Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori

RED.:
DATA:

(Chimie farmaceutic - II)

01
06.07.2009

Pag. 1 / 18

Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu

FACULTATEA FARMACIE
CATEDRA CHIMIE FARMACEUTIC I TOXICOLOGIC

Aprobat la edina catedrei

Proces verbal __ din __
ef de catedr, d.h.f., profesor
universitar
_____________ Vladimir Valica

Substane medicamentoase, derivai de tetracicline i

nitrofenilalchilamine
Indicaii metodice pentru studenii anului III
Autori: Livia Uncu, Vladimir Valica, Elena Donici, Ana Podgorni

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori

RED.:
DATA:

(Chimie farmaceutic - II)

01
06.07.2009

Pag. 2 / 18

CHIINU 2015
INTRODUCERE
Aceast tem include medicamente din grupul tetraciclinelor i nitrofenilalchilaminelor.
ncepnd studierea temei, studenii se familiarizeaz cu unele particulariti de analiz a
medicamentelor studiate (determinarea a diferitor indici fizico-chimici, analiza grupelor
funcionale specifice, metode fizico-chimice de analiz i altele).
Scopul: A determina calitatea preparatelor medicamentoase derivai ai tetraciclinelor i
nitrofenilalchilaminelor n corespundere cu structura lor chimic, care le
determin metodele de obinere, prevederile de calitate i condiiile de
conservare.
1.
2.
3.
4.
5.

Scopuri determinate
De a nsui caracteristica comparativ a proprietilor fizice i fizico-chimice a substanelor
medicamentoase studiate.
De a acumula deprinderi n efectuarea reaciilor generale i particulare de identificare a
substanelor medicamentoase studiate.
Reieind din proprietile fizice i chimice ale preparatelor medicamentoase studiate, a putea
determina impuritile i argumenta prezena lor.
A putea efectua dozarea preparatelor medicamentoase n corespundere cu cerinele DAN.
A putea stabili condiiile de conservare a preparatelor medicamentoase n dependen de
structura lor chimic i proprieti.
Coninutul lucrrii
Pregtirea teoretic pentru ndeplinirea scopurilor determinare.
Lucrul practic al studenilor.
Recapitulare.
MATERIAL INFORMATIV
Caracteristica general a antibioticelor

Antibioticele sunt substane care introduse n organism exercit efecte toxice fa de

microorganismele bacteriene.
Clasificarea antibioticelor:
1. Clasificarea chimic:
Betalactamide (heterociclice)peniciline, cefalosporine;
Fosfonai fosfomicina;
Lincosamide lincomicina, clindamicina;
Macrolide eritromicina, oleandomicina, azitromicina;
False macrolide rifampicine;
Polipeptide polimixine, bacitracina;
Glicopeptide vancomicina, teicoplanina;
2

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 3 / 18

Aminoglicozide streptomicine, neomicine, canamicine, gentamicine;

Tetracicline (aliciclice)
Arilalchilice (aromatice) fenicoli, cloramfenicol;
Diverse: fusidanine, cumarine, sinergistine, ciclotialidine, oxazolidinone, chinolone etc.

2. Dup tipurile de activitate antibacterian:

bactericide, omoar germenii; sunt indicate n infecii grave. Dezavantajul lor este c produc
efecte toxice n momentul n care mor germenii. Exemplu: peniciline, cefalosporine,
aminoglicozide.
bacteriostatice, inhib multiplicarea germenilor; sunt indicate n cazul infeciilor uoare.
Exemplu: tetraciclina, eritromicina, cloramfenicol.
3. Dup spectru de activitate al antibioticelor:
Totalitatea microorganismelor sensibile la un antibiotic sau chimioterapic reprezint spectrul
antimicrobian al acestuia.
Antibiotice cu spectru ngust
Antibiotice cu spectru larg
Antibiotice cu spectru ultralarg
4. Dup mecanismul de aciune:
la nivelul peretelui bacterian peniciline, cefalosporine, vancomicina, bacitracina, cicloserina;
la nivelul membranei citoplasmatice vancomicina, polimixine, amfotericina B, nistatina;
la nivelul ribozomilor sau nucleului aminoglicozidele, tetraciclinele, cloramfenicolul.
Rezistena microbian la antibiotice
Mecanismele biochimice de instalare a rezistenei la antibiotice:
- elaboreaz enzime specifice pentru un anumit antibiotic. Exemplu: betalactamazele,penicilaza,
cefalosporinaza, acetilaza care acetileaza cloramfenicolul, fosforilaza;
- scderea permeabilitii peretelui microbian fa de antibiotic;
- modificarea configuraiei receptorilor sau afinitii acestuia pentru antibiotic;
- elaborarea unui antagonist endogen;
- pompare n exterior a antibioticului.
Rezistena intrisec (natural) este determinat de:
- asimilarea sczut a antibioticului prin porine n interiorul celulei (impermeabilitatea celular);
- sisteme de eflux. Aceste bacterii au virulen joas, dar rezistena lor multipl le permite s
persiste n mediul spitalicesc i s cauzeze infecii nosocomiale (ex Ps. aeruginosa).
Rezistena dobndit este determinat de:
- mutaiile ce afecteaz gene de pe cromozomii bacterieni sau mutaiilor n gene mobile
dobndite. Mutaiile implic de obicei tergerea, substituirea sau adiia uneia sau mai multor
perechi de baze cauznd substituirea unuia sau ctorva aminoacizi dintr-un peptid esenial.
Rezistena transferabil
- conjugare (pasaj intercelular al plasmidelor sau transpozonilor) cea mai comun metod de
transfer a rezistenei la bacteriile importante clinic;
- transducie (transfer de ADN prin bacteriofagi);
- transformare (asimilarea de ADN);
3

