Diagnosticul de laborator în

infecțiile bacteriene gastro

duodenale
Generalități
• Helicobacter pylori sunt bacili gram negativi spiralați cu o dimensiune
de aproximativ 0,5 x 3,0 micrometri.
• Sunt bacterii mobile, prin intermediul a 4-6 flageli care sunt atașați
polar (lofotriche).
• H. pylori se găsește numai la nivelul celulele epiteliale secretoare de
mucus ale stomacului și este un agent etiologic important în
patogeneza ulcerului gastroduodenal, gastritei atrofice, limfomului
MALT, adenocarcinomului gastric, purpura trombocitopenică
idiopatică, deficit vitamina B12.
• Leziunea de bază este inflamația progresivă a mucoasei, care poate
duce la modificări atrofice preneoplazice.
• Deoarece rata de progresie a leziunilor mucoasei este imprevizibilă, iar
infecția este întotdeauna transmisibilă, a fost recomandat ca ori de câte
ori se constată o infecție cu H. pylori să fie tratată.
• Excepția de la această regulă este reprezentată de cazurile în care
există contraindicații importante (pacienți vârstnici cu comorbidități
extinse).
Diagnostic
Invaziv necesită probe de țesut gastric sau de mucus colectate în timpul endoscopiei gastrice :

• Testul rapid al ureazei (RUT)

• Histologie

• Cultură

• Metode moleculare

Endoscopia este, în general, recomandată ca metodă primară de diagnostic pentru:

• orice pacient cu cașexie și săngerare GI

• orice pacient asimptomatic ≥ 55 de ani

Diagnostic
Neinvaziv care necesită doar analiza respirației, scaunului sau sângelui:

• Testul respirației cu uree marcată (UBT)

• Testul antigenului scaunului (SAT)

• Serologie

• Metode moleculare
Metode invazive RUT (rapid urea test)

• H. pylori este cunoscut pentru producerea de uree abundentă.

Enzima urează hidrolizează ureea pentru a elibera CO2 și NH3
și protejează H. pylori de pH-ul gastric foarte scăzut.
• RUT este un test invaziv prin faptul că este efectuat pe o
biopsie gastrică. Testul oferă dovezi indirecte ale infecției
prin identificarea prezenței ureazei la nivelul mucoasei
gastrice.
• Fragmentul bioptic este plasat într-un mediu semisolid (gel
de agar) sau lichid care conține uree și un indicator de pH
(adică roșu fenol, albastru bromofenol); ureaza bacteriană
hidrolizează ureea pentru a produce amoniac și dioxid de
carbon.
Metode invazive RUT (rapid urea test)
• Amoniacul crește pH-ul conducând la schimbarea culorii (adică roșu
fenol: de la galben la roz sau roșu).
• Indicatorii de pH sunt capabili să înceapă reacția la un pH mai scăzut,
cum ar fi 5,4, reducând astfel activitatea contaminării bacteriilor
bucale, dintre care multe conțin și uree abundentă.
• Sistemul cuprinde, de asemenea, un antibiotic pentru a suprima
creșterea altor specii bacteriene.
• Precizia diferitelor teste RUT ca teste de diagnostic primare este
ridicată (sensibilitate: 80% -100%; specificitate: 97% -99%).
RUT rezultate fals negative
Pot apărea din cauza
• contaminarii cu formalină a forcepsului de biopsie
• prezența metaplaziei intestinale sau utilizarea antibioticelor, a compușilor ce conțin bismut sau a inhibitorilor
pompei de protoni. Acestia pot afecta și testul respirației cu uree marcată și posibilitatea cultivării.
• gastrectomie parțială, din cauza sarcinii bacteriene reduse, adesea legată de prezența bilei.

