UNIVERSITATEA DE STAT “DIMITRIE CANTEMIR”

FACULTATEA ȘTIINȚE ALE NATURII

DEPARTAMENTUL ȘTIINTE BIOLOGIGE ȘI GEONOMICE

Mecanismul genetic de activare a sistemului imun

0511.2 Biologie moleculară

Coordonator științific Tabără Olesea

lector

Autor Chiorescu Maria

BM21

Chișinău 2018
Cuprins

I. Introducere
II. Genetica Imunoglobulinelor
a. Anatomia genelor imunoglobulinelor
b. Formarea lanțurilor ușoare
c. Formarea lanțurilor grele
d. Mecanisme suplimentare pentru creșterea varietății de imunoglobuline
e. Dependența de monospecificitatea celulelor B de expresiile genelor
imunoglobulinelor
f. Capacitatea celulelor B de a schimba clasa imunoglobulinelor sintetizate
III. Controlul genetic al răspunsului imun
a. Răspunsul imun o revizuire generală
b. Genele răspunsului imun
c. Controlul genetic al răspunsului imun: o revizuire finală
IV. Concluzii
V. Bibliografie
 I. Introducere
Rolul sistemul imun, despre care s-a crezut că ar fi doar acela de a apăra organismul împotriva
agenților patogeni, este de fapt mult mai complex, bazându-se pe capacitatea de a face distincție între self
(propriu organismului) și non-self (străin).
Studiul controlului genetic al forței răspunsului imunitar ca direcție independentă de cercetare a
început în anii 60 și în curând a fuzionat cu problema care vizează elucidarea mecanismelor de
recunoaștere a antigenului de către celulele T.
Primele experimente privind studiul determinării genetice a rezistenței răspunsului imun au fost
efectuate cu iepuri iepuși în prima treime a secolului nostru. Studiile au determinat moștenirea
răspunsului imun la tipul dominant, însă nu au fost dezvoltate.
Pentru studierea completă a fenomenului, este necesar să se respecte cel puțin două condiții:
- prezența animalelor bine caracterizate genetic, care sunt, în special, linii consangvinizate de șoareci și
cobai și
- antigene controlate cu specificitate.
Cu toate acestea, se știa deja că diferiți indivizi reacționează diferit la același antigen. Rezultatele
unei analize de sensibilitate familială cu Corynebacterium diphtheriae au făcut posibilă demonstrarea
faptului că rezistența sau sensibilitatea la infecție poate fi o trăsătură moștenită. Datele obținute pe cobai
din diferite rânduri au mărturisit în favoarea acestui fapt: Fjord-Scheibel (1943) a demonstrat că o genă
controlează producția de antitoxină difterică și este moștenită ca o trăsătură dominantă Mendeliană. În
același experiment, a fost stabilit și tipul dominant de moștenire a imunoreactivității ridicate.
La începutul anilor 1960, un număr suficient de linii de șoareci inbred, congenici și recombinanți,
precum și un întreg set de peptide sintetizate artificial, cu specificitate limitată până la monospecificitate,
erau deja la dispoziția experimenților.
Acest lucru a permis abordarea soluției problemei controlului genetic al forței răspunsului imun și
studiul a patru aspecte principale ale reglementării sale:
1. Care este natura moștenirii puterii răspunsului imun,
2. unde genele răspunsului imun (genele Ir) sunt localizate în genomul celular,
3. Care sunt produsele fenotipice ale acestor gene,
4. în ce tip de celule sunt produse exprimate care sunt controlate de genele Ir.
 II. Genetica imunoglobulinelor
Organismul animal poate sintetiza până la 109-1012 diferite molecule de anticorpi. Această sumă
este suficientă pentru ca fiecărui determinant antigen sa fie egalat de un anti-gen centru. Deoarece
anticorpii sunt proteine și structura lor este codificată de gene, apare întrebarea – cum un număr mare de
tipuri diferite de anticorpi pot fi codificate în genom. În cazul în care pentru fiecare dintre aceste tipuri de
anticorpi să răspundă genă individual, apoi în genomul animalelor de orice fel, pur și simplu nu ar fi
suficient material genetic pentru a codifica un număr atât de mare de proteine. Această complexitate a
naturii a fost capabilă să depășească, formată în urma selecției naturale a mai multor mecanisme pentru a
asigura o mare varietate de anticorpi la un cost minim pentru material genetic. Principalele mecanisme
sunt: A) recombinație somatică, B) splaising și C) mutațiile somatice.
Principiul de bază al biologiei este postulatul "O genă este un lanț de peptide". Cu toate
acestea, ca urmare a cercetărilor genetice ale imunoglobulinelor V. Dreg1er și J. Bennet în 1965 au
înaintat o ipoteză, în urma căreia Site-urile peptidice constante și variabile ale lanțurilor de
imunoglobuline sunt codificate de diferite gene. Mai târziu, această ipoteză a fost confirmată de fapte
științifice. În 1975-1976, laboratorul de S. Tonagawa a descoperit fenomenul de recombinație de ADN
într-o celulă somatică. S-a dovedit că în ADN-ul invizibil nu există Gene formate care codifică anumite
H-sau L-lanțuri, dar sunt doar segmente (fragmente) viitoarelor gene. Genele imunoglobulinelor în
limfocite nediferențiate ca și cum ar fi rupte. Fragmentele lor sunt separate unul de celălalt prin secvențe
de nucleotide, a căror lungime este uneori compusă din mii de perechi de nucleotide. În perioada
maturizării limfocitelelor începe apropierea și integrarea diferitelor segmente de gene în cadrul genelor
funcționale ale lanțurilor ușoare și grele.