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 4 / 18

Metode de analiz ale antibioticelor

Dozarea:
Metode biologice:
Determinarea activitii microbiologice a antibioticelor prin metoda difuzimetric se bazeaz
pe compararea zonelor de inhibiie ale creterii unui microorganism-test, produse de concentraii
cunoscute dintr-un antibiotic-standard, cu zonele de inhibiie produse de concentraii presupuse
egale ale antibioticului de analizat;
Determinarea activitii microbiologice a antibioticelor prin metoda turbidimetric se
bazeaz pe msurarea concentraiei (la fotocolorimetru sau turbidimetru) a celulelor de
microorganism-test care formeaz o densitate optic (tulbureal) n rezultatul creterii lor n
prezena unei cantiti minime de antibiotic.
Metode fizico-chimice:
Spectrofotometria (UV, VIS, IR)
Fotocolorimetria
Fluorimetria
Cromatografia
Uniti de aciune antibacterian
1 UA antibacterian este cantitatea minim de antibiotic, care manifest aciune bacteriostatic
sau bactericid asupra coloniei standard de test- microorganism ntr-un anumit volum al
mediului de cultur.
Aciunea biologic se msoar n UA, care se conin n 1 ml de soluie sau 1 mg de substan.
Substane medicamentoase, derivai de tetracicline
Tetraciclinele prezint derivai ai naftacenei parial hidratat, compus alctuit din patru
carbocicle hexagonale condensate binar.

Naftacen (tetracen)
Tetarciclinele sunt compui polifuncionali. Ei conin hidroxil fenolic (poziia 10),
hidroxili enolici (3 i 12), grupa dimetilaminic (poziia 4), gruparea carboxamid (poziia 2),
gruparea metilic (poziia 6), hidroxili alcoolici (poziia 6, 12a la tetraciclin), pot fi i alte
grupri la derivaii corespunztori.
Tabelul 1
Substanele medicamentoase, derivai ai tetraciclinelor
Denumirea romna, latin i chimic, formula de structur
Descrierea. Solubilitatea

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

Clorhidrat de tetraciclin
Tetraciclini hydrochloridum
* HCl

OH

OH

OH

NH2

OH

DATA:

01
06.07.2009

Pag. 5 / 18

Pulbere galben cristalin, cu gust

amar, fr miros.
Solubil n ap 1:10 i 1:100 n
alcool.
20D -239 - -2580, =2,0-2,8
r = 480,9

(CH3)2

CH3 OH

RED.:

Clorhidrat
de 4-dimetilamino-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahidro3,6,10,12,12a-pentoxi-6-metil-1,11-dicetonaftacen-2carboxamid
Clorhidrat de oxitetraciclin
Oxytetraciclini hidrochloridum
H3C

OH

OH

OH
C
OH

OH
OH O

Pulbere galben, cristalin, fr

miros, cu gust amar.
Uor solubil n ap (1:3), greu n
alcool.
20D -118 - -2000, =2,3-2,9
r = 496,9

(CH3)2
. HCl
NH2

Clorhidrat de 2-dimetilamino-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-hidroxi6-metil-1,11-dicetonaftacen-2-carboxamid
Clorhidrat de doxiciclin
Doxyciclini hydrochloridu
CH3

OH

(CH3)2
OH
C

OH

OH

OH
O

Pulbere galben, cristalin, fr

miros, cu gust amar.
ncet solubil n 3 pri de ap, n
metanol, practic insolubil n eter i
cloroform. Se dizolv n soluii de
hidroxizi i carbonai alcalini, n
care se inactiveaz n timp.
r = 512,9

. HCl
NH2

Clorhidrat de 6-dezoxi-5-oxitetraciclin
Metode de obinere ale tetraciclinelor
n industria farmaceutic de antibiotice, tetraciclinele se obin prin metoda de biosintez
n profunzime, n fermentatoare de mare capacitate, pe medii de cultur speciale, aseptice.
Mediile de cultur conin substane care constituie surse de carbon (amidon, extract de porumb,
glucoz, uleiuri vegetale), surse de azot (aminoacizi, cazein, proteine, uree, fin de soia), sruri
minerale (sulfai i fosfai de potasiu, calciu, magneziu , fer, cupru). Pentru fiecare antibiotic n
mediul de cultur se mai adaug factori determinani specifici: ioni de clorur pentru
clortetraciclina, inhibitori de clorurare pentru tetracicline. Durata procesului de fermentaie este
4-6 zile, temperatura 26-280C, pH = 4-6. Dup filtrarea prealabil antibioticul din mediul de
fermentaie se izoleaz prin procedeele de extracie, absorbie sau precipitare.
Proprietile chimice i identificarea tetraciclinelor
5

N
OH
OH
O

OH

CONH
Catedra
Chimie
farmaceutic i toxicologic
2

CONH2

RED.:

OH
O

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori

DATA:

(Chimie farmaceutic - II)

01
06.07.2009

Pag. 6 / 18

Tetraciclinele sunt compui amfoteri. Grupa dimetilaminic posed proprieti bazice i

de aceea tetraciclinele formeaz sruri cu acizii organici i anorganici (srurile sunt instabile,
uor hidrolizeaz). Pe baza hidroxizilor enolici i fenolic ei posed proprieti acide i pot forma
sruri solubile cu metalele alcaline.
O

N
ONa
C NH2
OH

NaOH

HCl

OH

Cl

C NH2

OH
C

OH

NH2

OH

Posednd structur aliciclic a inelelor A, B i C i a hidroxilului fenolic, moleculele

tetraciclinelor sunt instabile la aciunea bazelor, carbonailor, metalelor alcaline, acizilor minerali
puternici (pH=2) a luminii i umiditii.
n mediul slab alcalin i la temperatura mai mare de 300C tetraciclinele se supun
procesului de epimerizare: inversarea configuraiei funciei dimetilaminice la C4 cu formarea
epitetraciclinelor, lipsite de activitate antibiotic.
N
OH

CONH2

OH
O

OH
O

Tetraciclin

OH
CONH2

Epitetraciclin

n mediul alcalin tetraciclinele se descompun n izotetracicline, inactivndu-se complet.

