LP 10 Determinarea glucozei in saliva si sange.

/ 2 ore

DOZAREA ENZIMATIC A GLUCOZEI

Glucoza serica
Glucoza este cel mai important monozaharid din sange. Rezulta din digestia
carbohidratilor si din conversia hepatica a glicogenului in glucoza.
Glucoza este un furnizor indispensabil de energie care sustine activitatea celulara. Cei
doi hormoni care regleaza in mod direct nivelul glucozei in sange sunt glucagonul si
insulina.
Glucagonul accelereaza conversia glicogenului in glucoza si determina astfel cresterea
glicemiei.
Insulina creste permeabilitatea membranelor celulare la glucoza, transporta glucoza in
celule (pentru metabolism), stimuleaza formarea glicogenului si reduce concentratia
glucozei din sange.
Alti hormoni care detin un rol important in metabolismul glucozei sunt: ACTH-ul,
glucocorticoizii, adrenalina, tiroxina.
Dozarea glucozei n ser prin metoda enzimatic
Principiul metodei
n prezena glucozoxidazei glucoza este oxidat la acid gluconic. Apa oxigenat
rezultat din reacie reacioneaz cu indicatorul Trinder (fenol si 4-aminoantipirina) n
prezena peroxidazei rezultnd un compus colorat in rosu fotocolorimetrabil.
Cantitatea de glucoz din prob este direct proporional cu intensitatea coloratiei
obtinute.
glucozoxidaz
Glucoz + O2 + H2O acid gluconic + H2O2
peroxidaz
H2O2 + fenol + 4-amino-antipirina chinonimina (rosu) + H2O

Reactivi:
1. Reactiv 1 conine: tampon TRIS-Cl sau Srensen 90 mmoli/l i fenol 0,3
mmoli/l (pH = 7,5 ).
2. Reactiv 2 conine: glucozoxidaz 10000 U/l, peroxidaz 1000 U/l i
4-aminoantipirin 2,6 mmoli/l
PREPARAREA REACTIVULUI DE LUCRU:
R1 se amesteca cu R2 in proportia consemnata de producator
3. Reactiv 3 conine: standard de glucoz 5,56 mmoli/l (1g/l sau 100mg %)
Probe: ser nehemolizat, plasm heparinat, snge deproteinizat, LCR
Mod de lucru: n trei eprubete (prob, standard i martor) se pipeteaz:
REACTIVI
Prob
Standard
Ap distilat
Reactiv de glucoz
(R1+R2)

ml
ml
ml

P
0,01

0,01
1

0,01
1

ml

Se agit i se incubeaz eprubetele 10 min. la 370C, apoi se citesc extinciile

probei i standardului la = 505 nm fa de martor.
Calcul: mg glucoz/100 ml snge = (EP / Es) x C standard
Valori normale
Glicemia 70 100 mg/100 ml snge
Modificri patologice ale glicemiei
Hiperglicemia (in diabet, glicemie > 126 mg/dl)
Clinic, hiperglicemia se asociaz diabetului zaharat.
Diabetul zaharat este de dou tipuri:
IDDM = insulin dependent diabetes mellitus
NIDDM = non-insulin dependent diabetes mellitus
Dar si in:
boala Cushing, acromegalie/gigantism, adenom hipofizar (secretor de hormon de
crestere), hemocromatoza, pancreatita acuta/cronica, neoplasm de pancreas,
glucagonom, afectiuni renale cronice, boala hepatica avansata, deficienta de
vitamina B1 (encefalopatia Wernicke), stres acut emotional sau fizic (infarct
miocardic, AVC, convulsii)

Hipoglicemia (glicemie < 50 ml/dl asociat cu manifestri clinice) poate fi asociat

cu:
- tumori hipersecretante de insulin (insulinom pancreatic)
Dar si in:
tumori extrapancreatice (ex. hepatom), boala Addison, malabsorbtie, necroza
hepatica (hepatita, intoxicatii), prematuri, nou-nascuti din mame diabetice,
deficiente enzimatice (ex. galactozemie), supradozaj insulinic, hipoglicemie
reactiva (hiperinsulinism indus alimentar, tulburari endocrine), hipoglicemie
postprandiala (dupa interventii chirurgicale gastrointestinale, intoleranta ereditara la
fructoza, galactozemie)

Testarea glicemiei prin intepare la diabetici ar putea deveni istorie!

25 FEBRUARIE 2013

Cercettorii au creat un nou tip de senzor biologic care poate detecta

concentraiile mici de glucoz din saliv, lacrimi i urin i care ar putea fi
produs la un cost sczut, deoarece nu este nevoie de muli pai de procesare
pentru fabricarea acestuia.
Este o metod inerent neinvaziv pentru a estima coninutul de glucoz din
snge, spune Jonathan Claussen, un fost doctorand la Universitatea Purdue,
acum cercettor tiinific la Laboratorul Naval de Cercetare din Statele Unite.
Deoarece poate detecta glucoza din saliv i din lacrimi, este o platform care
ar putea ajuta ntr-un final la eliminarea sau reducerea frecvenei nepturilor
pentru testarea glicemiei la diabetici. Acum i demonstrm funcionalitatea.
Claussen i doctorandul Anurag Kumar de la Universitatea Purdue au condus
proiectul, lucrnd cu Timothy Fisher, profesor de inginerie mecanic la
Universitatea Purdue, cu D. Marshall Porterfield, profesor de inginerie agricol
i biologic i ali cercettori de la Centrul de Nanotehnologie Birck al
universitii.
Rezultatele sunt detaliate ntr-un articol de cercetare publicat n
revista Advanced Functional Materials.
Majoritatea senzorilor msoar n mod tipic glucoza din snge, spune
Claussen. Alte rezultate de cercetare nu permit detectarea glucozei n lacrimi i
n saliv. Ce este unic n ceea ce facem este c putem analiza toate cele patru
seruri umane: saliva, sngele, lacrimile i urina. i aceast posibilitate nu a fost
demonstrat nainte.