hidrofiliei mai reduse a polizaharidului. Hidrogelurile reticulate cu TPP, la care densitatea de reticulare este mult mai mare ca n cazul sulfatului de sodiu, se constat o reducere substanial a capacitii de umflare. n cazul hidrogelurilor pe baz de CP se remarc, pentru ambele tipuri de ageni de reticulare ionici, amplificarea gradului maxim de umflare (la 48h). n cazul hidrogelurilor reticulate cu Na2SO4 gradul de umflare depete 7000%, ajungnd pn la 9000%. Explicaia const n faptul c poli(alcoolul vinilic), care substituie gelatina, nu poate participa la reticularea ionic astfel nct densitatea de reticulare a reelei obinute este mai joas dect la hidrogelurile omoloage pe baz de CG. Creterea cantitii de chitosan conduce i n acest caz la o reea mai dens, reducnd ca urmare i gradul maxim de umflare. n cazul hidrogelurilor obinute prin reticulare cu TPP, gradul maxim de umflare este inferior celui obinut prin reticulare cu anioni sulfat, consecin a unei densiti de reticulare mai ridicate, dar nu variaz practic cu parametrii procesului de preparare. Glosar: AG: Aldehid glutaric sau glutaraldehid CP: Chitosan/poli(alcool vinilic) CG: Chitosan/gelatin PBS: soluie tampon fosfat TPP: tripolifosfat de sodiu Bibliografie
1. Malafaya P.B., Silva G.A., Reis R.L. Natural-origin polymers as
carriers and scaffolds for biomolecules and cell delivery in tissue engineering applications. Adv Drug Deliv Rev 2007; 59: 20 7-233 2. Esmaeili F., Heuking S., Junginger H.E. Progress in CS-based vaccine delivery systems. J Drug Del Sci Tech 2010; 20: 53-61 3. Muzzarelli R.A.A. Human enzymatic activities related to the therapeutic administration of chitin derivatives. Cell Mol Life Sci 1997; 53: 131-140 4. Patashnik S., Rabinovich .L, Golomb G. Preparation and evaluation of CS microspheres containing biphosphonates. J Drug Target 1997; 4: 371-380 5. Song J.S., Such C.H., Park Y.B. A phase I/IIa study on intra-arti cular injection of holmium-166-CS complex for the treatment of knee synovitis of rheumatoid arthritis. Eur J Nucl Med 2001; 28: 489-497 6. Xie Y., Liu X., Chen Q. Synthesis and characterization of water- soluble chitosan derivate and its antibacterial activity. Carbohydr Polym 2007; 69: 142-147 7. Yang T.-C., Chou C.-C., Li C.-F. Anti bacterial activity of N- alkylated disaccharide chitosan derivatives. Int J Food Microbiol 2005; 97(3) 237-245 8. Okamoto Y., Yano R., Miyatake K. Effects of chitin and chitosan on blood coagulation. Carbohydr Polym 2003; 53: 337-342 9. Xie W., Xu P., Liu Q. Antioxidant activity of water-soluble chitosan derivatives. Bioorg Med Chem Lett 2001; 11: 1699-1701 10. Ueno H., Mori T., Fujinaga T. Topical formulations and wound healing applications of CS. Adv Drug Deliv Rev 2001; 52: 105-115 11. Dash M., Chiellini F., Ott enbrite R.M., Chiellini E. Chitosan a versatile semisynthetic polymer in biomedical applications. Prog Polym Sci 2011; 36: 981-1014 12. Gallaher C.M., Munion J., Hesslink R.Jr. Cholesterol Reduction by Glucomannan and Chitosan Is Mediated by Changes in Cholesterol Absorption and Bile Acid and Fat Excretion in Rats. J Nutr 2000; 130: 2753-2759 13. Jtariu A. D., Danu M., Peptu C. A., Ioanid C., Ibnescu C. i Popa M., Ionically and Covalently Cross-Linked Hydrogels Based on Gelatin and Chitosan, Soft Materials, 2013, 11, 4554. 14. Jtariu (Cadinoiu) A. N., Holban M. N., Peptu C. A., Sava A., Costuleanu M. i Popa M., Double crosslinked interpenetrated network in nanoparticle form for drug targeting-preparation, characterization and biodistribution studies, Int. J. Pharm., 2012, 436, 66-74. 15. Schrieber R. i Gareis H.,Gelatine Handbook, Theory and Industrial Practice, Weinheim, Germany.WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, 2007. 16. Jones A. i Vaughan D., Hydrogel dressings in the management of a variety of wound types: A review, Journal of Orthopaedic Nursing, 2005, 9, S1-S11. 17. Loh X. J., Peh P., Liao S., Sng C. i Li J., Controlled drug release from biodegradable thermoresponsive physical hydrogel nanofibers, Journal of Controlled Release, 2010, 143,175182. 18. Popa M., Aelenei N. i Hritcu D., Medical applications of Polymers, American Scientific Publishers, California, USA, Popa M., Ottenbrite R.M. i Uglea C.V., Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Drug Delivery by Polymer Systems, 2, 383-412. 19. Aelenei N., Popa M. I., Novac O., Lisa G. i Balaita L., Tannic acid incorporation in chitosanbased microparticles and in vitro controlled release, J Mater Sci: Mater Med, 2009, 20, 10951102. 20. Bogdan C. Ciobanu, Anca N. Cadinoiu, Marcel Popa, Jacques Desbrires i Ctlina A. Peptu, Chitosan/poly(vinyl alcohol) hydrogels for entrapment of drug loaded liposomes, trimis spre publicare la revista Cellulose Chemistry and Technology - revist cotat ISI. 21. Bogdan C. Ciobanu, Simona Bci, Marcel Popa, Jacques Desbrires i Maricel Agop, Time evolution of drug release mechanism from chitosan based hydrogels, trimis spre publicare la revista Journal of Physical Chemistry - revist cotat ISI