Aceast transformare este nsoit de intensificarea culorii galbene, proprietate care poate fi
folosit pentru identificarea tetraciclinelor (reacie de grup).
H3C
N

OH

H3C

H3C

CH3

11a

OH
OH O

OH
OH OH O OH O

O
N

OH

H3C

OH

CH3
OH

O
C

C - NH2 - H2O

H3C

CH3
OH

C - NH2

11

OH

H3C

NaOH

OH

OH

C - NH2
OH
OH O

Izotetraciclina
Pentru deosebirea tetraciclinelor se petrece reacia cu acidul sulfuric concentrat. n primul
rnd se formeaz anhidroderivai, apoi se petrece reacia de oxidare cu formarea produselor
colorate diferit.
CH3
H3 C N
CH
OH H3C
H

H3C

CH3

OH
C
OH

OH

OH
O

H2SO4 conc.
- H2O
NH2

OH
C
OH

OH

OH
OH O

NH2

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

RED.:

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

Tetraciclina

DATA:

01
06.07.2009

Pag. 7 / 18

Anhidrotetraciclina

Reacii de identificare datorate hidroxilului fenolic:

1.
Tetraciclinele formeaz cu cationi polivaleni complexe chelate
insolubile i colorate. Pentru identificarea tetraciclinei se utilizeaz reacia de formare a
fenolailor i enolailor de fer (III):

2. Pentru identificarea tetraciclinei se utilizeaz de asemenea reacia de formare a azocoloranilor:

SO3H

+
OH

Cl
N

HSO3
N

N+

N
OH

Determinarea cantitativ a tetraciclinelor

Metoda biologic
Metoda acido bazic n mediu anhidru;
Metode fizico-chimice spectrofotometric, spectrofluorimetric, fotocolorimetric bazat
pe reaciile cu clorura de fier (III) sau cu srurile de diazoniu.
Relaii structur-activitate n seria tetraciclinelor
Tetraciclinele sunt antibiotice bacteriostatice cu spectru larg de aciune. Clortetraciclina i
oxitetraciclina, antibiotice naturale, au fost obinute din Streptomyces aureofaciens i respectiv
Streptomyces rimosus n anii 1948-1950. Tetraciclina este un analog fr clor, obinut prin
dehalogenizarea clortetraciclinei n 1953. Demeclocilina a fost obinut prin demetilarea
clortetraciclinei. Folosirea lor este actualmente ntru-ctva limitat din cauza frecvenei relativ
mari a tulpinilor bacteriene rezistente.
Tetraciclinele semisintetice din generaia a doua doxiciclina i minociclina au o poten
mai mare, sunt active fa de unele tulpini bacteriene rezistente la tetraciclinele clasice, se absorb
aproape complet din intestin, au o penetrabilitate tisular superioar i menin concentraii active
timp mai ndelungat.
Alternana grupelor fenol-oxo-enol-oxo i prezena grupei dimetilamino (poziia 4) sunt
indispensabile activitii;
nlocuirea grupei carboxamidice (poziia 2) cu un rest acetil sau cian scade activitatea;
Alchilarea carboxamidei permite obinerea de compui mai solubili;
Prezena unei grupe OH- pe C5 (oxitetraciclina) conduce la creterea stabilitii
moleculei n mediu acid;
Modulrile la C6 au condus la tetracicline de semisintez cu t1/2 superior celor naturale i
cu activitate superioar;
7

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 8 / 18

Modulrile pe ciclul D au adus la obinerea minociclinei i aminociclinei, foarte active pe

