Constructia unui scaffold in-

vitro pentru ficat artificial

Modelarea transportului de oxigen
• Scopul acestei lucrari este analiza designului unui scaffold care
permite alimentarea unui bio-ficat artificial (Bio Artificial Liver –
BAL) cu oxigen.
• Cele doua date de interes sunt: lungimea maxima a capilarelor si
distanta maxima dintre ele astfel incat sa se asigure perfuzarea
optima cu oxigen (peste 1.98e-19g/μm3) pentru prevenirea hipoxiei
tesutului hepatic aflat in cerstere.
• In lucrare este prezentat un model referitor la un capilar si tesutul
hepatic adiacent, care permite simularea transportului oxigenului
prin convectie si difuzie in capilar si de la peretele capilarului la
tesut, precum si preluarea sa metabolica.
• Rezultatele obtinute evidentiaza difuzia si nu convectia ca
mecanism principal responsabil de transportul oxigenului prin tesut.
• Distanta maxima parcursa in tesut pentru un capilar de 60mm
lungime este de cca. 150μm, in zona dn vecinatatea intrarii in
capilar, respectiv 108mm in regiunea de tesut din vecinatatea
iesirii din capilar.
• Aceste valori sunt aparent inacceptabile pentru dezvoltarea unui
sistem bazat pe doar mecanismul de transport difuziv.
• La nivelul anului 2004 (Aprilie) in USA sunt 90.438 pacienti pe lista de
asteptare pentru transplant cu timpi de asteptare care pot ajunge la 6
ani.
• Suplimentar timpului de asteptare intervin varsta, diagnosticul, tipul
de sange, etnicitatea, precum si alte aspecte de compatibilitate, atat
pentru pacient cat si pentru donator – dezvoltarea unui bio-organ
artificial devine astfel necesara.
• Necesitatea inlocuirii transplantului de ficat ca solutie a
disfunctionalitatilor specifice acute este motivata de cele cca. 30.000
decese anuale.
• Ficatul este pe al doilea loc ca nivel de solicitara (17.000), urmand
rinichilor.
• Deoarece celulele hepatice au o capacitate de regenerare mare, iar
rata de supravietuire in cazul transplanturilor este intre cele mai mici,
dezvoltarea unui BAL, respectiv “creterea” sa in-vitro devine
necesara.
• O data cu dezvoltarea nano-
tehnologiei este necesara depasirea
limitarilor impuse de transferul de
masa difuziv.
• In domeniul “tissue engineering”
aceste limitari sunt referitoare la
aportul de oxigen care este limitat –
in mod natural – de difuzie.
• Vasele capilare transporta oxigenul,
prin sange, la tesut.
• Pe masura ce sangele circula prin
capilare, oxigenul difuzeaza in
tesutul inconjurator.
• Ca urmare a procesului difuziv,
capilarele nu pot si prea departate,
altmiteri intervine hipoxia –
deficienta aportului de oxigen
(aprox. 60mmHg este limita la care Reteaua de vase capilare in
se instaureaza hipoxia).
designul propus pentru BAL
 Modelul fizic
• Modelarea FEM (FEMLAB)
urmareste analiza aportului de
oxigen in tesut.
• Regiunea din jurul capilarelor
reprezinta celulele tesutului.
• De interes este variatia
concentratiei de oxigen in raport cu
spatierea si lungimea capilarelor.
• Un model simplificat poate fi definit
utilizand simetria axiala a capilarului.
• Curgerea in capilar este laminara,
complet devoltata.
• Limitele domeniului de calcul sunt
extinse incat sa cuprinda vasul
capilar si tesutul adiacent.
• Modelul considera circulatia sangelui pre-saturat cu
oxigen, adus de la nivelul plamanilor, in vasul capilar, si
difuzia sa in tesutul din jur.
• Curgerea sangelui – presupus fluid Newtonian, la
hematocrit 45 – este vascoasa, laminara, complet
dezvoltata pe toata lungimea vasului, profilul de viteza
este parabolic (Hagen-Poiseuille)
• Acest model este diferit de profilul Haynes (trapezoidal),
evidentiat de studii anterioare.
• Regimul de curgere este staionar: capilarele sunt
intotdeauna umplute cu sange si oxigen, la o concentratie
data; aceasta ipoteza trebuie schimbata daca rate de
curgere se modifica (de ex. ca urmare a unui efort).
• In model, tesutul permite difuzia oxigenului din capilar.
• Pe masura ce difuzeaza, oxigenul este preluat de
metabolism contribuind la creerea ATP-ului.
• Modelul presupune densitatea uniforma a tesutului, care
este alcatuit din celule de acelasi tip.
• Pentru reactie se considera un model de ordin zero.
• Difuzia oxigenului in tesut este presupusa constanta; in
realitate, comportarea hemoglobinei poate face acest
model nerealist: hemoglobina elibereaza oxigenul cu o
rata neliniara, datorata schimbarilor alosterice* ale
formei proteinei.
• Modelul prezentat arata ca:
– Transportul difuziv de oxigen este mai important
decat transportul convectiv
– Hipoxia intervine la cca. 150μm de la peretele
capilarului, in tesut – dependent de concentratia de
oxigen, lungimea capilarului si rata de reactie.
----------------------------------------
* In biochemistry, an enzyme or other protein is allosteric if its activity or efficiency changes in response to the binding of an
effector molecule at a so-called allosteric site. Changes that enhance activity are referred to as allosteric activation, while the
opposite is called allosteric inhibition. "Allostery" is derived from the Greek "other site", referring to the typical scenario in which
an enzyme's allosteric and active sites are distinct.
** rezultate publicate indica 250μm
 Constrangeri referitoare la sanatate,
micro-fabricatie si sustenabilitate
• Dimensiunile mici ale graftului pun probleme de micro-fabricatie – in particular
canalele de curgere
• Peretii scafoldului trebuie sa fie memebrane semi-transparente cu pori:
oxigenul trebuie sa poata difuza din vas in tesut, fara ca sangele sau plasma sa
poata trece.
• Dioxidul de carbon – un produs rezidual rezultat din metabolismul celular –
trebuie indepartat din tesut pentru a se asigura sustenabilitatea celulelor. Acest
tip de separare moleculara a fost demonstrat in procedurile de “curatare” a
mediului biologic, dar integrarea sa in tehnologia de micro-fabricatie poate fi
complicata.
• Unul dintre cele mai dezbatute aspecte referitoare la dezvoltarea dispozitivelor
BAL este alegerea tipului de celule. Alegerea s-a concentrat in zona
hepatocritelor umane si porcine.
• Din punct de vedere al sustenabilitatii, hepatocritele umane se dezvolta greu in
mediile de cultura, facand dificila acumularea unei mase celulare consistente
pentru fabricatia unui dispozitiv BAL. Produsele bio-chimce pe care ele le
produc sunt aceleasi cu cele produse de ficatul natural, astfel incat rejectia
imunitara a implantului este mai redusa.
• Hepatocritele porcine sunt mai usor de crescut si evidentiaza proprietati mai
bune de eliminare a amoniacului. Pe de alta parte, celulele porcine pun
probleme referitoare la riscurile crescute de imbolnavire, fiind susceptibile fata
de retrovirusii endogeni porcini.
Governing Equations Boundary Conditions