a. Anatomia genelor imunoglobulinelor

Știm deja că fiecare din cele patru lanțuri ale moleculei de imunoglobulină constă în două regiuni
– variabilă (V) și constantă (C). Acum trebuie să aflăm cum aceste circuite sunt codificate în genom. În
această secțiune, vom privi acest proces în forma mai simplă iar în următoarele, mai detaliat.
Geneticii a descoperit că pentru fiecare tip de lanț ușor a imunoglobulinelor – k și λ, precum și
pentru lanțurile grele, există clustere de gene separat extinse (sin: grupuri, bazine, familia genelor).
Aceste clustere se găsesc chiar și în cromozomi diferiți (tabelul 1).
Tab. 1 Localizarea genelor imunoglobulinelor în genomul uman și mouse-ul

Clustere de gene Nr de cromozomi în cariotip

Om Șoarece
H 4 12
k 2 6
λ 22 16

Fiecare cluster conține un set de gene copy care codifica partea variabilă a lanțului polipeptidic de
imunoglobuline (genele V). Cluster genelor V este situat mai aproape de sfârșitul 5 " care codifică lanțul
ADN. La o distanță de câteva sute de mii de nucleotide de clusterul genelor V sunt situate unul sau mai
multe gene C. Genele C codifică partea constantă a lanțului de peptide. În procesul de dezvoltare celulelor
– B oricare dintre genele V pot fi translaționate în așa fel, că va fi lângă un anumit genom C. După ce va
avea loc o astfel de reconstrucție a ADN-ului poate fi sintetizat lanțul funcțional al imunoglobulinelor.
La șoarece clasterul genelor, care codifică lanțul k ușor este în al șaselea cromozom. Acesta
conține un set mare de gene V(VKL, VK2, VK3, etc.) și un C-gen (CK). Clasterul genelor care codifica
lanțul-λ ușor este situat în Cromozomul 16 și conține doar două gene V(Vλ1 și Vλ2) care codifica zona
variabila a lanțului. Fiecare dintre aceste două gene V este asociată cu una sau două gene diferite C (CK).
 Clusterul genelor care codifica un lant greu este situat la șoarece pe cromozomul 12. Acesta
conține un set mare de gene V (VH) și grupă aranjată de gene diferite C, fiecare din care codifică clasă
aparte de lanțuri grele (Cγ, Cα, Cϻ, Cδ, și Cε,) (Fig. 1).
În loc să fie codificate de una singură gene V, fiecare V-regiune a lanțului polipeptidic este
codificată de două sau trei segmente genetice separate. În limfocite aceste segmente genetice individuale
sunt combinate într-o genă V funcțională numai când se produce reconstrucția AND-ului, care unește
împreună V- și C- regiuni codificate.

Fig. 1. Schema simplificată a structurii a trei grupuri diferite clastere a genelor imunoglobulinelor la mamifere.

b. Formarea lanţurilor ușoare

Imunoglobulinele pot utiliza două tipuri de lanțuri L, denumite kappa (k) și, respectiv, lambda
(λ), în funcție de partea constantă. Partea constantă și partea variabilă a lanțurilor ușoare sunt aproximativ
egale din punct de vedere al dimensiunii. O moleculă de imunoglobulină poate folosi fie lanțuri k, fie
lanțuri λ (dar nu ambele simultan), fără ca aceasta să afecteze în vreun fel funcționalitatea receptorului
sau a anticorpului.
Fiecare dintre cele două lanțuri usoare este codificat de gene distincte, situate pe cromosomi
diferiți: setul de gene care codifică lanțul k este situat pe cromosomul 2 iar genele lanțului ușor λ sunt
localizate pe cromosomul 22.
Prima opțiune a limfocitului B este reprezentată întotdeauna de lanțul ușor k. Partea variabilă a
lanțului k (începând de la capătul N-terminal) are o lungime de 108 AA și este codificată de două gene
distincte: gena V (variabilă) codifică primii 95 de aminoacizi și gena J (joining - unire) codifică AA 96-
108.(Fig. 2)
Analiza genică a relevat că în genomul celulelor germinale umane există aproximativ 40 de gene
Vk diferite, fiecare dintre ele putând codifica un segment inițial distinct al domeniului variabil k. Aceste
gene variabile sunt aranjate în mod liniar, separate prin introni și precedate (în plus față de promotori) de
o secvență exonică denumită Leader (conducătoare), situată în aval față de promotor și care va codifica
un scurt peptid care are rolul de a introduce și ghida lanțul ce se sintetizează în RE. Acest peptid leader va
fi însă clivat de la nivelul lanțului sintetizat, înainte să aibă loc asamblarea lanțurilor ușoare și grele.
 La o oarecare distanță de grupul genelor V, spre capătul telomeric al ADN-ului, se găsește grupul
celor 5 gene Jk, după care, separată printr-un intron foarte lung, se găsește singura genă pentru regiunea
constantă Ck, care codifică întreaga porțiune constantă a lanțului k.

