Metal-proteine

METAL-PROTEINE
Metal-protein: termen generic pentru o protein care conine drept
cofactor un ion metalic sau o grupare prostetic.
Proteinele: formate prin condensarea de aminoacizi n lanuri peptidice.

Legtur peptidic: (O=)CNH

Abundena aminoacizilor n proteine:
Cei mai abundeni (32%): leucina, serina, lisina i acidul glutamic
Cei mai puin abundeni (5% mpreun):Cisteina, triptofanul,
metionina.
ntr-o protein, un aminoacid individual se numete reziduu (sau rest).
Interaciunea i aranjamentele reziduurilor de aminoacizi determin forma
proteinelor i contribuie substanial la funciile lor.
Structura proteinelor:
Structura primar: secvenierea aminoacizilor n lanul peptidic
Structura secundar: aranjamentul regulat dat de conformaia
aminoacizilor n regiuni localizate ale lanului polipeptidic, generat de
legturi de hidrogen ntre resturile de aminoacizi.
Alfa helix: spiral spre dreapta (n sensul acelor de ceasornic) n care
fiecare legtur peptidic este trans-planar: legtura HN este n
sus, paralel cu axa spiralei, C=O este n jos. Se stabilesc legturi de
hidrogen ntre resturi de aminoacid din acelai lan peptidic.

Planele plisate beta: lanuri polipeptidice extinse, formate din

secvene antiparalele. Legturile peptidice sunt trans-planare; n
acelai plan exist grupri NH i OC provenite din lanuri
polipeptidice adiacente orientate una spre cealalt, care pot angaja
legturi de hidrogen.
Structura teriar: aranjamentul tridimensional al atomilor ntr-un lan
peptidic, realizat prin interaciuni (de tip ionic, legturi de H) ntre
componentele structurii secundare (sau). Pentru o protein format
dintr-un singur lan polipeptidic structura teriar poate fi aceaai cu
structura secundar, structura teriar fiind cea mai complex posibil.
Structura quaternar: modul de grupare a mai multor lanuri proteice;
exist dou categorii de structuri quaternare: fibroase i globulare.
Proteine fibroase
Formate din lanuri polipeptidice lungi, paralele, compuse din resturi de
aminoacizi, cu repetitivitate regulat.
1

Metal-proteine

Structura secundar: unic (fie elice alfa, fie plan plisat beta); structur
teriar (legturi la anumite intervale ale structurilor secundare) redus
sau absent.
De obicei insolubile, rezistente i/sau eleastice.
Multe au rol structural: colagenul (n esuturi), keratina( pentru pr i
epiderm).
Colagenul (cea mai abundent protein n organismul mamiferelor, 20%
din totalul de proteine din organismul uman):
Stuctura primar: Gly-X-Y-Gly-X-Y.; Gly: glicina (aminoacidul cel
mai mic) X: cel mai frecvent Pro (prolina); Y: cel mai frecvent
hidroxiprolina; aproximativ 1000 resturi de aminoacizi/lan.
Structura secundar: -helix. Spre deosebire de cele mai multe
structuria-helix, nu se formeaz legturi de hidrogen ntre resturi
de aminoacizi din acelai lan.

Structura teriar: Trei lanuri nfurate ntr-o funie strns,

datorit volumului mic a glicinei. Fiecare lan: spiral spre
dreapta; nfsurarea celor trei lanuri: spre stnga. Spre interiorul
spiralei triple este plasat ntotdeauna un rest Gly (cel mai puin
voluminos). Pentru fiecare triplet GlyXY se formeaz legturi
de hidrogen ntre H amidic (HN) al unui rest glicin dintr-un lan i
atomul de oxigen carbonilic (O=C) al unui rest glicin dintr-un lan
adiacent. Se pot forma legturi de H i cu participarea gruprilor
OH din hidroxiprolin i a moleculelor de ap.

Proteine globulare
Form sferic, globular, generat de o structur teriar complex i
adesea de o structur quaternar.
De obicei solubile:
Rezidurile polare orientate spre exteriorul structurii globulare
Rezidurile hidrofobe spre interior
Gruprile prostetice: n buzunare.
Rol n procesele metabolice: toate enzimele i proteinele cu rol de
regulator sunt globulare.
Cofactor: o specie chimic neproteic legat la o protein, necesar
pentru manifestarea activitii biologice a proteinei. Cofactorii pot fi
organici sau anorganici.
2

Metal-proteine

Cofactori anorganici:
Ioni metalici
Ioni nemetalici (S2-, O2-)
Clusteri Fe-S
Cofactori organici: molecule organice mici care se pot lega la enzime i
pot s participe la reaciile acestora (de exemplu porfirina).
Grupri prostetice: cofactori constituii din molecule organice legate la
ioni metalici (de exemplu hemul: Fe(II) legat la porfirin este grupare
prostetic pentru hemoglobin, mioglobin i multe hem-enzime).

