Analiză Instrumentală

Curs 7 – sem 2
 Detectoare utilizati in cromatografia de
lichide de înalta performanta (HPLC)
Detectoare spectrofotometrici în UV-VIS
• Acest grup de detectori sunt cei mai folositi detectori
pâna în prezent, atât în LC, cât si în HPLC. Pentru a
putea fi utilizati, compusii separati cromatografic
trebuie sa fie colorati - adica sa absoarba lumina pe
domeniul de lungimi de unda al detectorului. Pe de
alta parte, eluentul trebuie sa fie practic transparent
pentru acelasi domeniu spectral. Legea fizica pe baza
careia functioneaza acesti detectori este legea
Lambert-Beer (A=elC). Deci unitatile vor fi unitati de
absorbanta, adimensionale.
Se pot distinge si în cazul acestei clase de detectori mai multe
tipuri de detectoare:
• Detectoare monocromatice au fost primii utilizati, fiind mai
ieftini deoarece lucreaza doar la o lungime de unda. Modelul
cel mai raspândit se compune dintr-o sursa luminoasa cu
deuteriu sau cu vapori de mercur, un monocromator care
separa un domeniu îngust (de ex. linia 254nm a mercurului) si
un detector.
• Detectoare policromatice mai frecvent utilizaţi în
cromatografele HPLC moderne permit si selectarea lungimii
de unda la care se lucrează, dar chiar pot înregistra electronic
absorbanta celulei la mai multe lungimi de unda simultan.
Acest mod de lucru da o mai mare siguranţa analizei, în sensul
ca permite stabilirea purităţii, adică daca picul constituie un
semnal dat de o singura substanţa sau de un amestec (ceea ce
se cunoaşte sub numele de stabilirea purităţii picului).
 10
2 3 6