Fig. 2 Procesul de lipire V- și J- secvențe nucleotidice, ducând la formarea k- lanț ușor la șoarece. În ADN celulele
sexuale primare patru J- segmente separate una de alta și de la C-gene introni scurți, de la V-segmente – sute de mii
de perechi de baze. În timpul dezvoltării celulelor B definite de V- segment este fuzionat cu unul dintre segmentele
– J în rezultatul deleției separarea lor- ADN.
 Formarea lanțului k începe prin aducerea unei gene Vk si a unei gene Jk în imediata vecinătate una
față de alta, fenomen numit rearanjare genică (figura 3). Genele sunt rearanjate și unite datorită
existenței la cele două capete a unor secvențe intronice denumite RSS (Recombination Signal Sequences
- secvente semnal de recombinare). Procesul este mediat de enzimele codificate de genele RAG-1 si
RAG-2 (recombination activation genes - gene de activare a recombinării). Aceste enzime acționează
exclusiv la nivelul limfocitelor, iar prezența lor simultanî este indispensabilă desfășurării adecvate a
procesului.
În cursul procesului de rearanjare, cele două gene V și J, alese în mod complet aleatoriu, vor fi
unite, dând naștere unei secvențe genice continue; totodată, întregul material genetic care se găsea între
cele două gene va fi excizat și îndepărtat. Astfel, ADN-ul limfocitului B care a suferit o rearanjare a
genelor lanțului k va conține următoarele regiuni, începând dinspre centromer către telomer: toate genele
Vk de dinaintea celei selectate, promotor-ul și exonul Leader (L) al genei Vk alese, un intron, segmentul
genic continuu Vk Jk urmat de genele Jk neselectate, un intron și gena pentru regiunea constantă.
Secvența rearanjată a lanțului ușor este apoi transcrisă de către o ARN-polimerază, începând de la
segmentul L până la semnalul stop de după gena pentru regiunea constantă, generând astfel un transcript
ARN primar. Urmează apoi un proces de incizare a jonctiunilor exon-intron ale moleculei de ARNm
precursor, prin care sunt îndepărtate secvențele necodante și un proces de poliadenilare a genei constante.
Rezultă astfel ARNm matur care va părăsi nucleul și se va lega ulterior la nivelul ribozomilor. Aici are
loc translația și proteina ce se sintetizează va fi dirijată, de către segmentul Leader de la nivelul capătului
N-terminal, în interiorul lumenului RER. În RER, secvența Leader este îndepărtată iar lanțul ușor va
putea, abia acum, să se asocieze cu un lanț greu.
Genele lanțului ușor λ sunt situate la om pe cromosomul 22. Locusul λ uman conține aproximativ
40 de gene Vλ și 4 gene Jλ despre care se știe că sunt funcționale (pe lângă altele nefunctionale, numite
pseudogene). Organizarea locusului λ este diferită de cea pentru k, fiecare genă Jλ fiind asociată cu câte o
genă Cλ distinctă. Sinteza lanțului λ este similară în principiu cu cea a lanțului k: printr-o rearanjare
aleatorie, mediată de RAG1 si RAG2, o genă Vλ (care codifică primii 97 de AA) este unită cu o gena Jλ
(care codifică următorii 13 AA ai regiunii variabile), dar ADN-ul rearanjat va utiliza mai departe acea
genă Cλ asociată genei J alese.
Fig. 3 Reconstrucția ADN-ului din celulele liniei germinale care duc la formarea unei gene funcționale a lanțului k.
Vk- regiuni sunt situate în diferite orientări referitor la Jk- și Ck- segmente. În timpul diferențierii celulelor B unul
din Vk- segmente este conectat la unul din segmentele J k.
 c. Formarea lanţurilor grele
Genele lanțului greu (H) sunt situate la om pe cromosomul 14. Organizarea acestor gene este mai
complexă decât cea a genelor ce codifică lanțurile ușoare (L) deoarece există o genă suplimentară D, care
codifică o porțiune a regiunii variabile. Astfel, segmentul genic VH codifică primii 94 de AA iar
segmentul genic JH - secvența curprinsă între AA 98-113; secvenȚța intermediară, extrem de scurtă (95-
97), este codificată de o genă denumită DH (diversitate). Prin secvențializarea directă a genelor de pe
cromosomul 14, astăzi știm că există, începând de la telomer spre centromer, un grup de 51 de gene VH,
urmate de un grup de 27 de gene DH, apoi, la o oarecare distanță, 6 gene JH funcționale. (Fig.4)
O altă caracteristică ce particularizează genele lanțurilor grele este prezența în genomul celulelor
germinale a unor gene multiple ce codifică regiunea constantă. Partea constantă a lanțului greu este
responsabilă pentru conferirea așa numitelor funcții "biologice" ale anticorpilor, iar conservarea acestor
importante funcții efectorii este realizată prin menținerea unui număr limitat de gene pentru regiunea
constantă.

Fig. 4 Reconstruirea ADN-ului din celulele embrionare, rezultând gena funcțională a lanțului greu în celulele B.

Spre deosebire de partea constantă a lanțurilor ușoare, regiunea situată spre capătul C-terminal a
lanțurilor grele este cea care hotărăște încadrarea întregii imunoglobuline într-una din cele 5 clase (izotip).
Grupul genelor CH (fiecare dintre ele este flancată de introni) este separat de genele JH printr-un intron
lung. În plus, fiecare genă CH este formată din mai mulți exoni și introni. Fiecare dintre exoni codifică
câte un domeniu distinct al regiunii constante. Genele regiunii constante sunt aranjate într-o anumită
ordine, iar acest aranjament secvențial nu este întâmplător, fiind în directă legătură cu ordinea exprimării
claselor de imunoglobuline în cursul diferențierii limfocitului B și a răspunsului inițial în IgM la contactul
cu un antigen. (fig. 5)
Pentru a genera o genă transcriptibilă pentru lanțul greu sunt necesare rearanjări distincte. În
aceeași manieră întâmplătoare descrisă anterior, un segment genic DH oarecare este adus în imediata
proximitate a unei gene JH. Lângă segmentul DH JH care rezultă astfel este adusă una din genele VH.
Rearanjările de la nivelul ADN-ului cromosomului 14 vor conduce la următoarea succesiune, dinspre
telomer către centromer: promotor-ul genei VH, exonul Leader, un scurt intron, segmentul continuu VDJ,
un alt intron și întreaga serie de gene constante. O dată rearanjările finalizate, o ARN polimerază se va
lega la promotor și va transcrie întreaga secvență (inclusiv intronii). În acest proces de transcripție sunt
antrenate și primele două gene constante, care sunt Cm și Cd. Rezultă astfel un transcript ARN primar
care va urma un proces de matisare și poliadenilare diferențiată. Consecința acestui proces particular va fi
exprimarea simultană, pe suprafața aceleiași celule B, atât a IgM, cât și a IgD, având însă aceeași
specificitate, determinată de aceeași combinație distinctă VDJ.