Hem a: C49H56O6N4Fe;

Hem b: C34H32O4N4Fe;

Hem c: C34H36O4N4S2Fe

Se evalueaz c aproximativ jumtate dintre proteine i pot ndeplini

funciile biologice numai cnd sunt legate la ioni metalici.
Coordinarea ionilor metalici la proteine: se realizeaz prin atomi de N,
O S, aparinnd:
resturilor de aminoacizi din lanul polipetidic al proteinelor (atomii donori
sunt generai prin deprotonarea gruprilor amidice i carboxilice);
substituenilor la catenele resturilor de aminoacizi (imidazolul
substituent n histidin, tiolat substituent n cistein, carboxilat
substituent n aciizii aspartic i glutamic)
Funciile metal-proteinelor n celulel vii:
Activitate enzimatic
Transport i stocare (de oxigen sau ioni metalici)
Transfer de electroni (reacii redox)
Traductori de semnal

METAL-PROTEINE TRANSPORTATOARE I DE STOCARE A

OXIGENULUI
Animalele de talie mare (inclusive omul) au nevoie de un continuu aport
de oxigen, n cantitate mare, pentru conversia aerobic a alimentelor (n
special lipide i carbohidrai) n forme disponibile de energie.
Chiar n stare de repaus, un adult consum echivalentul a 250 ml oxigen
pe minut, pentru a furniza energie tuturor esuturilor i organelor. Nevoia
de oxigen a organismului cretre puternic n timpul efortului fizic i a altor
activiti solicitatnte.
3

Metal-proteine

Transportul oxigenului n organismele vii reclam un sistem circulator i

un transportor; cel din urm este necesar pentru c oxigenul, molecul
nepolar, este slab solubil n fluidele biologice (solubilitatea n snge: 3 ml
O2/L).
Oxigenul este transportat prin snge de la plmni ctre esuturile i
organele consumatoare. Doar 15% din oxigenul transportat se dizolv
direct n plasma sangvin, majoritatea este transportat printr-un
mecanism mai sofisticat care utilizeaz complexul metalic denumit hem.
Principalul transportator de oxigen din organismul uman: hemogobina
Principala protein de stocare a oxigenului: mioglobina
Alte proteine transportoare de oxigen:
Hemeritrina
Transportor de O2 n organisme marine nevertebrate.
Non-hem Fe-protein n care oxigenul este legat la un centru Fe II2
(dinuclear, cu 2 puni COO- i o punte OH- ntre cei doi FeII). Atomii de Fe
sunt legai la protein prin dou puni carboxilat din resturi aspartat i
glutamat i la cinci resturi histidin; unul dintre atomii de Fe este
hexacoordinat, cellalt pentacoordinat; O2 este ataat la hermeritrin ca
anion peroxid, O22, legat de puntea OH, ataare nsoit de o oxidarea
(cu 2 e) a centrului metalic dinuclear:

Oxidare: FeII2 2e- FeIII2

Reducere: O2 + 2e- O22-

[FeII(-OH)(-COO)2FeII]+ + O2 [FeIII(-OH) (- O22)(-COO)2FeIII]+

Hemocianina:
Cu-protein; transport oxigenul n sngele molutelor i unor
cefalopode, paianjeni, viermi (cu (snge albastru); al doilea transportor
biologic de O2;
Centrele metalice: 2 Cu(I); O2 se fixeaz la cei 2 Cu(I) ca grupare
peroxid, O22-, cu oxidarea Cu(I) la Cu(II): 2Cu(I) 2e 2Cu(II); O2 + 2e
O22-).
Structura poziiei active n oxihemocianin

Metal-proteine

{[Cu(NHis)3]2}2+ + O2 {O2-[Cu(NHis)3]2}2+
n oxi-hemocianin cei doi atomi de cupru sunt mai apropiai ntre ei, deplasndu-se din planul
trigonal n centrul cria se aflau n dezoxi-hemocianin, geometria de nconjurare a fiecrui centru
Cu n oxi-hemocianin fiind de bipiramid trigonal.