• sângerări gastro-intestinale superioare recente, deoarece sângele scade sensibilitatea RUT posibil legată de
prezența albuminei.
RUT rezultate fals pozitive
Pot apărea din cauza
• Prezenței altor bacterii ce conțin urează (Proteus mirabilis, Citrobacter freundii,
Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae și Staphylococcus aureus.
• Cu toate acestea, cu excepția cazului în care pacientul are aclorhidrie sau
hipoclorhidrie, este puțin probabil ca aceste organisme să fie prezente în
concentrație suficientă pentru a produce un test pozitiv.

• Piesa bioptică este ținută în mediu peste 24h.

 Puncția bioptică-particularități
Numărul de biopsii
• Pacienții cu ulcer duodenal au de obicei mucoasă trofică (H. pylori
sunt abundenți în special în tot antrul): o singură probă din unghiul
antral va avea un randament ridicat (> 85%; adesea de la 95% la
100%).

• În prezența gastritei atrofice și a zonelor mari de metaplazie

intestinală (conținând câteva organisme H. pylori): 2 probe - una
din antrum evitând zonele de ulcerație și metaplazie intestinală
evidentă și una din corpus gastric.
Utilizarea eșantionului RUT în scopuri suplimentare

Pentru a limita suferința pacientului și durata endoscopiei, proba de țesut conținută

în agarul unui test RUT poate fi utilizat în continuare în alt scop:
• pentru testarea moleculară a H. pylori;

• pentru prezența rezistenței la claritromicină;

• pentru testarea genotipului CYP2C19 al gazdei (proteină implicată în metabolismul xenobioticelor, inclusiv
multe IPP
 Diagnostic invaziv Examen histologic
Colorația hematoxilină-eozină
• este de obicei adecvată (sensibilitate: 69-93%;
specificitate: 87-90%): poate identifica direct H. pylori
și poate evalua gradul de inflamație.

• Cu toate acestea, atunci când avem un frotiu

paucibacilar și cu modificări atrofice de mucoasă se
poate recurge la alte tipuri de colorații .
Warthin-Starry silver
 Colorația Genta
• Are avantajul de a vizualiza atât
celulele inflamatorii, cât și H. pylori
prin combinarea a trei colorații (argint,
HE și albastru alcian)
Imunohistochimia
• Este mai sensibilă decât colorațiile
tradiționale și fiabilă.

• Avantajele majore includ un timp de

screening mai scurt și o specificitate ridicată.

• Cu toate acestea, utilizarea sa este limitată,

deoarece nu este practic de realizat.
 FISH (Fluorescence in situ hybridization)
• Este o altă metodă cu specificitate ridicată și care oferă
rezultate rapide (3 ore).

• Un set de sonde de acid nucleic peptidice (PNA) au

fost dezvoltate pentru a detecta H. pylori și rezistența
sa la claritromicină.

• Cu toate acestea, este sensibilitatea a fost de numai

80% pentru o specificitate de 93,8%.
Cultivarea
Cultura nu este utilizată în mod obișnuit pentru diagnosticul inițial - nu este la fel de sensibilă ca histologia și
RUT - ci este necesară pentru testarea susceptibilității la antibiotice în cazul eșecului terapeutic al tratamentului
empiric.

Medii utilizate:

• Agar Brucella + 5% sânge de cal,

• agar de infuzie creier-inimă + 7% sânge de cal

• agar chocolat
Condiții, Morfologie, Teste biochimice
• Organismul necesită un mediu microaerofil (5% -10%
CO 2, 80% -90% N 2 și 5% -10% O 2) și 5 până la 7 zile
de incubație la 37 ° C, cu umiditate.

• Coloniile au aspect cenușiu-translucid dispuse in roi.

• Coloniile sunt ureaza +, oxidaza + și catalaza +. Aceste

caracteristici, plus un test de hipurat negativ, vor
diferenția H. pylori de Campylobacter jejuni.
Diagnostic Molecular
• Metodele moleculare pot fi efectuate atât pe biopsii gastrice
(diagnostic invaziv), cât și pe probe de scaun (neinvazive)

• Au avantajul unui diagnostic rapid lor și al influenței limitate a

condițiilor de transport.