Fig. 5 Utilizarea semnalelor alternative de poliadenilare, situate în Cϻ- segmente, duce la sinteza atât legate de
membrană (Cϻm) cât și secretate (Cϻs) lanțuri ușoare.
 d. Mecanisme suplimentare pentru creșterea varietății de imunoglobuline
În procesul de evoluție a sistemului imunitar s-au dezvoltat o serie de mecanisme, care duc la o
mare varietate de situsuri de legare a antigenului de anticorp. Doar o parte din aceste mecanisme asociate
cu reconstrucțiile somatice a ADN-ului pentru dezvoltarea limfocitelor- B.
Până acum geneticii au stabilit că, de exemplu, în genomul șoarecelui se conține două segmente
Vλ –segmente, câteva sute de Vk-segmente și câteva mii de VH- segmente. Prin urmare, în rezultatul
combinației diferitor V-, D- și J- segmente moștenite la șoarece se poate forma cel puțin 10000 diferite
tipuri de VH- regiuni și 1000 diferite tipuri de VL- regiuni. Deoarece structura situsului de legare a
antigenului determină atât lanțul L cât și H, astfel animalului, se poate forma 10000 VH- regiuni și 1000
diferite tipuri de VL- regiuni pot forma 1000*10000= 107 diferite combinații, diferite după structura
situsurilor de legare.
De asemenea, s-a demonstrat că în genele regiunii Vși în apropierea lor apar mutații somatice.
Oamenii de știință cred că aceste mutații somatice măresc numărul de anticorpi diferiți , în cel mai rău
caz, de 10-100 de ori.

e. Dependența de monospecificitatea celulelor B de expresiile genelor imunoglobulinelor

Imunologii au demonstrat că celulele B separate sunt monospecifice, produc anticorpi cu situsuri
de legare a antigenului numai unui singur tip. Prin urmare, ar trebui să existe un mecanism, care ar limita
activarea genele imunoglobulinelor în fiecare celulă B aparte pentru ca aceste celule să poată producă
doar un singur tip de lanț L și doar unul de lanț H.
În plus, deoarece celulele B sunt diploide, fiecare din ele au 6 clustere de gene care codifică
anticorpi: un claster pentru lanțul H, lanțul λ și pentru lanțul k de la fiecare dintre părinți.
Monospecificitatea celulelor B înseamnă că în fiecare celulă trebuie să fie alese (activate) genele doar a 2
clustere din 6 – unul din două clustere a genelor a lanțurilor grele și unul din patru clustere a genelor a
lanțurilor L.( fig. 6) activând unul dintre clustere de gene, care codifică lanțul H, celula devine pre-
celulă-B, care produce lanțurile grele libere din clasa ϻ. După perioada proliferativă intensivă în pre-
celula-B se activează un cluster al lanțului ușor k sau λ, și ea devine celulă-B, producând o unică
moleculă de IgM.
Deci, celula B trebuie să facă o alegere nu numai între k sau λ lanțuri, dar și dintre clustere
genelor materne și paterne. Exprimarea doar a alelelor materne sau paterne a genei Ig în orice celulă B
dată se numește excluderea alelică. Genele autosomale materne și paterne pentru alte proteine se
exprimă în celulă aproape identic. La cordate din aceste regularități cade ( înafară de genele
imnunoglobulinelor) doar inactivarea unuia din doi X-cromozomi la femele.
De ce este important ca celulele B să fie monospecifice? Monospecificitatea asigură că fiecare
moleculă de anticorpi va fi compilate din două jumătăți identice și deaceea va conține două situsuri de
legare de antigen identice. Aparent, această proprietate s-a dezvoltat în procesul evolutiv , deaorece oferă
anticorpului capacitatatea de a forma o rețea extinsă de antigeni reticulați.
 Fig. 6 Selecție secvențială a genelor activate a imunoglobulinelor, care
apare în curs de dezvoltare în celulele B. În rezultatul acestei selecții
celulele produc anticorpi doar cu un singur tip de situs de legare.

f. Capacitatea celulelor B de a schimba clasa imunoglobulinelor sintetizate.

Trecerea de la sinteza formei legate de membrană a anticorpului în sinteza formei sintetizată, în
regiunile C a lanțurilor grele pot apăre și alte modificări. În toate celulele B sinteza anticorpului
întodeauna începe cu producerea de IgM. Apoi multe dintre ele trec la producerea anticorpilor din alte
clase de exemplu IgG sau IgA. Acest proces se numește comutarea claselor. Capacitatea celulelor B de a
schimba clasa pe care o produc de imunoglobuline fără modificarea situsului de legare a antigenului
înseamnă că unul și același VH- genă asamblată poate fi asociată în mod consecvent cu diferite CH- gene.
Procesul de comutare a unei clase constă din 2 pași . La prima etapă, celula care produce IgM
legate de membrană, comută la producția simultană de IgM legate de membrană și forma de legare de
membrană a anticorpului din altă clasă, de exemplu IgD. O astfel de celulă B produce o copie de ADN
primară lungă , care conțin secvența colectată a VH- regiunii, precum și Cϻ, și Cδ-segvențe. Aceste copii
sunt supuse apoi splinesing-ului prin două căi diferite, care duc la formarea a două tipuri de molecule de
ARNm diferite. Ambele tipuri de molecule de ARNm codifică una și aceeași VH- regiune, însă un tip
conține Cϻ-, iar celălalt - Cδ-segvențe. (fig. 7) Același mecanism funcționează atunci când se comută
celula B la producerea simultană a formei de legare de membrană a IgM și unuia din alte clase de
anticorpi – IgG, IgE sau IgA.
 Fig. 7 Reconstruirea ADN-ului, care apar în prima etapă de
comutare a celulelor din sinteza de legare de membrană a Ig în
sinteza moleculelor de formă secretoare.