METAL-PROTEINE

TRANSPORTOARE
PROCESE DE OXIDO-REDUCERE)

DE

ELECTRONI

(IMPLICATE

Citochromi
Fe-proteine, majoritatea: hem-proteine (grupare prostetic: hem);
gruparea hem sufer oxidarea reversibil a Fe(II) la Fe(III). Oxigenul
transportat la celule este utilizat pentru oxidarea reversibil a citocromilor
ca surs de energie n mitocondrii (organele din citoplasm, din celulele
aerobice, productoare de energie, coninnd material genetic i multe
enzime).
Citocromul a (Cyt a): grupare prostetic: hem a; citocromul b (Cyt b):
grupare prostetic: hem b; transport ait oxigenul ct i electroni; au
poteniale redox diferite datorit substituenilor diferii la porfirin.
Citocromul c: hem-protein asociat cu membrana intern a
mitocondriilor; spre deosebire de ceilali citocromi este foarte solubil n
ap (100 g/L) i poate suferi oxidare i reducere (cu 1 electron) dar nu
poate fixa oxigenul. Este un component esenial al lanului de transport de
electroni. n organismul uman este codificat CYCS.
Citocromul P450 enzim care ndeplinete funcia de a insera, prin
oxidare, un atom de oxigen ntr-o legtur CH.
Oxidare: RH + 2H+ + O2 + 2e- ROH + H2O;
Reducere: Fe(III)
Fe(II)

Poziia redox activ n

citocromul c

Citocromul P450

Cisteina (Cys)

Rubredoxine i feredoxine
5

Metal-proteine

Non-hem proteine (Fe-S proteine), transportoare de electroni n bacterii

anaerobe;
n rubredoxin fierul este legat la 4 atomi de S din 4 resturi de cistein, pri ale unei proteine
formate din aproximativ 55 de resturi de aminoacizi. Cei 4 atomi de sulf formeaz n jurul Fe o
nconjurare tetraedric deformat (FeS4), cu o legtur Fe-S mai scurt dect celelalte trei.
Transportul de electroni se realizeaz prin modificarea strilor de oxidare ale Fe ntre +II i +III; n
ambele stri de oxidare fierul este high spin, ceea ce minimizeaz modificrile structurale n
cursul reaciilor redox.

Poziia activ n rubedoxin

Feredoxine: importante n fotosintez, Fe(III) este redus la Fe(II), ambii high spin; exist mai
multe tipuri, n funcie de raportul Fe/S2- n unitatea structural: [Fe2S2]; [Fe4S4]; [Fe8S8]:

Plastocianina
Una dintre componentele categoriei de proteine albastre cu cupru.
Transportor de electroni n plante (spanac), alge, bacterii. nconjurarea
cuprului(II) este piramidal trigonal deformat (CuN 2S2); baza trigonal a
piramidei este format din 2 atomi N din 2 resturi histidin i un atom de S(Cys) dintr-un rest
cistein; pozii axial a piramidei este ocupat de un atom S(Met) dintr-un rest metionin. Legtura
Cu-S(Cys) este mai scurt dect legtura Cu-S(Met). Reaciile redox se petrec cu implicarea unuia
dintre resturile His (His 1), care se deprotoneaz (His H H+ + His), legtura Cu-His se rupe iar
nconjurarea Cu devine trigonal plan. Culoarea albastr este datorat transferului de sarcin CuS(Cys).

Coordinarea CuII n plastocianin; orbitali implicai n transferul de sracin Cu (dx 2-y2) S(ab)

METAL-PROTEINE

IMPLICATE

TRANSPORTUL

STOCAREA

IONILOR METALICI
Proteine implicate n transportul i stocarea fierului
Feritina: o protein intracelular care stocheaz Fe(II), astfel nct poate

fi folosit la nevoie. Principalul organ care stocheaz fierul: ficatul.

Transferina: Fe(III)-glicoprotein din plasm (format din 679 de resturi

de aminoacizi) care controleaz nivelul Fe n fluidele biologice;

transport Fe, prin intermediul sngelui, la ficat, splin i mduva
6

Metal-proteine

osoas; legarea Fe se realizeaz prin resturile de aminoacizi: 2 tirozin, 1

acid aspartic, 1 histidin. Organismul uman nu posed un mecanism de
excreie pentru transferin, ceea ce poate cauza diferite boli asociate cu
excesul de Fe, de exemplu -talasemia.
Proteine implicate n transportul i stocarea cuprului
Ceruloplasmina principalul transportator de Cu n organismul uman
(transport aproximativ 70% din cuprul total n plasma uman, 15% fiind
transportat de albumin, restul fiind localizat n macroglobuline). Prezint
totodat i activitate (enzimatic) de oxidaz, asociat cu oxidare Fe(II) la
Fe(III), asistnd transferul fierului prin plasm de ctre transferin, care
transport doar Fe(III). Este sintetizat n ficat. Este o 2-globulin, poate
lega 6Cu/molecul. Conine n molecul dou tipuri de clusteri trinucleari
{Cu}3, de exemplu [Cu3(OH)(-OH)His)8].