For transport of oxygen: For z = 0 and z = 60

(Left tissue and Right tissue)
∂C ∂C ⎛ ∂ 2C ∂ 2C ⎞ ∂C
275
+ uz = Dr z ⎜⎜ 2 + 2 ⎟⎟ + R =0
∂t ∂z ⎝ ∂r ∂z ⎠ ∂z r =5

⎛ r2 ⎞
For blood flow: u z = u max ⎜⎜1 − 2 ⎟⎟ for 0 < r < 5
⎝ R ⎠
⎛ ∂u ∂u ⎞ ⎛ ∂ 2u ⎞ ∂p
ρ ⎜ z + vz z ⎟ = µ ⎜ 2z ⎟− otherwise u = 0
⎝ ∂t ∂z ⎠ ⎝ ∂z ⎠ ∂z
⎛ r2 ⎞ For r = 275 For r = 0
u z = u max ⎜⎜1 − 2 ⎟⎟
(Far Tissue) (Axis)
⎝ R ⎠
∂C ∂C
60 60

=0 =0
∂r z =0 ∂r z =0

Boundary at tissue and capillary: V = 0

∂u
= 0 in the capillary
∂r

Ci = 1 concentration at the inlet of capillary

Reaction Term:

Zeroth – order reaction term that is a

constant.