A doua etapă a acestui proces apare atunci când celula B, în același timp produce legarea de
membrană a anticorpului din clasa IgM și o a doua clasă, care este stimulată de antigen și începe să
secrete anticorpi din clasa a doua.
La început în celulă se sintetizează copii de ARN lungi, care conțin: 1)secvența colectată a V H-
genelor cu structura VH2-D1- JH3 și 2) toate secvențele de gene CH (Cϻ, Cδ, Cγ și Cε).
În cazul stimulării celulei cu antigen are loc deleția regiunii ADN în rezultatul căreia fragmentul
mare de ADN între JH3 și Cα, care conține genele Cϻ, Cδ, Cγ și Cε se taie. (fig. 8) După deleție în moleculă
rămân câteva secvențe de JH, care se unesc cu fragmenete de Cα. C cu o astfel de deleție a ADN-ului va fi
transcris pre- ARNM IgA.
După fuziunea transcrierii ARN-ului de două diferite posibilități, se formează molecule de
ARNm, având una și aceeași VH-regiune, conectată fie cu Cϻ-, fie cu Cα-regiune.

Fig. 8 Reconstrucția ADN-ului care apare la a doua etapă de comutare a celulelor din sinteza de legare de membrană
a Ig în sinteza moleculelor de formă secretoare.
 Capacitatea oricărei VH- gene asamblate să fie asociată cu oricare din CH- gene are o valoare
biologică importantă: datorită acestei abilitate un anumit antigen – zona de legare, selectată de antigene,
poate acestei persoane să fie distribuită tuturor claselor de Ig și poate, astfel, achiziționa toate proprietățile
biologice caracteristice fiecărei clase.
Moleculele de Ig au structura de domeniu. Structura moleculară a domeniilor are un grad ridicat
de omologare. Homologia dintre aceste domenii au permis oamenilor de știință a presupune că lanțurile
Ig-lor au apărut în cursul evoluției ca urmare a unei serii de duplicare succesivă a genei originare, care a
codificat un singur domeniu cu funcție necunoscută, format din 110 de AA. Această ipoteză este în
concordanță cu datele despre faptul că fiecare domeniu al zonei constante lanțurilor H este codificat de
secvența ADN, separată de următoarea zonă de codificare introdusă de secvență(intron). În urma formării
ARNm mature, secvențele, corespunzătoare intronilor, din transcrierile ARN-ului primar sunt tăiate. În
acelați timp, prezența intronului în ADN-ului ar putea facilita duplicarea acestor segmente de ADN, care
în timpul evoluției au dat naștere la genele de anticorpi.
Astfel, caracteristica unică a Ig-lor este că lanțurile lor polipeptide sunt codificate de mai multe
gene. Genele, care codifică Ig-le, se află în autozomi. Alelele acestor gene sunt codominante. Toate
familiile genetice sunt situate cromozomi diferiți. Imunoglobulinele sunt controlate de trei familii
(grupuri) de gene. Genele din prima familie codifică toate clasele lanțurilor grele (H). Genele din a doua
familie codifică lanțurile ușoare de tipul k. Genele din a treia familie codifică lanțurile ușoare de tipul λ.

III. Controlul genetic al răspunsului imun

a. Răspunsul imun o revizuire generală

Răspunsul imun este o formă foarte specifică a răspunsului organismului la substanțe străine
(antigene). În răspunsul imun, apare recunoașterea antigenilor și eliminarea lor.
Când un antigen intră în organism, în el apare un răspuns imun primar. Se constată că
aproximativ după 2 zile, anticorpii apar în sânge, titrul căruia crește, atinge un maxim după un timp și
apoi scade.(fig. 9)

Fig. 9 Diagrama schematică a răspunsurilor primare și secundare imune, induse respectiv de primul și al doilea
antigen A.
 Dacă după un timp același antigen intră în acest organism, atunci răspunsul imun secundar se
dezvoltă în el. Se caracterizează printr-o creștere mai mare și mai rapidă a titrului de anticorpi. O creștere
intensă a titrului de anticorpi în răspunsul imun secundar apare datorită așa-numitei memorii imunogene.
Este cauzată de prezența unor celule speciale de memorie imunologică. Memoria imunologică poate
persista timp de multe luni și chiar ani. Dacă în loc de injecții repetate ale antigenului A și animalul este
administrat alt antigen (de exemplu antigenul B), în acest caz, reacția este în natura primar, mai degrabă
decât răspunsul imun secundar .Sledovatelno răspunsul secundar reflectă o memorie specifică a unui
anumit organism, introdus mai devreme, antigen A.
În timpul răspunsului primar, memoria imunologică se formează ca urmare a următoarelor
evenimente:
1. Proliferarea fiecărui limfocite precursor activat de antigen crește foarte mult numărul de celule de
memorie.
2. Celulele de memorie au o durată mai lungă de viață și circulă constant între sânge și limf.
3. Fiecare celulă de memorie este mai dispusă să răspundă la un antigen decât celula predecesorului
său.
Procesul schematic al răspunsului imunitar poate fi împărțit în 7 etape și prezentat după cum urmează:
1. Antigienele infestate de organism sunt capturate de macrofage;
2. Antigenul intră în macrofag și întărește procesarea-despicare cu enzime hidrolitice, cu izolarea
fragmentelor relativ mici care poartă determinanți antigenici separați. Astfel, macrofagele
procesează antigenii într-o formă imunogenă și le plasează pe suprafața membranei lor (fig. 10).
Un antigen asociat cu un macrofag este de 100-1000 de ori mai imunogen decât forma inițială,
liberă.
Există două modalități de absorbție a antigenului prin macrofage: 1. Sechestrarea directă a antigenului după
aderarea sa la suprafața macrofagului; 2. mai eficient asociat cu procesul de opsonizare. (Opsonizarea este procesul
de legare a proteinelor opsonin la antigenele de suprafață bacteriene și simultan cu receptorii fagocitului. Opsoni –
proteine (anticorpi, componentele complementului) care ajută la ameliorarea fagocitozei prin opsonizare). Forma
monomerică a imunoglobulinei (IgM 8C), care acționează ca receptor de recunoaștere a antigenului pentru celulele
B, acționează ca una dintre substanțele opsonizante. În mod normal, ele se rup în mod constant de pe suprafața
celulară a limfocitelor B și astfel creează o piscină constantă de molecule specifice care există în antigeni. Funcția
de opsonizare poate efectua IgG. Un antigen care a intrat în organism interacționează cu imunoglobuline specifice
(IgM 8C sau IgG). Procesul de adeziune este realizat ca rezultat al interacțiunii părții Fc a imunoglobulinelor cu
receptorii FZ, pe care le posedă macrofagii. În urma adeziunii, are loc un proces de fagocitoză - absorbția AG
aderat. Fagozomul format ca rezultat al captării unei fuzibile de antigen cu lizozomi, care sunt în număr mare în
citoplasma celulei. În fagolizozomii formați, este în curs de desfășurare un proces activ de hidroliză a materialului
antigenic. sub influența hidrolazelor prin fagoliză, antigenul fie hidrolizează complet și părăsește celula, fie procesul
de hidroliză rămâne incomplet, care se poate datora unei cantități insuficiente sau a unei activități insuficiente a
enzimei fagolizozomale sau a unui antigen absorbit excesiv. În acest caz, antigenul distrus incomplet intră în
suprafața celulei într-o formă imunogenă.
 Fig. 10 Sechestrarea și prelucrarea antigenilor de macrofagi