METAL-ENZIME
Cea mai larg clas de metal-proteine (se cunosc mai mult de 3.000 de
metal-enzime).
Accelereaz viteza a numeroase reacii biologice care se petrec n
celule (aproape fiecare reacie biochimic este facilitat de o enzim).
Sunt n general foarte specifice (interacioneaz cu un anumit substrat).
Se denumesc de obicei dup reacia pe care o catalizeaz + sufixul az.
Au drept trstur comun caracterul labil al legturii metal-protein i
faptul c geometria de coordinare a ionului metalic (poziia activ) este
crucial pentru activitatea lor.
Ionul metalic este situat cel mai adesea ntr-un buzunar a crui form
se potrivete cu substratul. Ionul metalic catalizeaz astfel reacii greu
de realizat n chimia organic.
Anhidraza carbonic (zinc-enzim)
Catalizeaz disocierea acidului carbonic (prea lent n respiraia animal)
i hidroliza anumitor esteri.
Poziia activ a anhidrazei carbonice: Ionul Zn(II) este coordinat la:
Trei resturi histidin, prin ciclurile imidazol
O molecul H2O (polarizat de ionul Zn2+, genernd anion hidroxil.
Geometria de coordinare este aproximativ tetraedric.

Metal-proteine

Funcionare:
Reacia CO2 + H2O H2CO3, foarte lent n absena catalizatorilor, la pH
fiziologic, este rapid n prezena anionului hidroxil: CO2 + OH- HCO3O reacie similar este practic instantanee n prezena anhidrazei
carbonice:
are loc un atac nucleofil rapid al anionului hidroxil la CO2;
ciclul catalitic produce anion bicarbonat i protoni, astfel deplasnd
echilibrul reaciei H2CO3 HCO3- + H+ n sensul disocierii acidului
carbonic la valori fiziologice ale pH-ului.
Vitamina B12
Vitamina B12 (cianocobalamina) este singura biomolecul esenial
cunoscut cu o legtur M-C stabil (compus organometalic).
Ionul metalic este Co(III) iar atomul C de care se leag aparine unui ion
CN-; coordinarea Co(III): CoN5C; cei 5N provin: 4 dintr-un ciclu corin
(macrociclu asemntor porfirinei), al 5-lea dintr-un grup imidazol
(dimetilbenzimidazol) legat la ciclul corinic. Fra CN - se numere
cobalamin.
Vitamina B12 catalizeaz transferul gruprilor metil ntre dou molecule,
formnd un intermediar n care anionul CN - este substituit de o grupare
CH3.
n coenzima B12, al 6-lea ligand (introdus n locul anionului CN -) este un
grup adenozin. Este utilizat n tratarea anemiei pernicioase.

ciclu porfirin

ciclu corin

Vitamina B12
R: CN-, CH3, OH-, 5adenozina

Nitrogenaza (enzim cu rol de fixare a azotului)

Fixarea azotului atmosferic este un proces care necesit aport energetic
intens, ntruct implic ruperea triplei legturi NN.
Enzima nitrogenaz este una dintre puinele enzime care poate cataliza
acest proces. Se gsete n anumite bacterii. Este o Mo-Fe-S-protein.
n activitatea nitrogenazei sunt implicate trei componente:
Centrul metalic activ, implicat n fixarea N2: Mo;
Un transportor al electronilor implicai n reducerea azotului la NH 3: clusteri Fe-S;

Metal-proteine

O surs de energie abundent asigurat de relaia simbiotic ntre bacterii i planta-gazd,

adesea o legum. Relaia este simbiotic pentru c planta furnizeaz energia prin fotosintez
(care implic clorofila i ATP), beneficiind n schimb de fixarea azotului.
Reacia poate fi ilustrat simbolic astfel:
N2 +16 Mg(ATP) + 8e- 2NH3 + 16 Mg(ADP) + 16 Pi + H2
unde Pi este o grupare fosfat.
Enzima const din uniti Fe-S-protein (doi clusteri cubici Fe4S4 legai prin puni S), responsabile
pentru transportul de electroni ) i o Mo-Fe-protein (responsabil cu fixarea N 2), care pot fi izolate i
separate. Proteina Mo-Fe conine dou tipuri de clusteri Fe-S, dintre care unul, MoFe7S8, numit
cofactor FeMoco, joac rolul de poziie activ a enzimei, capabil s lege N 2 (la atomul de Mo), dar
incapabil s realizeze reducerea acestuia.