stafilococi rezisteni pe alte tetracicline i betalactamine.
Proprietile farmacologice ale tetraciclinelor
Mecanismul de aciune
Tetraciclinele penetreaz prin difiziune
membrana extern a bacililor gram-negativi i sunt
transportate activ prin membrana citoplasmatic a
celulelor microbiene, acumulndu-se intracelular.
Celulele sensibile acumuleaz tetraciclinele n
concentraii ce depesc mult concentraiile
extracelulare. n interiorul celulei, tetraciclinele se
leag reversibil de subunitile ribozomale 30 S cu
blocarea consecutiv a legrii aminoacil-ARNt de
complexul ARNm ribozom. Ca urmare, este oprit includerea aminoacizilor n lanul peptidic i
respectiv mpiedicat sinteza proteinelor bacteriene. (fig. 1)
Spectrul de aciune al tetraciclinelor cuprinde bacterii gram-pozitive i gram-negative
pneumococi, gonococi, meningococi, Listeria, B-anthracis, Brucella, Vibrio cholerae,
Haemophilus influenzae, Propionbacterium acnes, kampilobacterii, fuzobacterii, clostridii,
riketsii, spirochete, micoplasme, chlamidii i unele protozoare. O mare parte din tulpinile de
streptococ hemolitic, enterococi, E.coli, Klebsiella, Shigella, Enterobacter, Haemophilus
influenzae, Seratia i Proteus indol-pozitiv, majoritatea tulpinilor de Proteus vulgaris,
Pseudomonas aeruginosa i bacteroizi sunt rezistente la tetracicline.
Profilul farmacocinetic al tetraciclinelor este diferit n funcie de generaie. Preparatele
din generaia a doua fiind mai liposolubile sunt mai avantajoase din punct de vedere al
biodisponibilitii, distribuiei tisulare i epurrii.
Tetraciclina, oxitetraciclina, demeclociclina se absorb din tractul gastro-intestinal n
proporie de 60-80%, doxicilina i minociclina n proporie de 90-100%. Absorbia se petrece
preponderent n poriunea superioar a intestinului subire. Absorbia este diminuat n caz de
utilizare concomitent a produselor lactate, a medicamentelor care conin calciu, magneziu, fier,
datorit formrii chelailor neabsorbabili.
Cuplarea cu proteinele plasmatice variaz ntre 65% tetraciclina i 88% doxicilina.
Tetraciclinele sunt distribuite larg n esuturile i lichidele din organism. Ptrunderea n esuturi
este superioar n cazul doxiciclinei i minociclinei. Trec bariera placentar, realizeaz
concentraii relativ mari n lapte (pn la 50-100%). Se elimin tetraciclinele prin bil i cu urina.
Doxiciclina nu se elimin prin rinichi, eliminndu-se prin colon sub form de chelai inactivi
(tabelul 2).
Tabelul 2
Parametrii farmacocinetici ai tetraciclinelor
Preparatul
Absorbia
Cuplarea
Timpul de
Cile de
Influena
la admicu proteinjumtire
eliminare (prialimentelor
nistrare
nele plasmare/secundaasupra
n norm n anurie
oral (%)
matice
re-% de elimiabsorbiei
(ore)
(ore)
(%)
nare sub form
neschimbat)
Demeclocic66
91
10-17
40-60
Prin rinichi/cu
diminuare
lina
bila (42%)
Oxitetracicli58
35
6-10
47-66
Prin rinichi/cu
diminuare
8

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori

RED.:
DATA:

(Chimie farmaceutic - II)

na
Tetraciclina

75-77

65

6-11

57-108

Doxiciclina

90-100

93

12-22

12-22

01
06.07.2009

Pag. 9 / 18

bila (70%)
Prin rinichi/cu
bila (60%)
cu bila /prin
rinichi (35%)

diminuare
influeneaz
nesemnificativ

Indicaii terapeutice: Tetraciclinele sunt antibiotice de prim alegere n tratamentul

brucelozei, febrei recurente, holerei, richetsiozelor (tifos exantematic, febra Q), n infecii cu
Chlamydia (limfogranulomatoz venerian, uretrite nespecifice, psittacoz, trahom) i cu
Mycoplasma.Tetraciclinele sunt avantajoase n pneumoniile provocate de Chlamydia, Coxiella,
Francisella, Mycoplasma ca i n infeciile pelvine provocate de bacili gram-negativi sensibili.
Contraindicaii: Tetraciclinele sunt contraindicate n insuficiena renal (cu excepie
doxiciclinei) la femeile nsrcinate i la copii pn la 8 ani. La sugari poate crete presiunea
lichidului cefalorahidian cu bombarea fontanelelor.
Reacii adverse: La administrarea tetraciclinelor reaciile adverse se ntlnesc n 7-30%
din cazuri, cu predominarea fenomenelor toxice.
a) Din partea tubului digestiv: fenomene de iritaie gastric i intestinal pirozis, grea,
vom, dureri epigastrice, diaree cauzate de aciunea iritant a preparatelor asupra mucoasei
gastro-intestinale.
b) Aciunea hepatotoxic
c) Aciunea nefrotoxic
d) Oasele i dinii: tetraciclinele se acumuleaz n esuturile calcificate, unde formeaz chelai
cu ortofosfatul de calciu.
e) Fotosensibilizarea
f) Aciunea toxic local asupra esuturilor: administrarea intravenoas a tetraciclinelor poate
duce la tromboze venoase. Injectarea intramuscular provoac aciune iritant local
dureroas.
Interaciuni medicamentoase: n caz de administrare concomitent a tetraciclinelor cu
antiacide, preparate de fier, purgative ce conin magneziu, hidrocarbonat de sodiu, absorbia
tetraciclinelor este diminuat din cauza formrii complexelor neabsorbabile i creterii pH-ului.
Barbituricele, carbamazepina, fenitoina prin inducia enzimelor microzomiale hepatice
diminuiaz, n caz de administrare concomitent, concentraia plasmatic a doxicilinei.
n caz de administrare concomitent a anticoncepionalelor orale hormonale i a
tetraciclinelor garania contracepiei se diminuiau, crete frecvena hemoragiilor.
n caz de asociere a tetraciclinelor cu metoxifluranul crete riscul aciunii nefrotoxice.
Forme farmaceutice:
Tetraciclina capsule 250 mg, compromate filmate 100 mg, unguent oftalmic 1%,
unguent 3%;
Oxitetraciclina capsule 250 mg;
Doxicilina capsule 100 mg.
Substane medicamentoas, derivai de nitrofenilalchilamine
Tabelul 3
Substanele medicamentoase din grupul nitrofenilalchilaminelor
Denumirea romn, latin i chimic. Formula de
structur

Descrierea, solubilitatea

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

Chloramphenicolum
Cloramfenicol (Levomicetina)
O2N

NH - COCHCl2

OH H

O2N

NH - COCHCl2

OH H

amino-

06.07.2009

Pag. 10 / 18

Mas poroas uscat de culoare alb sau

cu nuan glbuie, cu miros slab specific,
cu gust amar, higroscopic. Foarte uor
solubil n ap i alcool.