Pentru dezvoltarea ulterioară a răspunsului imun, este necesară interacțiunea dintre macrofage, T-
helper și B-limfocite. Această interacțiune se realizează prin contact direct între limfocitele T și B ale
macrofagelor. (fig. 11) (Unii imunologi permit interacțiunea cooperativă a acestor celule la distanță). T
limfocitele secretă substanțe speciale - mediatori care contribuie la dezvoltarea unei clone a limfocitelor
B. Rolul mediatorilor este de a furniza un semnal suplimentar pentru limfocitele B. Limfocitele B
formează anticorpi după recunoașterea specifică a antigenului.

Fig. 11 Interacțiunea de contact a macrofagilor cu celula T (microfotografie electronica)

Etapele finale ale dezvoltării răspunsului imun sunt următoarele:

3. Limfocitele B plasmetice recunosc un antigen pe suprafața unui macrofag folosind receptorii lor
de recunoaștere a antigenului (IgM de suprafață) și astfel se pregătesc pentru producerea de
anticorpi;
4. o parte din subpopulațiile de limfocite T - celulele T helper recunosc acest antigen și devin
capabile să asiste celulele B pentru dezvoltarea completă a acestora din urmă la producătorii de
anticorpi;
 5. Ajutoarele T produc mediatori care ajută limfocitele B din plasmă să producă IgG pentru a spori
răspunsul imun; mediate de limfocite B se înmulțesc rapid;
6. O clonă de celule B din plasmă produce imunoglobuline care se leagă la antigen și le etichetează.
Antigenii marcați sunt recunoscuți de macrofage și distruși de ei;
7. Părți ale limfocitelor B din plasmă acționată sub influența substanțelor - mediatorii produși de
ajutorul T, sunt transformați în celule de memorie imunologică (fig. 12).

Fig. 12 Schema de interacțiune celulară în dezvoltarea răspunsului imunitar umoral. Antigenul capturat de
macrofage este dedus pe o suprafață celulară în formă imunogenică. În reacția de recunoaștere a antigenului intervin
T-helper primare care contribuie la maturizarea T-helper secundare , care ajută producerea anticorpilor. Ajutorul T-
helper secundare este necesar pentru a comuta sinteza IgM la sinteza IgG.

În cazul unui răspuns imun primar, acumularea de anticorpi este caracterizată prin trei etape:
1. Intervalul de fază latentă dintre momentul penetrării antigenului în organism și
apariția primilor anticorpi detectabili din ser;
2. creștere în fază - o creștere rapidă a cantității de anticorpi din ser la valorile
maxime posibile;
3. Faza de reducere a răspunsului răspunsului la fruct la dispariția aproape completă
a anticorpilor. durata fiecăreia dintre cele trei faze ca răspuns la diferite antigene
poate varia.
Durata fiecărei faze depinde de:
- caracteristicile structurale și doza de antigen;
- metoda de penetrare în oranism;
- caracteristicile individuale și specifice ale organismului însuși.
 De exemplu, faza latentă pentru bacteriofagul F174 (un imunogen foarte puternic) este de 20 de
ore pentru celulele roșii din sânge extraterestre - aproximativ 3 zile, pentru antigene proteice - 5-7 zile.
Timpul pentru atingerea concentrației maxime de anticorpi variază de asemenea. de exemplu, pentru
celulele roșii din sânge extraterestre, de această dată este de 4-5 zile, iar pentru antigene proteice, 9-14
zile.
Când se repetă imunizarea, anticorpii se acumulează în serul de sânge mult mai rapid și în număr
mai mare, datorită celulelor de memorie formate din imunizarea primară.
Prezența unui număr mare de epitopi în majoritatea antigenelor (determinanți antigenici) duce la
activarea unui număr mare de clone de limfocite B care au receptori cu specificitatea corespunzătoare.
Ca rezultat, celulele plasmatice formate secretă o serie complexă de anticorpi care reacționează cu
diferite părți ale suprafeței antigenului, adică există un răspuns policlonal. Este foarte dificil să obțineți o
imunizare obișnuită a anticorpilor la un anumit determinant. În prezent, această problemă poate fi
rezolvată cu ajutorul așa-numitei tehnologii hibridom dezvoltate la mijlocul anilor 70 de J. Koehler și C.
Miliptein. Tehnologia hibridoma se bazează pe fuziunea celulelor somatice și constă în hibridizarea
limfocitelor B imune cu celule tumorale.
În toate etapele care necesită interacțiunile celulă-celulă, rolul important de mediatori solubili ai
răspunsului imun - limfokine (proteine de origine limfoidă) și monokine (proteinele sintetizate de
macrofage). Aceste proteine armonice, produse de diferitele populații de celule - participanți la răspunsul
imun, determină creșterea ulterioară a clonelor și diferențierea limfocitelor activate cu antigen. Cu
ajutorul lor, se obține o creștere a răspunsului imunitar, de asemenea participă la suprimarea ulterioară a
răspunsului imun. Un răspuns imun este mediat de supresoare de limfocite T. Limfotoxine limfokine
limfokine cunoscute și citotoxice și factor de necroză tumorală, care efectuează funcția efectoare, liza
celulelor transformate. Sistemul efector, care funcționează în stadiul final al răspunsului imun, este
sistemul de complement, care este implicat în degradarea antigenului asociat cu anticorpii.
Un răspuns imun la antigeni – este un lanț de reacție, fiecare legătura fiind coordonată de
anumite gene. Mutațiile oricăreia dintre aceste gene vor afecta răspunsul imun. Mutațiile de gene apar în
mod constant. prin urmare, la șoareci de laborator, iepuri, porci, păsări și alte animale s-au constatat
diferențe individuale și interliniare în concentrația răspunsului imun.

