Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Temperatura are o mare influen asupra proceselor fiziologice ale celulei microbiene deoarece
stimuleaz sau inhib activitatea echipamentului lor enzimatic.
n funcie de temperaturile posibile ale mediului natural i ca rezultat al adaptrii, diferitele
specii de microorganisme prezint urmtoarele temperaturi:
temperatura minim temperatura la care mai poate avea loc creterea, n schimb dac
temperatura scade sub valoarea minim, creterea este oprit;
temperatura maxim - temperatura la care creterea este nc posibil dar prin depirea
acesteia efectul devine letal.
preferenial termofile (Tm = 25-28C; To = 45-55C; TM = 60-65C) din care fac parte
bacterii lactice ale genului Lactobacillus , unii fungi;
obligat termofile (Tm = 37C; To = 50-60C; TM = 65-70C) din care fac parte specii ale
genurilor Bacillus i Clostridium, actinomicete.
Microorganismele termofile sunt folosite industrial pentru obinerea de produse lactate acide, a
enzimelor termostabile, pentru purificarea apelor reziduale, ca bioindicatori pentru anumite
tratamente termice.
Umiditatea
Viaa microbian este posibil numai cnd n mediul nutritiv exist ap liber care particip ca
solvent, ca mediu de reacie pentru enzimele celulare i pentru transportul bidirecional al
produselor de metabolism. Dac coninutul de ap liber intracelular se reduce, celulele trec n
stare de preanabioz, continuat cu anabioz, n care enzimele trec n stare inactivat iar
metabolismul este mult redus. n atmosfer exist o umezeal relativ de 70-90% i prin
pstrarea alimentelor, n timp, n funcie de temperatur i compoziia produsului are loc o
absorbie a vaporilor de ap din aer, instalndu-se o stare de echilibru, cu creterea cantitii de
ap liber i a indicelui de activitate al apei, aw. Acesta se poate calcula cu relaia:
aw = P/P0
n care:
P presiunea de vapori a apei din produs;
P0 presiunea de vapori a apei pure.
Microorganismele se pot dezvolta ntr-un domeniu larg de aw situat ntre valori de 0,62-0,99 i
n funcie de adaptare n raport cu limitele de aw care le permit creterea se pot mpri n trei
categorii:
microorganisme xerofite aw = 0,62-0,75; din care fac parte mucegaiuri ale g. Xeromyces,
g. Aspergillus, drojdii osmotolerante, bacterii halotolerante;
Concentraia n oxigen
Aerul atmosferic conine aproximativ 20% oxigen. Microorganismele necesit oxigen pentru
biosinteza compuilor organici i pentru desfurarea proceselor de oxidoreducere biologice.
n funcie de necesarul n oxigen procurat din aer se disting 5 tipuri de comportare difereniat a
microorganismelor i anume:
aerobe sunt dependente de oxigenul din aer, se dezvolt la suprafaa lichidelor, a mediilor
solide. Oxigenul servete ca acceptor final de electroni transportai prin catena respiratorie.
Celulele eucariote folosesc oxigenul n sinteza sterolilor i a acizilor grai nesaturai (drojdii,
mucegaiuri);
facultativ anaerobe , nu necesit oxigen pentru cretere dar cresc mai bine n prezena sa. Se
dezvolt bine n medii lichide n care solubilitatea oxigenului din aer este mai redus
(bacterii lactice etc.);
anaerobe aerotolerante nu necesit oxigen pentru cretere i cresc la fel de bine n prezena
sau absena sa (Enterococcus faecalis, Lactobacillus plantarum);
strict (obligat) anaerobe , nu tolereaz oxigenul i mor n prezena acestuia. Nu pot obine
energie prin respiraie propriu-zis i folosesc fermentaia sau respiraia anaerob n acest
scop (bacterii butirice, metanobaceterii etc.);
Energia radiant
Lumea vie este bombardat de radiaii electromagnetice cu lungimi de und ntre 10-4la 106 nm; n
acest domeniu microorganismele sunt influenate de urmtoarele radiaii:
Radiaii ionizante (, , )
Au lungimi de und mai mici de 12 nm, o energie radiant intens ce acioneaz prin ionizare cu
eliberarea de ioni,radicali liberi ce acioneaz prin ruperea legturilor de hidrogen, oxidarea i
formarea dublelor legturi, modificri n structur, polimerizri. n prezena oxigenului, aciunea
radiaiilor ionizante este amplificat prin generarea de radicali OH- sunt intensificate procese de
oxidare, denaturarea ADN-ului, ceea ce conduce la moartea celulei. Eficiena acestor radiaii
depinde de forma i starea celulei; celulele cu forma coccus sunt mai rezistente dect formele
bacilare, iar formele vegetative sunt mai sensibile dect n stare sporulat. Succesiunea n sensul
creterii rezistenei la efectul distructiv al radiaiilor este urmtoarea:
Bacterii Gram-negative > bacterii Gram pozitive > fungi > virusuri
Dei efectul radiaiilor ionizante se manifest asupra tuturor microorganismelor, acestea au o
radiosensibilitate diferit care se poate aprecia prin determinarea valorii D10 (adic doza absorbit
care produce distrugerea a 90% din populaia iniial).