Summary of Assumptions:
1. All capillaries have uniform geometry of a perfect cylinder of 5 micrometers.
2. All simulation proceeds within our defined constants of diffusivity and density.
3. The tissue is directly adjacent to the capillary with no other gaps in between.
4. The oxygen carrying fluid and tissue are assumed to have constant properties in terms
of viscosity, density, flow-rate and inlet oxygen concentration.
5. There is no flow in r-direction but only in z-direction of fluid inside the capillary.
6. Zeroth – order reaction for O2 metabolism by liver tissue.
7. Steady State Equation.
8. Constant O2 concentration at the inlet.
9. Rigid boundary layers.
10. Axi-symmetric model.
11. Laminar fluid flow inside the capillary.
Appendix B: Mathematical Statements
Table 2: Spreadsheet of all dimensional constants and their respective non-dimensional
equivalents
Value (dimensional) Value* (non-dimensional)
Blood Density1 1.06 x 10-12 g/um3 1
Blood Viscosity-2 5.94 x 10-5 g/ um * sec 320215
4
DiffusitivityTissue 1750 um2/sec 1
5 2
DiffusitivityCapillary 1060 um /sec .606
4 -18 3
Inlet Concentration 4.5 x 10 g/um (100 mmHg) 1
Maximum Velocity3 260 um/sec .7429
5 -21 3
Reaction rate constant -6.10 x 10 g/um * sec -3.2 x 10-5
Level till hypoxia4 1.98 x 10-19 g/um3 (60 mmHg) 0.044

Methods for making constants nondimensional*:

Blood density* = Blood density = 1
Blood density

Characteristic length = 5 um

Need variable u00 = Dcap = 1750/5 = 350 um/sec

L

Blood viscosity* = Blood viscosity = 320215

(Blood dens.)(uoo)(L)

DiffusitivityTissue* = DiffusitivityTissue = 0.606

DiffusitivityCapillary
DiffusitivityCapillary* = DiffusitivityCapillary = 1
DiffusitivityCapillary

Inlet Concentration* = Inlet Concentration = 1

Inlet Concentration

Maximum Velocity* = Maximum Velocity = .7429

u00

Reaction rate constant** = (Reaction rate constant)(L2) = 1.44 x10-22 g/um3

DiffusitivityTissue

Reaction rate constant* = Reaction rate constant** = -3.2 x 10-5

Inlet Concentration

Level till hypoxia* = Level till hypoxia = 0.044

Inlet Concentration
(at this non-dimensional concentration on the concentration plots is where hypoxia occurs)
Appendix E: References

World Health Organization (WHO)

World Heath Report 2003: Deaths by cause, sex and mortality stratum in WHO regions
Source: http://www.who.int/whr/2003/en/Annex2-en.pdf

Asian Liver Center at Stanford University

Source: http://liver.stanford.edu/index2.asp?lang=eng&page=statistics

DSP Development Corporation

Source: www.dadisp.com/spring98/ spr98c.htm

Appendix 1 constants:
1
N. Tsuda, K, Kuroda and Y.Suzuki. An Inverse Method to Optimize Heating Conditions in RF
capacitive hyperthermia, IEEE, transactions in Biomedical Engineering, 1996m 43 (10), 1032
2
Chien S. “Shear dependence of Effective Cell Volume as a Determinant of Blood Viscocity.”
Science. 168, 22 May 1970
3
http://www.sp.uconn.edu/~bi107vc/sp02am/toedt/lecture6.htm
3
http://styx.nsci.plu.edu/~dhansen/circulation.pdf
5
Mintun M.A., Lundstrom, B.N., Synder, A.Z., Vlassenko A.G., Shulman G.L., and Marcus
Raichle. “Blood flow and oxygen delivery to human brain during functional activity: Theoretical
modeling and experimental data.” PNAS 2001. 98 (12) 6859-6864.
5
Tsai A.G., Friesenecker B., Mazzoni M.C., Kerger H., Buerk D.G., Johnson P.C., and M.
Intaglietta. “Microvascular and tissue oxygen gradients in the rat mesentery.” PNAS 1998. 95
(12), 6590-6595
4
Weind, KL, Boughner DR, Rigutto L, and CG Ellis. “Oxygen diffusion and consumption of
aortic valve cusps” Am J Physiol Heart Circ Physiol 281: H2604-H2611, 2001.