b. Genele răspunsului imun

Genele răspunsului imun (genele Ir, eng. Immune response genes) sunt gene care controlează
răspunsurile imune ale organismelor la antigene simple. Exemple de antigene simple pot fi: a. Polimeri
aminoacizi liniare sau ramificați; b. proteine pure cu greutate moleculară scăzută (insulină, citocrom C) c.
alloantigeni (de exemplu, antigeni de histocompatibilitate, imunoglobuline).
Genele Ir furnizează intensitatea răspunsului imun, reglarea interacțiunii celulare, cadiizarea
structurii primare a imunoglobulinelor și a receptorilor limfocitelor. Astfel, genele Ir controlează
producția de Ac timus-dependentă, dezvoltarea alergiei (hipersensibilitate de tip întârziat), proliferarea
celulelor T.
Cele mai bine studiate genele Ir de șoareci de laborator. au un răspuns imun la multe antigene
simple controlate de gene localizate în regiunea I (în unele cazuri, regiuni K și D) ale complexului
histocompatibilității majore (GCGS). La alte specii de mamifere, genele răspunsului imun sunt localizate
în locurile GCGS corespunzătoare. de exemplu, la porci, genele răspunsului imun sunt legate de
principalul complex de histocompatibilitate al SLA. Răspunsul imun la porci este cantitativ și, respectiv,
are o natură poligenică. rezultă că intensitatea răspunsului imun la diferite antigene depinde de genotipul
organismului.
 Reactivitatea imunologică individuală la orice antigen depinde de prezența sau absența genelor Ir
pentru un antigen specific. Acest lucru poate explica rezultatul inegal al vaccinării pentru diferite
persoane și pentru diferite animale. Genele Ir sunt moștenite de tipul dominant. În multe animale studiate,
răspunsul imun la antigeni este moștenit poligen. În același timp, experimentele efectuate pe șoareci au
demonstrat că controlul genetic al răspunsului imun la antigene de specificitate îngustă este efectuat de o
genă dominantă autosomală. (fig. 13)

Fig. 13 Principiile de determinare a puterii genetice determinante a

răspunsului imun și natura moștenirii genelor răspunsului imun (Ir-gene).

Experimentul s-a făcut pe șoareci de două linii consangvinizate și cu diferiți

antigeni. A- șoarecii genotipului A dezvoltă răspuns imun scăzut la antigen;
B- șoarecii genotipului B se caracterizează printr-o mare reactivitate imună
față de acelagi antigen; C- hibrizii (A*B) F1 – buni producători de anticorpi,
ceea ce rezultă că puterea răspunsului imun este moștenită pe cale
dominantă; D- hibrizii reîncrucișării (A*B) F1*A, în care genotipul A –
producător slab de anticorpi, dă distribuția: 50% - producenți slabi de
anticorpi și 50% - puternici. O distribuție clară în două grupe echivalent
indică faptul că controlul puterii răspunsului imun este efectuat de un singur
genom. Natura moștenirii nu depinde de sexul animalului. Faptele enumerate
ne permite să concluzionăm că controlul genetic al răspunsului imun la
antigen este efectuat de genom autozomal dominant, care a primit numele de
gena răspunsului imun (Ir-gena). Pentru diferite grupe de antigeni există
genele proprii.

Pentru diferite grupuri de antigeni există genele Ir-proprii. Ir-genele reglează răspunsul imun prin
controlul exprimării Ia- gene – lor învecinate (immune associated genes) care codifică proteinele Ia
(antigene). Proteinele Ia sunt în prezent identificate cu antigeni de clasa II GCGS. Proteinele Ia joacă un
rol major în interacțiunea limfocitelor B, T și macrofagelor. Ele participă, de asemenea, la acțiunea
supresoarelor T. Proteinele Ia de pe membrana macrofagelor sunt asociate cu moleculele procesate a
antigenului (adică, procesate de macrofagele în sine).
Pe baza numeroaselor studii, proprietățile genelor Ir pot fi rezumate după cum urmează:
1. În genomul majorității speciilor de animale studiate, genele Ir sunt numeroase;
2. diverse gene Ir determină sinteza anticorpilor la anumite tipuri de antigeni;
3. diverse genele Ir care controlează răspunsul la diferiți antigeni în principal, sunt independenți
unul față de celălalt;
4. Multe gene Ir sunt legate de genele principalelor complexe de histocompatibilitate și sunt
responsabile pentru cooperarea limfocitelor T și B;
5. Ir-genele nu sunt legate de genele care codifică imunoglobulinele;
6. Ir-genele sunt foarte specifice, astfel încât un răspuns imun puternic la anumite antigene nu va fi
însoțit de un răspuns puternic la alte antigene;
7. diferențele determinate genetic în rezistența răspunsului imun persistă pe întreaga ontogeneză;
8. Efectul genelor Ir se realizează la nivelul populației de celule limfoide.
 c. Controlul genetic al răspunsului imun: o revizuire finală

Studiile mecanismelor de control genetic al rezistenței răspunsului imun au condus la o

concluzie destul de specifică: rezistența răspunsului imun la un antigen specific depinde de activitatea
unei singure gene dominante autosomale; produsul fenotipic al unei astfel de gene este molecula MHC
de clasa II; tipul celular care exprimă această genă este cel care prezintă celule antigenice.