Radiaii ultraviolete (10-400 nm)
n condiii normale pe Terra nu ajung radiaii cu lungimi mai mici de 287 nm deoarece acestea
sunt reinute de stratul de ozon protector cu o grosime de aproximativ 40 km. Acest lucru are o
semnificaie deosebit deoarece radiaiile ultraviolete cu ntre 254-260 nm au efect letal sau
mutagen asupra celulelor vii.
Radiaiile ultraviolete n funcie de doz i starea microorganismelor au efect letal maxim la
=254 nm i produc degradarea triptofanului cu formarea de compui toxici ce conduc la moartea
fiziologic a celulei expuse.Microorganismele pot s-i refac structura iniial prin
fotoreactivare cnd n prezena luminii sunt activate enzimele care desfac dimerii timinei, sau la
ntuneric cnd celula are capacitatea de a elimina poriunea denaturat. n practic, radiaiile se
pot folosi pentru sterilizarea aerului i pentru obinerea de mutani valoroi performani prin
produii lor de biosintez.
Radiaiile luminoase (1-10 3 nm)
Sunt utile bacteriilor din diviziunea Photobacteria. Microorganismele chimiosintetizante prefer
s se dezvolte n ntuneric. Dintre acestea unele microorganisme pot produce pigmeni cu rol
protector ceea ce le permite dezvoltarea n prezena luminii.
Radiaii infraroii (>10 3 nm)
Acioneaz prin energie caloric i induc transformri ireversibile ale protidelor.
Energia sonic
Bioefectul ultrasunetelor asupra celulei microbiene este specific i complex depinznd de
frecven, intensitate, durat, densitate de celule etc. Ultrasunetele cu frecven mare ( >>1000
KHz ) pot s acioneze producnd distrugerea fizic a celulei datorat fenomenului de cavitate
ultrasonor i efectelor electrice/termice asociate. Datorit frecvenei mari pot apare rupturi la
nivelul structurilor, apar germeni de cavitaie sub forma unor bule mici de gaz care n stadiu de
comprimare rezist la presiuni mari, n faza de expansiune produc implozie determinnd
distrugeri locale.
La frecvene mici se observ efectul de stimulare al ultrasunetelor ca urmare a unor deplasri sau
deformri ale unor organite intracelulare (lizozomi, mitocondrii) i modificri ale proprietilor
plasmalemei cu influen asupra permeabilitii i vitezei de transport a nutrienilor.
Factori mecanici
Dintre operaiile utilizate n tehnici de analiz microbiologic se aplic frecvent centrifugarea i
filtrarea, n scopul separrii de celule din medii lichide.
Centrifugarea
Este folosit pentru separarea biomasei de drojdii din medii de cultur cnd se folosesc viteze de
centrifugare de 4000- 6000 rot/min., iar pentru separarea celulelor bacteriene, viteze de 600012000 rot/min. Se mai aplic lichidelor ce conin un numr redus de celule, n vederea
concentrrii lor n centrifugat i controlul microbiologic.
Filtrarea
Realizeaz reinerea mecanic a celulelor microbiene atunci cnd diametrele porilor materialului
filtrant sunt mai mici dect dimensiunea acestora. Separarea prin filtrare se mai poate realiza prin
adsorbie electrostatic atunci cnd materialul filtrant cu sarcin pozitiv reine bacteriile cu
sarcin negativ. n practica de laborator se folosete sterilizarea prin filtrarea mediilor de cultur
lichide ce conin n compoziie compui termolabili (de exemplu vitamine).