CH2 - O - C - (CH2)2 - C

DATA:

01

Pulbere cristalin alb sau alb cu nuan

slab galben-verzuie, cu gust amar. Puin
solubil n ap, uor solubil n alcool.
[]20o= de la +180 pn la +210 (5%
soluie n 95% alcool)
r = 323,13

CH2OH

D-(-)-treo-1-para-nitrofenil-2-dicloracetilpropandiol-1,3
Chloramphenicoli natrii succinas
Succinat de cloramfenicol sodic

RED.:

ONa

Sarea de a succinatului de D-(-)tr-1-p-nitrofenil-2dicloracetilaminopropandiol-1,3

Propieti chimice i metodele de analiz
Cloramfenicol, fiind un derivat de -aminoalcool cu soluia sulfat de cupru (II) formeaz
precipitat albastru, solubil n n-butanol, care se coloreaz n violet:
ONa
N = C - CHCl2
O2N

CH - CH - CH2
OH

O
Cu
O
O2N

OH

CH - CH - CH2
N = C - CHCl2
ONa

Cloramfenicolul se supune descompunerii hidramine n diferite condiii.

Astfel, dup hidroliz i oxidarea ulterioar cu periodat de sodiu se formeaz 4nitrobenzaldehida, acidul formic, aldehida formic i amoniac:
O2N

NH - COCHCl2

H2O

CH2OH

O2N

CH - CH - CH2 - OH
OH NH2

OH H
O2N

NaIO4

O
H

O
HC

OH

+ HC

O
H

+ NH3

Reacia de hidroliz n mediu bazic st la baza identificrii cloramfenicolului i

derivailor si. Apare coloraie galben, ce trece n portocaliu. La nclzirea ulterioar se depune
precipitat rou-crmiziu de acid azobenzoic:
O2N

NH - COCHCl2

CH2OH

t0
+

NaOH

OH H
HOOC

10

COOH

+ NaCl

+ NH3

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

RED.:

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori

DATA:

(Chimie farmaceutic - II)

01
06.07.2009

Pag. 11 / 18

acid azobenzoic (precipitat rou-crmiziu)

Reacii pentru grupa nitro-aromatic
Grupa nitro- aromatic dup reducerea sa pn la grupa amin aromatic primar se
diazoteaz i se cupleaz cu soluia bazic de -naftol, formnd azocolorant. Reacia se utilizeaz
pentru identificarea cloramfenicolului:
NH2

NO2

NaNO2

[H]

H C

H C

CH2OH

CH2OH

OH H

OH H
+

HO

NaO

. Cl NaOH

NH - COCHCl2
H C

HCl

NH - COCHCl2

NH - COCHCl2

NH - COCHCl2
H C

CH OH

NH - COCHCl2

CH OH

2
Pentru identificarea substanelor
medicamentoase ce conin2 n structura sa grupa nitroOH H
OH H
aromatic este utilizat i reacia de formare a bazelor Schiff cu p-dimetilaminobenzaldehida,
dup reducerea prealabil a grupei nitro pn la amin aromatic. Cloramfenicolul d coloraie
portocalie intens:

O2N

[H]

H2N

CH2OH

NH - COCHCl2
C

CH2OH

OH H

OH H

H3C
N
H3C

H
C

O
H

H3C
N
H3C

HC

NH - COCHCl2

CH2OH

OH H

Baza Schiff
Acidul succinic n succinatul de cloramfenicol sodic se identific la nclzire cu rezorcina
i acid sulfuric concentrat. Soluia se coloreaz n galben cu fuorescena galben-verzuie n UV. n
caz cnd n loc de rezorcin se ia hidrochinon, i dup rcire se dilueaza cu ap i se adauga
benzen, stratul acestuia se coloreaz n rou.
Metode de dozare
Nitritometria
Dozarea cloramfenicolului se efectueaz nitritometric dup reducerea nitrogrupei cu
ajutorul pulberii de zinc n mediu acid:
NH2
NO2