• Real time PCR este testul cu cea mai mare specificitate si

sensibilitate, în plus poate detecta concomitent și rezistența la
claritromicină.

• PCR poate determina, pe probe de biopsie, tulpini de genotip cagA +

/ vacA + s1m1 care sunt asociate cu progresia leziunilor
precanceroase gastrice.

• Principala limitare în detectarea ADN-ului de H. pylori în fecale este

prezența inhibitorilor Taq-polimerazei și a recuperarea ADN-ului
adecvat pentru analiza PCR.
Diagnostic neinvaziv UBT (Urea breath test)
• În acest test, ureea marcată (13 C) este administrată oral pacientului prin capsulă sau un lichid aromat.
• Ureea marcată se difuzează apoi prin epiteliul mucoasei gastrice unde este descompusă de ureaza produsă de
H. pylori.

• CO2 radioactiv eliberat este absorbit de peretele gastric, apoi se difuzează în sânge.

• Ajuns la plămâni, aerul expirat este colectat și măsurat într-un contor de scintilație sau spectrofotometru în
infraroșu pentru a evalua raportul între 13 C și 12 C.

• Prin urmare, este posibil să se estimeze activitatea ureazei gastrice, presupunând că la indivizii sănătoși, nu
există activitate urează în stomac.
Diagnostic neinvaziv- Testarea antigenelor fecale (SAT)

• Avantajul testului antigenului scaun (SAT) este de a evalua eradicarea infecției cu H. pylori. Se poate efectua
la 4 săptămâni după finalizarea tratamentului pentru a evalua succesul terapeutic.

• Este o alternativă la UBT în acest scop.

• În ciuda tuturor observațiilor de mai sus cu privire la performanța detectării antigenului H. pylori în scaun,
are și unele dezavantaje:

▪ concentrația de antigen poate fi scăzută (degradarea în timpul trecerii prin intestin; excreția poate varia în
timp)

▪ utilizarea N-acetilcisteinei ca agent mucolitic poate reduce precizia diagnosticului

Diagnostic neinvaziv-Testarea serologică
• În prezent, detectarea anticorpilor (IgM, IgA, IgG) este frecvent utilizată pentru a diagnostica infecția, datorită
ușurinței recoltării, și datorită faptului ca nu este afectată de terapie (IPP, compuși care conțin bismut sau
antibiotice).

• Rezultatul pozitiv trebuie confirmat cu un test neinvaziv care identifică infecția activă cu Helicobacter pylori,
cum ar fi UBT sau SAT.

• Antigenicitate încrucișată cu alte bacterii predominante înrudite antigenic, de exemplu, Campylobacter etc. în
zona endemică.

• Cea mai importantă limitare este incapacitatea de a face diferența între infecția activă sau vindecată.

• Testele serologice (ELISA, Imunoblot) sunt utile în susținerea diagnosticului infecției active cu H.pylori în acele
situații (atrofie gastrică, sângerare ulcer, limfom MALT, terapie) în care alte teste neinvazive pot fi fals negative.
TSA
• Conform recomandărilor Centrului Național de Referință pentru Helicobacter, ar trebui să se facă o biopsie
pentru testarea rezistențelor cel târziu după primul tratament eșuat, pentru a găsi cea mai bună combinație de
antibiotice pentru pacient.

• Un test de hibridizare inversă (de exemplu, GenoTypeHelicoDR; Hain Lifescience GmbH) poate fi utilizat cu
succes pentru a detecta simultan H. pylori și mutațiile asociate cu claritromicina și rezistența la levofloxacină.

• Materialul de biopsie în sine, precum și materialul de cultură extras din acesta, pot fi utilizate ca materie
primă.

• Testul durează doar 5 ore. Dacă se solicită o identificare direct din biopsie, un rezultat poate fi obținut în
numai 1-3 zile și astfel economisește o cantitate semnificativă de timp în comparație cu TSA fenotipic clasic.