Filtrarea se poate aplica pentru determinarea numrului de bacterii din ap sau alte medii lichide
cnd se face filtrarea unui volum determinat din proba de analizat prin membrane filtrante din
acetat de celuloz, care rein celulele. Dup filtrare, membrana poate servi pentru numrarea
direct a celulelor sau poate fi transferat pe suprafaa unui mediu nutritiv solidificat repartizat n
plac i dup termostatare se numr coloniile dezvoltate.
Agitarea
Se aplic la cultivarea microorganismelor n condiii de laborator pentru obinerea culturilor pe
agitator sau la cultivarea submers n condiii industriale, deoarece asigur un mai bun contact
ntre celule i mediul de nutriie i avantajeaz concomitent aerarea culturii. Rata de agitare la
cultivarea submers n bioreactoare variaz cu volumul de mediu i natura microorganismului
cultivat. Astfel pentru 1-20 m3 viteza de rotaie este de 120-180 rpm, iar la volume de 450
m3poate fi de 60-120 rpm.
Factorii chimici
Substanele chimice cunoscute prezint o mare diversitate de compoziie i se difereniaz n
funcie de efectul pe care l prezint asupra celulelor microbiene i anume:
efect stimulator , benefic n concentraii mici deoarece numeroase substane conin elemente
majore sau minore ce intr n componena compuilor celulari;
efect letal (microbicid) atunci cnd substana, n funcie de doz, conduce la modificri
ireversibile i dau distrugerea fizic a celulei sau inactivarea enzimelor, asociat cu moartea
fiziologic.
efect microbicid (germicid) ce este produs de ctre dezinfectani ce pot aciona, n general,
prin:
denaturarea ireversibil a proteinelor i enzimelor produse de acizi anorganici, baze, sruri;
blocarea gruprilor amino din structura protidelor, aminoacizilor cu formarea de puni
metilenice i inactivarea de enzime aldehida formic;
permeabilizarea nveliurilor celulare, cu pierderea compuilor intracelulari i ptrunderea
substanei toxice n cazul folosirii de spunuri, detergeni, sruri cuaternare de amoniu etc.
spectrul de aciune reflect efectul specific sau generalizat. Astfel pentru conservani
acesta poate fi general (fungistatic) sau specific: levuristatic, bacteriostatic, n timp ce pentru
dezinfectani efectul poate fi: microbicid (general), bactericid, virulicid, fungicid;
favorizat activitatea unui numr restrns, de obicei 1-4 specii care vor produce i alterarea sa
specific.
Produsele alimentare au o compoziie chimic foarte diversificat i un grad de ncrcare cu
microorganisme foarte diferit, ce depinde de acela al materiilor prime i auxiliare, de factorii
extrinseci ce intervin la prelucrare i pstrare.
Dintre factorii intrinseci, dependeni de alimentul care va reprezenta substratul pentru activitatea
microorganismelor (adugate prin culturile starter sau ocazional contaminante), mai importani
sunt:
Structura anatomic
Influeneaz activitatea microbian ca urmare a meninerii la distan a microorganismelor de
nutrieni accesibili. Astfel oul se altereaz greu, deoarece coaja poroas i membrana mpiedic
ptrunderea unor microorganisme. Seminele oleaginoase sau ale cerealelor prezint un nveli
celulozic protector ce nu poate fi degradat dect de microorganisme celulozolitice. Prin absorbia
de ap, acestea sufer mucegirea deoarece mucegaiurile au condiii favorizante. La fructele cu
nveli ceros, greu penetrabil, alterarea intervine n zone unde se produc leziuni mecanice,
nepturi de insecte etc.
Valoarea de pH
Este o proprietate inerent a unor produse naturale ce conin cantiti ridicate de acizi organici
sau dobndesc aciditate prin procese fermentative dirijate (produse conservate prin murare).
Microorganismele se dezvolt n limite largi de pH (ntre 1,5-11). n acest interval
microorganismele acidotolerante drojdii, mucegaiuri, bacterii lactice i acetice prefer pH 2,55,5 i se vor dezvolta n produse acide care pot suferi fermentaia i mucegirea. Bacteriile de
putrefacie care prefer un pH = 7 nu se pot dezvolta n medii acide care sunt astfel protejate.