NaNO2

Zn
NH - COCHCl2
H C

NH - COCHCl2

HCl
H C

CH2OH

OH H

OH H
+

. Cl -

11

NH - COCHCl2
H C

OH H

CH2OH

CH2OH

HCl

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 12 / 18

Proprietile farmacologice ale Cloramfenicolului

Cloramfenicolul este un antibiotic de sinteza cu spectru larg de actiune. Fiind solubil in
apa, poate fi utilizat in injectii intramusculare si intravenoase. In organism este absorbit rapid si
sufera un proces de hidroliza (in special la nivelul ficatului), prin care se pune in libertate
cloramfenicol activ. Se elimina in cea mai mare parte prin rinichi, in forma biologic inactiva.
Este eficace in infectii biliare. Are un spectru antibacterian larg, avand actiune bacteriostatica
asupra multor germeni gramnegativi si grampozitivi.
Mecanismul de actiune: cloramfenicolul actioneaza bacteriostatic, inhiba sinteza proteica
prin inhibitia peptidiltransferazei. Uneori influenteaza sinteza proteica a mitocondriilor celulelor
eucariote - asa se explica toxicitatea asupra maduvei hematogene.
Indicatii: infectii severe provocate de germeni sensibili la cloramfenicol: febra tifoida,
meningite purulente, peritonite purulente, pneumonii si bronhopneumonii; septicemii cu germeni
sensibili la cloramfenicol si rezistenti la alte atibiotice.
Contraindicatii: leucopenie, anemie, agranulocitoza, boli hepatice grave; in insuficienta
renala si la nou-nascuti la femei gravide, in ultima perioada de sarcina; in profilaxia infectiilor.
Reactii adverse: la tratamente prelungie si repetate se pot produce: deprimarea severa a
hematopoiezei, anemie aplastica, purpura trombopenica, agranulocitoza (la doze mari),
uscaciunea gurii, greata, eruptii cutanate, reactii neurotoxice (cefalee, confuzie mintala, nevrita
optica); la nou-nascuti, mai ales prematuri, dozele obisnuite pot provoca un sindrom toxic mortal
(sindromul cenusiu).
Precautii: se vor evita curele repetate (chiar cele scurte), fiind posibila aparitia unor
depresiuni ale maduvei hematogene. Se va administra cu prudenta la hepatici si renali, la
gravide, la sugari.
Mod de administrare: continutul unui flacon se dizolva in 10 ml solutie izotonica de clorura de
sodiu.
Adulti: 0,5 g cloramfenicol la 6-8 ore;
Copii: 25-50 mg/kg corp/zi; Nou nascuti: 10 mg/kg corp/zi.
LUCRUL PRACTIC
Sarcina 1. De apreciat calitatea substanelor medicamentoase dup indicii Descriere
i Solubilitatea.
Datele de oformat n form de tabel i de fcut concluzia despre calitate dup indici
indicai mai sus.
Adnotare: Solvenii se ntrebuineaz conform prevederilor DAN.
Sarcina 2. De apreciat identificarea derivailor tetraciclinelor cu ajutorul reaciilor
comune de identificare.
2.1. Reacii comune pentru derivaii tetraciclinelor
2.1.1 Identificarea tetraciclinelor cu ajutorul diazo-reactivului
Aproximativ 0,05 g substan se dizolv n 5 ml de soluie de hidroxid de sodiu i se
adaug 4 ml de diazoreactiv (0,1 g de streptocid n 8 ml de acid clorhidric diluat la nclzire,
dup rcire se adaug 2 ml soluie de 0,1 mol/l de nitrat de sodiu).
12

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 13 / 18

2.1.2. Reacia de izomerizare la aciune cu hidroxid de sodiu

0,01 g de substan medicamentoas (tetraciclin, oxitetraciclin) se dizolv n 2 ml
soluie de hidroxid de sodiu10%; se formeaz o soluie galben-cafenie; se nclzete la baia de
ap clocotind 1-2 minute, apare o fluorescen albastr, care se observ n lumin UV.
2.1.3.Reacia cu clorur de fier (III)
La 0,01 g substan medicamentoas se adaug 2 picturi de soluie de clorur de fer (III)
3% i 10 ml ap; apare o coloraie roie.
2.1.4. Reacia de formare a anhidrotetraciclinei cu acidul clorhidric concentrat
0,005-0,01 g substan medicamentoas se dizolv n 2 ml de acid clorhidric concentrat i
se nclzete la baia de ap, clocotind timp de 2-3 minute. Tetraciclina formeaz o coloraie
galben i fluorescen galben-verzuie, oxitetraciclina coloraie rou-oranj i fluorescen
galben-verzuie, care se observ n lumin UV.
2.2. Reacii specifice pentru derivaii tetraciclinelor i nitrofenilalchilaminelor
1. Clorhidrat de tetraciclin
1.A. La 1-2 ml substan se adaug 0,2 ml dimetilformamid, 0,1 ml soluie 0,5 mol/l hidroxid
de sodiu i se nclzete pe baia de ap. Apare o coloraie roie-violet, care trece n viiniu.
1.B. La 0,5 mg substan se adaug 1 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie violet. Se
adaug 0,05 ml clorur de fer; coloraia devine brun sau rou-brun.
1.C. La soluia de substan se adaug 1-2 ml nitrat de argint i 1 ml hidroxid de sodiu; apare un
precipitat alb cazeos.
2. Clorhidrat de oxitetraciclin
2.A. La 0,5 mg substan se adaug 1 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie roupurpurie, care la adugarea a 1 ml ap devine galben-portocalie.
2.2.2.B. Reacia pentru ionul de clor.
3. Doxiciclin
3.A. La 0,5 mg substan se adaug 2 ml acid sulfuric concentrat; apare o coloraie galben.
4. Cloramfenicol (levomicetin)
4..Reacia de hidroliz n mediu bazic: La 0,1 g preparat se adaug 5 ml solutie hidroxid
de sodiu i se nclzete; apare o coloraie roie, care trece n rou-portocaliu la nclzirea
ulterioar. La fierberea acestei soluii culoarea se intensific; se formeaz un precipitat roucrmiziu i apare un miros de amoniac. Filtratul dup acidulare cu acid azotic d reacie
caracteristic la cloruri (Vezi 2.1.).
4.B.Reacia de obinere a azocolorantului dup reducerea grupei nitro: la cteva cristale
substan se adaug 2 ml acid clorhidric diluat i 0,1 g pulbere de zinc i se nclzete pe baia de
ap 2-3 minute. Dup rcire soluia se filtreaz. La soluia obinut se adaug 3-4 picturi soluie
nitrit de sodiu i se agit; solutia obinut se adaug la 3 ml soluie bazic -naftol. Apare
coloraie rou-viinie ori precipitat rou-portocaliu.
4.C. Reacia de formare a compusului complex: la cteva cristale preparat se adaug 3
picturi soluie sulfat de cupru i 0,5 ml soluie hidroxid de sodiu 10 %, peste 1 minuta se agit
cu 0,5 ml n-butanol. Stratul de butanol se coloreaz n albastru-violet.
5. Succinat de cloramfenicol sodic
5.. Reacia de hidroliz n mediu bazic: 0,01 g preparat se amestec cu 10 ml soluie
hidroxid de sodiu; apare coloraie galben.