7
1

4 5
I
8

9
t

• Principiul de funcţionare al detectorului de UV. 1- raze UV, 2- substanţa

ce vine de la coloana cromatografica,3- substanţa ce pleacă, 4- geam de
cuarţ, 5- tub capilar prin care circula substanţa de analizat, 6- detector
(fotomultiplicator), 7- amplificator,8- sistem de achiziţie, prelucrare si
afişare a datelor, 9- cromatograma,10- cuva detectorului
Detectorul este format dintr-o celula cilindrica
(5) cu capacitate de 1µl-10µl care este
intersectata de coloana cu eluent. Razele UV
(1) sunt aranjate astfel incit sa treacă prin
celula cu proba de analizat (5) si apoi sa cada
pe fotoelement (6). Semnalul de la
fotoelement ajunge la amplificator (7) (acesta
măreşte intensitatea semnalului) si apoi la
sistemul de achiziţie, prelucrare si afişare a
datelor obţinute (8); rezultatul este o
cromatograma (9) ale cărui picuri va oferi
informaţii calitativa si cantitative despre
substanţele din soluţia analizata.
 Detectoare refractometrice
• Detectoare refractometrice, au la baza legile
refractiei luminii.
• Principiul de functionare al acestor detectoare
are la baza legea lui Fresnel - de transmitere a
luminii prin medii transparente având un
indicele de refractie dat. Astfel, un fascicul
luminos (mono sau policomponent) trece
printr-o celula cu doua compartimente unul
continând doar eluentul pur iar celalalt faza
mobila care paraseste coloana
• Principiul de functionare al unui detector refractometric. 1- radiatia
luminoasa, 2- amestec de substante, 3- solvent pur,4- perete sticla, 5-
detector refractometric, 6,6*- fotoelement, 7- amplificator, 8- surub
reglator, 9- sistem înregistrator, 10- cromatograma, C- cuva
refractometrica, M- sistem ce regleaza detectorul in funcţie de unghiul sub
care cad razele
• Radiatia luminoasa (1) trece prin solventul pur, apoi prin
peretele de sticla ce separa cele 2 incinte, prin amestecul de
substante. Ajunge sub un anumit unghi pe detector, o parte se
reflecta pe fotoelementul 6’ iar o parte se refracta pe
fotoelementul 6. Semnalul este amplificat. Daca cele doua
tensiuni primite de la cei 2 detectori sunt diferite, motorul
primeşte un semnal de corecţie, in scopul egalizării tensiunilor,
astfel are loc compensarea modificării indicilor de refracţie. In
urma deplasarii şurubului 8 , sistemul înregistrator 9 va înregistra
datele sub forma unei cromatograme.Diferenta dintre indicii de
refractie pentru solutiile aflate în cele doua compartimente vor fi
practic nule, atâta timp cât din coloana iese doar eluentul pur,
dar diferita în momentul în care în eluent mai apare un
component separat - antrenat de catre eluent din coloana. În
momentul iesirii unui component are loc o deplasare a pozitiei
fascicolului emergent din detector - deplasare care este
proportionala cu concentratia si sesizata de catre detector.
 Detectoare electrochimice
• Detectoare electrochimice sunt folositi cu precadere pentru
identificare calitativa si cantitativa la amestecuri de electroliti
precum si la substante care se pot oxida respectiv reduce.
Intru-cat marea majoritate a substantelor se pot oxida sau
reduce si intru-cat detctorii si logistica electronica de
interpretare a datelor au devenit foarte performante
momentan HPLC cu detectori electrochimici a devenit cea mai
importanta metoda analiza si identificare a substantelor.
• Exista doua tipuri de detectoare electrochimice:
- Conductometrice- sunt folositi pentru detectia calitativa si
cantitaiva la electoliti
- Coulometrice, amperometrice- sunt folositi pentru detectii in
regim de oxido-reducere la substantele organice;
 Detectoare conductometrice
• Detectorii conductometrici sunt folositi in special
pentru solutiile ionice unde substantele disociaza
complet. Acest tip de detectori se utilizeaza cu
precadere în cromatografia pe schimbatori de ioni si
sunt sensibili la ioni anorganici sau organici inclusiv
acizi organici. Sunt asadar detectori specifici. Sunt
suficient de sensibili (500pg-1ng). Detectorii
conductometrici măsoară conductivitatea fazei
mobile. Este constituit din doi electrozi situaţi in
coloana cu eluent si o rezistenta situata intre cei doi.
Rezistenta este măsurata cu ajutorul circuitului
electric la care este legata.
 6
7
1 2

4
5 H 8
3

• Principiul de functionare al detectorului conductometric. 1-

generator de inalta frecventa, 2- celula conductometrica, 3-
electrozi de platina, 4- sustanta de analizat ce vine de la
coloana cromatografica, 5- substanta iese din celula
conductometrica, 6- amplificator, 7- sistem de achiziţie,
prelucrare si afişare a datelor, 8- cromatograma in coordonate
conductivitate si timp
• Celula conductometrica este etansa, iar cei doi electrozi
sunt fixati si dimensionati din fabrica. Substanta de
analizat(4) vine de la coloana cromatografica si intra in
celula conductometrica(2). Cand se modifica
concentratia primei substante (H=kC) se modifica
conductivitatea celor doi electrozi (3). Aceasta schimbare
este amplificata si prinsa sub forma unui pic in
cromatograma (8). Astfel se realizeaza analiza cantitativa
probei. A doua substanta va modifica conductivitatea
electrolilor dupa un anumit timp cea ce duce la
masurarea timpului de retentie (analiza calitativa) si la
aparitia unui nou pic in cromaograma.
• Este necesar un generator de inalta frecventa pentru a
nu se instala un transfer de ioni intre cei doi electrozi
ceea ce ar duce la denaturarea analizei. Se alimenteaza
cu 5kHz.
 Detectoare de fluorescenta
• Detectoare de fluorescenta se bazează pe măsurarea
intensităţii fluorescentei pentru substanţele ce
prezintă acest fenomen. Fluorescenta este un
fenomen care apare la unele substanţe când sunt
iradiate cu ultraviolete. Acele substanţe emit radiaţii
pe o lungime de unda mai mare decât a radiatei
incidente. Daca emisia de radiaţii are loc in acelaşi
timp cu emisia de radiaţie ultravioleta incidenta
fenomenul se numeşte fluorescenta. Putini compuşi
prezintă fluorescenta iar cei ce nu prezintă pot fi
transformaţi in derivaţi ai lor ce au aceasta
proprietate.
• Pentru ca intensitatea fluorescentei sa poată fi
măsurata instrumental, raportul dintre cantitatea de
radiaţie remisa si cantitatea de radiaţie UV incidenta
trebuie sa aibă valori cuprinse intre 0.1-1. Sistemul
optic al celor mai multi detectori de fluorescenta este
aranjat astfel incat lumina fluorescenta sa cada sub
un anumit unghi( de 90º), pe raza incidenta.Acest
lucru micsoreaza cantitatea de lumina incidenta care
ar interactiona cu semnalul. In aceste circumstante
semnalul este masurat pe un fundal aproape negru
(pentru a mai reduce din luminozitatea fundalului se
foloseste un filtru).
 1
2 I 16
15
3

