Diagnostic in infectia cu

virusuri gripale

Orientare clinica
febra (3-5 zile), mialgie, cefalee, astenie (>2
saptamani), tuse neproductiva, faringita, rinoree.

Gripa nu se diagnosticheaza
clinic!!!
Simptomatologie asemanatoare cu infectii determinate de:

Mycoplasma pneumoniae, adenovirusuri, virusul

respirator sincitial, rhinovirusuri, virusuri paragripale,
si Legionella spp.

Forma clinic

Etiologie viral Etiologie viral

comun
rar

Guturai,
Rhinofaringite

Rhino,
v. gripale,
coronavirusuri Enterovirusuri
(Cox)

LaringoVRS, V.
traheobronsite paragripale

Adeno-, v.
rujeolic

Bronsite

V. gripale

V. paragripale

Pneumonii

V. gripale,
SARS

V. gripei
aviare,
Micoplasme

DIAGNOSTICUL DE GRIPA

ETIOLOGIE
POSIBILA

Produs
Patologic

V GRIPALE
(A, B, C)

SNF (ENF)
ANF
ATB

IZOLARE

OGE
Culturi
celulare

Dg. DIRECT
=detectie
directa

Dg.
INDIRECT
=serologie

DA PCR
si IF

DA studii
epidemiolog
ice

Produse patologice :
a)Spalatura nazo faringiana (SNF) =
Exsudat nazo faringian
Recoltare.
N- tampoane sterile cu coada introduse in cornetul nazal inferior,
secretii de la nivelul peretelui posterior al nazofarinxului.
F - tampon prin cavitatea bucala pentru secretii de pe peretele
lateral/posterior al orofaringelui si din orice arie adiacenta cu
inflamatie, exudat sau ulceratie.
se evita atingerea tamponului de limba, obraji sau buze pentru evitarea
cotaminarii.
Stocare si transport.
optim imediat dupa recoltare (cand nu este posibil: -70 C, cu transport
pe zapada carbonica)
Prelucrare.
tamponul sau secretiile recoltate sunt dispuse intr-un tub steril cu circa
15 ml mediu minim o ora, timp necesar elutiei virusului. centrifugare
la 2500 - 15 minute, la 4 C. Supernatantul este indepartat si
sedimentul este resuspendat in 3-4 ml TFS sau mediu. In final
depozitul de celule reluat in TFS serveste pentru izolare virala sau
pentru efectuarea de frotiuri ce vor fi testate in imunofluorescenta.

Produse patologice :
a) exsudat nazo faringian
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un
speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser fiziologic in
nari cu o seringa atasata la un tub de plastic.

c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie

in conditii speciale de catre personal calificat.

Directii de diagnostic

IZOLARE OGE/ c.c.

DETECTIE RAPIDA RIF / Rt PCR

DIAGNOSTIC SEROLOGIC

Izolare virala
diagnostic de electie

1.-culturi primare de rinichi

de maimuta rhesus.
-linia continua epiteliala de
rinichi de caine
(MDCK).
2. pe OGE- 9-11 zile,
inoculat
intraamniotic
intraalantoidian.

V. GRIPAL ESTE NONCITOPATOGEN!!

HA - hemaglutinina
NA - neuraminidaza
Nucleocapsida helicoidala
ARNss
anvelopa

Tipuri v gripal: A, B, C

transcriptaza

Subtipuri: A(H1N1)
A(H3,N2)
Matrice

Dupa HA si NA
16 tipuri de HA
9 tipuri de NA

Demonstrarea izolarii v.gripale

pe culturi de celule - HEMADSORBTIE

48 ore dupa inocularea

v. gripal se incearca
detectia virusului prin
hemadsorbtie, obisnuit
cu eritrocite de cobai
Hematiile adsorbite
specific rozeteaza la
periferia celulelor
infectate.

DEMONSTRAREA PREZENTEI
VIRUSULUI IN OGE
REACTIA DE HEMAGLUTINARE -RHA

UHA

Etape:
Ag. viral - dilutii binare
suspensie de hematii

Se incubeaza la temperatura camerei - 30 minute

Martorul reactiei contine suspensie hematii
Rol RHA:
Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant
Titrarea antigenului hemaglutinant

IDENTIFICAREA V. GRIPALE
R. HEMAGLUTINO-INHIBARE
RHAI
Etape:

Ag. viral hemaglutinant

Dilutii binare din serurile imune de referinta
cunoscuti)-

60 min la 37C.
Sistem indicator - suspensia de hematii.
Se incubeaza 60 min la temperatura camerei

Reactia de identificare a virusurilor gripale

UHAI

(Ac antivirali

DIAGNOSTIC SEROLOGIC
RHAI = Tulpini de referinta + ser pacient

diagnostic retrospectiv,
recoltarea de probe de ser
pereche
cresteri semnificative (de
peste 4 ori) a titrului Ac
specifici
sau determinarea
rezultatului vaccinarii

OMS - Global Influenza

Surveillance Network
2012-2013 Emisfera de Nord
A / California/7/2009 (H1N1) -like virus;
A / Victoria/361/2011 (H3N2)-like virus;
B / Wisconsin/1/2010-like virus.

Reactia de Imunofluorescenta directa

(RIF)
test rapid, reproductibil, ieftin
detecteaza ANTIGENE VIRALE cu anticorpi marcati
cu fluorocromi
Anticorpi marcati cu

fluoresceina sau rhodamina

ID

PP

Reactia de Imunofluorescenta
(RIF)
Aplicatii DIAGNOSTIC IN
Infectiile herpetice
Infectiile respiratorii (Gripa)
Rabia

Teste moleculare

NAT (nucleic acid tests)

RT PCR
Swine flu real-time PCR kit
Quick Diagnosis of Flu Strains Possible with New
Microchip Test - FluChip,
Inexpensive Test Detects influenza Infections Quickly
and Accurately MChip
FDA Approves New Laboratory Test To Detect Human
Infections With Avian Influenza A/H5 Viruses (