13

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 14 / 18

2.3. Identificarea tetraciclinei i doxiciclinei prin metoda CSS

Condiii de cromatografiere:
Absorbant - Kieselgur.
Sistema de solveni (developant) propilenglicol ap aceton acetat de etil (3:6:45:45).
Soluie de aplicat:
Cte 1 ml soluii 0,05% substane n metanol.
1 ml soluie standard oxitetraciclin 0,05% n metanol.
1 ml soluie standard doxiciclin 0,05% n metanol.
Tehnica de lucru: Placa cromatografic se introduce n vasul cromatografic cu developat, se las
pn cnd acesta migreaz aproximativ 16 cm de la linia de start, se scoate, se usuc la aer, apoi
se ine n etuva 3minute i se exameneaz n lumin UV la = 366 nm.
Pe cromatogram trebuie s apar spoturi identice cu spoturile soluiilor standarde aplicate, cu
aceiai valoare a Rf ului.
2.4. Determinarea absorbiei preparatelor din grupul tetraciclinelor
Absorbia soluiilor de substane cu concentraia 0,002% trebuie s corespund cu absorbanta
soluiilor standarde de substane (vezi tab. 2, Fig.2, Fig,3).

Clorhidrat de tetraciclin
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei metanolice analizate de clorhidrat de
tetraciclina 0,0016%, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint
maxime de absorbie la 270 nm si 363 nm.
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de tetraciclina
0,0016% n acid clorhidric 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360
nm, prezint maxime de absorbie la 269 nm si 356 nm.
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de tetraciclina
0,0016% n hidroxid de sodiu 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la
360 nm, prezint maxime de absorbie la 268 nm si 380 nm.
Clorhidrat de doxiciclin
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei metanolice analizate de clorhidrat de
doxiciclin 0,002%, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360 nm, prezint
maxime de absorbie la 269 nm si 352 nm.
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de doxiciclin
0,002% n acid clorhidric 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360
nm, prezint maxime de absorbie la 269 nm si 346 nm.
Spectrofotometrie UV. Spectrul n ultraviolet al soluiei analizate de clorhidrat de doxiciclin
0,002% n hidroxid de sodiu 0,1 mol/l, n intervalul lungimilor de und de la 220 nm pn la 360
nm, prezint maxime de absorbie la 255 nm si 376 nm.
Tabelul 2
Absorbana preparatelor din grupul tetraciclinelor
Substana
Solvent
Absorbana
nm
Clorhidrat de
Acid clorhidric 0,01
380
0,36 - 0,39
tetraciclinin
mol/l
Clorhidrat de
ap
353
0,54 - 0,58
oxitetraciclin
Clorhidrat de
Acid clorhidric 1
349
0,28 - 031
doxitetraciclin
mol/l + metanol
14

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

Fig.2 Spectrele solutiei standard de

clorhidrat de tetraciclina in diferiti
solventi cu concentratia 0,0016%

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 15 / 18

Fig.3 Spectrele solutiei standard de

clorhidrat de doxiciclina in diferiti
solventi cu concentratia 0,002%

Spectofotometrie IR. Spectrul n infrarou al clorhidratului de tetraciclina si clorhidratului de

doxiciclina n regiunea de la 4000 cm-1 pn la 600 cm-1 trebuie s corespund cu spectrul n
infrarou al substaniilor standard, obinut prin dispersie n bromur de potasiu (R).

15

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

Fig. 4 Spectrul in infrarosu al solutiei

standard de clorhidrat de tetraciclina

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 16 / 18

Fig. 5 Spectrul in infrarosu al solutiei

standard de clorhidrat de doxiciclina

Sarcina 3. De efectuat determinarea cantitativ a substanelor medicamentoase

1. Cloramfenicol (Levomicetin)
1.. Metoda spectrofotometric. 0,1 g preparat se introduc ntr-un balon cotat de 100 ml i
se dizolv la nclzire, (circa 500), se rcete i se aduce cu apa pn la cot. 1 ml din soluia
obinut se transfer ntr-un balon cotat de 100 ml, se aduce cu apa pn la cot i se citete
%
absorbana soluiei obinute la lungimea de und 278 nm, absorbana specific, A 11cm
este 298.
1.. Metoda nitritometric. Circa 0,5 g preparat (mas exact) se introduc n balonul de
titrare cu capacitatea de 200-250 ml, se adaug 20 ml acid clorhidric concentrat i atent, 5 g
pulbere de zinc, n cantiti mici. Apoi se mai adaug 10 ml acid clorhidric concentrat, pe pereii
balonului; dup dizolvarea complet a pulberei de zinc (se poate de nclzit) soluia cantitativ se
trece n paharul pentru diazotare, care se rcete cu ghea; se adaug 3 g bromur de potasiu i
se titreaz ncet cu soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l. Titrarea se consider finit, dac o pictur de
lichid luat peste 3 minute dup adugarea soluiei de nitrit de sodiu va nlbstri imediat hrtia
mbibat cu iodur de potasiu i amidon.
1 ml soluie nitrit de sodiu 0,1 mol/l corespunde cu 0,03231 g cloramfenicol, care n preparat
trebuie s fie cel puin 98,5 % .
1.C. Metoda de titrare anhidr. Circa 0,3 g preparat (mas exact) se dizolv n amestec,
care const din 20 ml acid acetic anhidru i 5 ml anhidrid acetic, se adaug 10 ml soluie acetat
de mercur (II) i se titreaz cu soluie acid percloric 0,1 mol/l pn la culoarea albastr (indicator
cristalin violet).
1 ml soluie acid percloric 0,1 mol/l corespunde cu 0,04126 g cloramfenicol, care n
preparatul uscat trebuie s fie cel puin 98,5 % i cel mult 101,0 %.
ntrebri pentru pregtirea de sine stttoare
1. Caracteristica general a antibioticelor. Clasificarea antibioticelor.
2. Rezistena microbian la antibiotice. Cauzele i mecanismele apariiei rezistenei la
antibiotice.
3. Caracteristica general a structurii chimice i proprietilor tetraciclinelor. Legtura dintre
structur i aciune biologic.
4. Numii grupele funcionale care se conin n structura tetraciclinelor.
5. Indicai gruprile de legtur, care condiioneaz coloraia tetraciclinelor precum i absorbia
intensiv n ultravitolet.