Structura cofactorului FeMoco (Mo: roz, Fe: verde, S: galben); atomul terminal de Fe este coordinat
la un rest cistein (Cys) iar Mo este coordinat la un rest histidin (His) i la un ligand homocitrat.

Superoxid dismutaza
Anionul superoxid, O2-, este generat n organismul uman prin reducerea
oxigenului molecular; este un agent oxidant puternic i, avnd un electron
nemperechiat, se comport ca un radical liber este foarte nociv: este
necesar s fie distrus nainte de a cauza alterri ale celulelor.
Enzimele superoxid dismutaze (SOD) ndeplinesc foarte eficient aceast
funcie; n soluii neutre, anionul superoxid disproporioneaz la oxigen
molecular i ap oxigenat:
2O2 + 2H+ O2 + H2O2
Enzimele SOD cresc viteza acestei reacii pn la limita de difuzie. Cheia
funcionrii acestor enzime o reprezint un ion metalic cu stare de oxidare
variabil, care poate funciona att ca agent oxidant ct i ca agent
reductor:
M(n+1)+SOD + O2 Mn+SOD + O2
(M(n+1)+ + 1e Mn+;
{MSOD}ox
{MSOD}red

O2- 1e- O2)

Mn+SOD + O2 + 2H+ M(n+1)+SOD + H2O2 (M(n+1)+- 1e- M(n+1)+; O2 + 1e O22-)

{MSOD}red
{MSOD}ox
M: Cu (n =1); Mn (n = 2); Fe (n = 2); Ni (n =2)
n Cu-Zn-SOD uman din eritrocite (celule roii), metalul activ este cuprul (Cu 2+ sau Cu+) coordinat
tetraedric de ctre patru resturi histidin. Enzima conine i ioni de zinc.
n Mn-SOD, gsit n mitocondriile umane, Mn este coordinat de 3 resturi histidin, un rest aspartat
i o molecul de ap sau un anion hidroxil, n funcie de starea de oxidare a Mn (II sau III).
Alte SOD pot conine Fe sau Ni. Un interes deosebit prezint enzima Ni-SOD, care implic Ni(II) i
Ni(III):
geometria de coordinare a Ni(II) este plan-ptrat, NC = 4, Ni IIS2N2 (2 atomi donor S din 2 resturi
Cys i 2 atomi donor N din resturi ale lanului proteic, His i Cys, un Cys: bidentat);

geometria de coordinare aa Ni(III) este piramid ptratic, NC = 5, Ni IIIS2N3, cu un ligand axial

N din restul His (care, n forma oxidat a Ni-SOD, funcioneaz ca ligand bidentat).

Metal-proteine

METAL-PROTEINE

TRADUCTOARE DE SEMNAL

Calmodulina (CaM) (CALcium-MODULated proteIN) este o Ca-protein

care funcioneaz ca senzor i traductor multifuncional de semnal pentru
ionii de calciu, coordinnd ionii de calciu i modificnd interaciunea
acestora cu numeroase molecule int, care nu se pot lega ele-nsele la
ionii de calciu.
Este o protein de mici dimensiuni (148 resturi de aminoacizi) care conine
patru subuniti structurale formate fiecare din cte dou elicii alfa
conectate ntre ele.
Fiecare subunitate poate lega un ion Ca 2+. Ionii de calciu au o nconjurare
de bipiramid pentagonal (NC 7), realizate exclusiv de grupri carboxilat
furnizate resturi de acid glutamic i aspartic.
CaM mediaz multe procese cum sunt inflamrile, metabolismul,
contracia muscular, micarea intracelular, memoria pe termen scurt i
pe termen lung; se manifest n multe tipuri de celule, incluznd
citoplasma.
Cei 20 de aminoacizi din structura proteinelor:
Alanina Ala

Arginina Arg

Asparagina - Asn Acid aspartic Asp

Cysteina Cys

Glutamina - Gln

Acid glutamic Glu

Glicina Gly

Histidina - His

Izoleucina Ile

Leucina - Leu

Lisina - Lys

10

Metal-proteine

Methionina Met

Fenilalanina Phe

Prolina Pro

Serina Ser

Treonina - Thr

Triptofanul - Trp

Tirosina - Tyr

Valina - Val

11

Metal-proteine

Vitamina B12, coenzima B12

12