În cazurile în care caracteristicile conformaționale ale porțiunii de recunoaștere a antigenului a

moleculelor de MHC clasa II corespund structurii antigenului (mai precis, epitopii antigenici), se
formează un complex imunogen care este exprimat pe suprafața celulelor prezentatoare de antigen,
ceea ce asigură dezvoltarea răspunsului imunitar.

Dimpotrivă, incapacitatea moleculelor MHC de clasa II ale indivizilor unui anumit genotip de a
interacționa cu peptidele antigenice va produce reactivitate imună.

Cu toate acestea, progresele semnificative obținute până în prezent în clarificarea problemelor

de reglementare a răspunsului imun demonstrează că răspunsul imun genetic nu depinde numai de
gene legate de MHC. Printre factorii care afecteaza raspunsul imun sunt gene care nu sunt legate de
MHC. De exemplu, imunodeficiența combinată severă este cauzată de absența unei gene de
recombinază, iar insuficiența de aderare a leucocitelor apare datorită mutațiilor genei care codifică
subunitatea de integrină beta1 și încălcarea expresie a LFA-1, CR3 și CR4. Un succes important în
studierea bazei genetice a patologiei imune a fost reprezentarea locurilor care reglează susceptibilitatea
la diabet zaharat insulino-dependent (în principal la șoareci NOD). Cel puțin 15 loci genetici sunt
cartografiate la acești șoareci și doar unul dintre aceștia este legat de MHC de pe cromozomul 17. Se
presupune că această genă codifică molecule MHC clasa II.

Macrofagele joacă un rol major în sistemul imunitar. Prin urmare, genele care reglează
activitatea lor pot determina, de asemenea, rezultatul multor răspunsuri imune.

În general, genele situate în afara regiunii MHC și care reglează răspunsul imun sunt
caracterizate de un polimorfism mai mic și, prin urmare, contribuția lor la definirea sensibilității la boli
nu este la fel de mare ca genele MHC.
Concluzii

Baza genetică a determinării imunității nu este îndoielnică, iar expresia neechivocă a imunității
la diferite persoane este o regularitate generală biologică. Fapte bine cunoscute ale sensibilității diferite
a persoanelor la vaccinuri prin introducerea acelorași doze de medicamente. Unii oameni dezvoltă
manifestări clinice ale infecției, alții nu au o reacție la imunizare. Aceasta este o consecință a
polimorfismului genetic ca răspuns la acțiunea factorilor biologici externi. Stadiile imunodeficienței
primare sunt defecte ereditare ale imunității celulare și umorale. Ele predispun la infecții bacteriene și
fungice, iar tipurile corespunzătoare de infecții (virale, bacteriene, fungice) sunt caracteristice diferitelor
forme.

Un exemplu clasic de rezistență ereditară la agenții biologici este hemoglobinopatia (anemia

seceră, talasemia) și enzimopatiile (deficiență G-6-PD), în care malaria plasmodium nu se poate
reproduce în homozigote mutante și heterozigote. Datorită faptului că persoanele cu hemoglobinopatii
și deficiența G-6-PD sunt rezistente la malaria Plasmodium, mutațiile patologice în loci corespunzătoare
s-au răspândit foarte mult într-o serie de populații care trăiesc în zone cu incidență mare de malarie
(Africa, Grecia, Italia, Filipine, Azerbaidjan, Uzbekistan ). Toate bolile de natură multifactorială pot fi
considerate ca exemple din ecogenetica umană, deoarece dezvoltarea lor este rezultatul interacțiunii
dintre genele de predispoziție și factorii de mediu.
Bibliografie

1. Abbas AB, Lichtman AH, Pober JS, WB - Cellular and Molecular Immunology -
Saunders,Philadelphia,2000
2. Hibino, T., Loza-Coll. M. et al. The immune gene repertoire encoded in the purple sea urchin
genome. Dev. Biol. 300, 349–365 (2006).
3. Hopkins J. Molecular immunology--gene regulation and signal transduction. Vet Immunol
Immunopathol. 2002 Sep 10;87(3-4):245-9.
4. Fernández-Cruz E., D. Alecsandru, S. S. Ramón. Mechanisms of action of immune globulin. Clin
Exp Immunol. 2009 Sep; 157(Suppl 1): 1–2. doi: [10.1111/j.1365-2249.2009.03955.x]
5. Flajnik, M. F. Comparative analyses of immunoglobulin genes: surprises and portents. Nature
Rev. Immunol. 2, 688–698 (2002).
6. Janeway CA jr., Travers P, Walport M., J. Capra JD - Immunobiology - Current Biology Ltd.,
Elsevier, New York, 1999
7. Nemazee D - Receptor Selection in B and T Lymphocytes - Annu. Rev. Immunol. 2000, 18: 19-51
8. Paul W.E - Fundamental Immunology - Raven Press, New York, 1993
9. Rhodes D. , Trowsdale J. Genetics and molecular genetics of the MHC. Rev
Immunogenet. 1999;1(1):21-31.
10. Weigert, M. G., Cesari, I. M., Yonkovich, S. J. & Cohn, M. Variability in the λ light chain
sequences of mouse antibody. Nature 228, 1045–1047 (1970).
11. Б.Ю. Крюков. Генетикаю Часть 7. Генетические основы иммунитета. Орёл: Изд-во
ОрёлГАУ,2006. – 142 с.
12. https://meduniver.com/Medical/pulmonologia/520.html (vizitat 05.12.18 13:20)
13. http://www.genetics.org/content/197/2/467 (vizitat 09.12.18 11:45)