Aciunea pH-ului asupra creterii se poate observa n mediu, deoarece disponibilitatea unor
nutrieni este modificat de echilibrul ionic. Astfel la pH acid ionii de magneziu formeaz
complexe insolubile, n timp ce la pH bazic sunt complexai ionii de calciu, zinc i ionii ferici,
elemente cu rol de cofactori ai enzimelor microbiene. Valori extreme de pH influeneaz
permeabilitatea membranelor celulare. n mediu acid permeazele cationice sunt saturate de ioni
de H+ care limiteaz sau anuleaz transportul cationilor indispensabili pentru celule; n mediu
alcalin membrana este saturat cu OH - i este mpiedicat transferul de anioni necesari. La
Valoarea de rH
Este dependent de prezena n aliment a substanelor cu caracter oxidant sau reductor.
Alimentele cu potenial de oxidoreducere sczut (rH = 0-12),de exemplu laptele, favorizeaz
dezvoltarea substanelor anaerobe, n timp ce fructele cu rH ridicat (18,5 -28) favorizeaz
dezvoltarea microorganismelor aerobe. Diverse lichide cu valori medii de rH (12-18,5) permit
activitatea fermentativ a drojdiilor, bacteriilor lactice.
domeniul de aw la care creterea are loc este cel mai extins la temperatura optim de cretere;
Dintre relaiile ce se pot stabili ntre diferite grupe de microorganisme mai importante sunt
urmtoarele:
Neutralismul
Corespunde unor relaii de indiferen ntre dou sau mai multe specii de microorganisme atunci
cnd acestea se deosebesc mult prin exigenele nutritive. Foarte puine specii sunt strict neutrale,
de obicei se formeaz asocieri care au caracter temporar sau accidental, reacionnd unele fa de
altele n mod favorabil i sinergic sau dimpotriv, antagonic.
Mutualismul (simbioza)
Reprezint un tip de relaie care permite dezvoltarea simultan pe un substrat comun a unor
specii diferite care exercit una asupra alteia o influen bilateral favorabil. Un exemplu l ofer
bacteriile lactice i drojdiile folosite n culturi mixte la fabricarea produselor lactate acide, la
prepararea maielelor n panificaie. Drojdiile produc vitamine ale grupului B care sunt factori de
cretere pentru bacteriile lactice iar acestea produc acid lactic care le asigur un pH optim pentru
activitatea lor.
Comensalismul (metabioza)
Este caracterizat prin creterea mpreun a dou sau mai multor specii de microorganisme aflate
ntr-o relaie n care una profit de asociere iar cealalt n aparen nici nu profit nici nu este
influenat negativ.
Comensalismul se realizeaz fie prin elaborarea de ctre unul din parteneri a unor substane care
favorizeaz dezvoltarea celorlali, fie prin modificarea mediului care devine mai favorabil pentru
speciile asociate. Se ntlnesc frecvent la pstrarea laptelui, la fermentarea lactic a produselor
vegetale, la fabricarea vinului, a brnzeturilor etc.
Sinergismul
Este o relaie de tip cooperant n care dou sau mai multe specii produc mpreun un efect pe
care n mod izolat nu l pot realiza. De exemplu, putrezirea lemnului este posibil numai prin
asocierea cooperant a mucegaiurilor i a bacteriilor celulozolitice.
Antagonismul
Se manifest sub forma unor corelaii complexe ntre grupe de microorganisme n care una din
specii se comport ca agresor i profit de pe urma asociaiei cu celelalte specii care sunt
prejudiciate. Se consider c nu exist microbi fr antagoniti.
Fenomenul de antagonism microbian poate fi datorat mai multor cauze:
vitez diferit de cretere i multiplicare a speciilor antagonice. Atunci cnd mediul conine
substane accesibile tuturor microorganismelor de obicei predomin bacteriile care au un
timp de generaie mai mic dect cel al fungilor;
aciunea unor substane de metabolism ce pot produce un antagonism nespecific atunci cnd
efectul se exercit asupra tuturor asociaiilor, de exemplu acidul lactic format prin
fermentaie inhib prin reducerea de pH activitatea tuturor bacteriilor de putrefacie, sau un
antagonism specific cnd substana produs (de exemplu, antibiotice) au efect selectiv asupra
unui grup restrns.
Microorganisme patogene
Microorganisme antagonice
Clostridium botulinum
Clostridium perfringens
Staphylococcus
Salmonella
Escherichia coli