16

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 17 / 18

6. Demonstrai corelaia nre structura chimic i solubilitate n ap, acizi, baze a substanelor
medicamentoase din grupa tetraciclinelor.
7. Prin ce sunt condiionate proprietile amfotere ale tetraciclinei? Indicai grupele funcionale
care condiioneaz aceast proprietate.
8. Tetraciclina, doxicixlina (vibromicina), oxitetraciclina, metaciclina. Cerine fa de calitate,
metodele de analiz.
9. Utilizarea metodelor fizico-chimice (UV- i IR- spectroscopie, diferitor tipuri de
cromatografie) n analiza derivailor tetraciclinelor.
10. Scriei reaciile de identificare ale tetraciclinei pentru hidroxilul fenolic.
11. n ce condiii se obin izoderivaii i anhidroderivaii tetraciclinelor. Scriei structura lor de
formul.
12. Efectuai schema epimerizrii a tetraciclinei. Indicai condiiile n care are loc acest proces.
13. Particularitile i motivele metodei biologice de determinare cantitativ a antibioticilor din
grupa tetraciclinelor.
14. Noiunea de 1 unitate de aciune antibacterian.
15. Indicai mecanismul de aciune al tetraciclinelor.
16. Explicai de ce este contraindicat administrarea concomitent a tetraciclinelor cu antiacide,
preparate de fier, purgative ce conin calciu, magneziu, hidrocarbonat de sodiu.
17. Explicai de ce este contraindicat administrarea concomitent a tetraciclinelor cu produsele
lactate (lapte, iaurt, brnz).
18. Indicai reaciile adverse ale tetraciclinelor.
19. Relaii structur-activitate n seria tetraciclinelor.
20. Indicai formele farmaceutice ale preparatelor din grupa tetraciclinelor.
21. Determinai condiiile de pstrare a substanelor medicamentoase studiate n condiii de
farmacie. Indicai factorii mediului nconjurtor ce acioneaz asupra calitii preparatelor.
22. Obinerea i analiza substanelor medicamentoase, derivai ai nirtrofenilalchilaminelor:
cloramfenicol (levomicetina) i esterui lui: succinat.
23. Enumerai metodele de identificare a atomilor de halogeni legai covalent n molecula
cloramfenicolului.
24. Demonstrai posibilitatea utilizrii reaciei de descompunere hidraminic cu determinarea
ulterioar a produselor de hidroliz n identificarea cloramfenicolului.
25. Reeind din structura chimic a cloramfenicolului argumentai utilizarea metodei
nitritometrice n dozarea acestuia.
Bibliografie:
1.
2.
3.
4.
5.

Conspectul leciei.
abilev F.V. Chimie farmaceutic, Chiinu: Universitas, 1994.-p 675p
Farmacopea romn. Ediia X-a Bucureti: Editura medical, 1993.-1315p.
Ghid farmacoterapeutic. Ch.: F.E.-P. Tipografia central, 2006. 1424 p.
Haieganu E., Stecoza C. Chimie terapeutic. Vol. II. Bucureti: Editura Medical, 20062008. 253 p.
6. .. .- .: -, 2007. 624 .
7. . .
.. .: , 2001. 384 .
Aparataj i reactivi folosii la tema:
Substanele medicamentoase, derivai de tetracicline i nitrofenilalchilamine
Substane medicamentoase:
17

Catedra Chimie farmaceutic i toxicologic

09.3.1-12
Elaborare metodic pentru studeni i profesori
(Chimie farmaceutic - II)

1.
2.
3.
4.
Reactivi:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

RED.:
DATA:

01
06.07.2009

Pag. 18 / 18

Clorhidrat de tetraciclin
Clorhidrat de oxitetraciclin
Clorhidrat de doxiciclin
Cloramfenicol (Levomicetin)

Soluie hidroxid de sodiu 10%

Diazoreactiv
Soluie clorur de fier (III) 3%
Soluie acid clorhidric concentrat
Dimetilformamid
Soluie hidroxid de sodiu 0,5 mol/l
Soluie acid sulfuric concentrat
Soluie nitrat de argint
Sistema de solveni (developant) propilenglicol ap aceton acetat de etil
(3:6:45:45)
10. soluie standard oxitetraciclin 0,05% n metanol
11. soluie standard doxiciclin 0,05% n metanol
12. Soluie acid clorhidric 0,01 mol/l

Vesel, aparatur:
1. Baie de ap
2. Reou electric
3. Bagheta de sticl
4. Sticl de ceas
5. Eprubete
6. Hrtie de filtru
7. Balan analitic
8. Plnii de filtrare
9. Baloane cotate 100 ml
10. Fiole de cntrire cu dop rodat

18