t
13
8
5

14
6
7 9 10 11 12

• Principiul de funcţionare al detectorului de fluorescenta.1- sursa de

radiaţie, 2- fanta, 3- filtru, 4- lentila, 5- substanţa ce vine de la coloana. 6-
substanţa de analizat, 7-cuva cu pereţi de cuarţ, 8- unghi de 90 grade,9-
substanţa ce iese din cuva, 10- lentila, 11- filtru, 12- fanta, 13- detector de
fluorescenta, 14- amplificator, 15- sistem de preluare, prelucrare si afişare
a datelor, 16- cromatograma.
• Principiul de funcţionare: Radiaţia emisa de
sursa (1) după trecerea prin filtru este
focalizata de lentila (4) apoi cade sub un unghi
de 90º pe radiaţia incidenta. Lumina
fluorescenta emisa este focalizata de lentila
(10), trece prin filtrul (11) si ajunge la
detectorul de fluorescenta care ii măsoară
intensitatea. Semnalul este apoi amplificat si
preluat de sistemul de prelucrare si afişare a
datelor(15). Datele obţinute sunt afişate sub
forma unei cromatograme (16).
 Detectoare Diode Array
• Principiul de utilizare. Detectorul este utilizat cu lampa de
deuteriu si xenon care emit ultraviolete (1). Lumina de la
lampa trece prin proba aflata in tubul capilar (5) iar lumina
dispersata trece printr-o retea de difractie (6) apoi cade pe
dioda Array (7). Rezolutia detectorului depinde de numarul
diodelor si de numarul lungimilor de unda acoperite. Dioda
Array poate contin sute de diode iar semnalul de la fiecare
dioda este preluat si amplificat de catre amplicator (8) ca la
sfarsit sa ajunga la sistem de preluare, prelucrare si afişare a
datelor (9) care de obicei este un calculator care stocheaza
datele pe hard disc. La sfarsitul analizei informatile oferite de
fotodiode sunt afisate pe o cromatograma. Sunt oferite
intensitatile substantelor din amestec (analiza cantitativa) si
timpii lor de retentie (analiza calitativa).
 2 3

1 6

4 5 I

10

7
t

8
9

• Principiul de funcţionare al detectorului sir de fotodiode. 1- radiaţii

ultraviolete, 2- substanţa ce vine de la coloana cromatografica,3-
substanţa ce pleacă la tratament chimic, 4- fereastră cuart, 5- tub capilar
prin care circula substanţa de analizat, 6- reţea de difracţie, 7- dioda Array,
8- amplificator, 9- sistem de preluare,achiziţie si afişare a datelor, 10-
cromatograma (in care se preiau concomitent toate lungimile de unda)