Lucrare de laborator Nr. 8.

Digestia lipidelor sub acţiunea lipazei

pancreatice.
Digestia lipidelor în tubul digestiv reprezintă un proces hidrolitic cu
participarea esterazelor (lipazelor), care parcurge mai ales în intestinul subţire
sub acţiunea lipazei, conţinute în pancreas şi în sucul intestinal. Lipidele
(trigliceridele) sunt supuse hidrolizei, descompunându-se în glicerină şi acizi
graşi.
În procesul digestiei lipidelor o importanţă deosebită are bila (fierea),
secretată de ficat, care conţine săruri ale acizilor biliari. Ultimii acţionează
asupra grăsimilor în calitate de emulgatori, dispersându-le fin. Evident, efectul
emulsionării este mărirea suprafeţei de contact a grăsimilor cu soluţia apoasă a
lipazei, ceea ce facilitează considerabil procesul fermentaţiei hidrolitice. Acizii
biliari deasemenea interacţionează cu acizii graşi liberi formând compuşi
solubili, care uşor pot fi absorbiţi. În afară de acestea, sărurile acizilor biliari mai
exercită un important rol de activator: transformă fermentul din forma puţin
activă (proenzima) în forma funcţională (activă).
Principiul metodei: Se cercetează hidroliza lipidelor din lapte sub
acţiunea lipazei sucului pancreatic, pentru care acizii biliari din fiere sunt
activatori. Despre activitatea lipazei se concluzionează pe baza cantităţii de acizi
graşi obţinuţi într-o unitate de timp în urma scindării grăsimii. Cantitatea de
acizi graşi se determină prin titrarea cu soluţie de alcaliu a probelor de lapte,
luate până la şi în timpul hidrolizei.
Utilaje și reactive: termostat; baloane conice (100 ml, 6 buc.); pipete (2
şi 10 ml); lapte fiert şi răcit până la 37°C; fiere; fenolftaleină, soluţie 1%;
hidroxid de sodiu, soluţie 0,1 N.
Mod de lucru: în trei baloane conice numerotate cu volumul 100 ml se
toarnă câte 50 ml lapte, în baloanele 1 şi 2 se adaugă câte 2 ml extract de lipază,
iar în balonul 3 se adaugă 2 ml extract fiert de lipază. În primul balon se mai
adaugă 5-6 picături extract de bilă. Conţinutul baloanelor se agită, apoi din
fiecare se iau câte 10 ml soluţie care se transferă în alte trei baloane, numerotate
respectiv (pentru titrare). Primele baloane (1, 2 şi 3) se termostatează la t = 37-
40°C
În baloanele pentru titrare se adaugă câte 10 ml apă şi câte 2-3 picături de
fenolftaleină. Se titrează conţinutul fiecărui balon cu soluţie hidroxid de sodiu,
0,1 N până la apariţia culorii slab roze.
Titrarea se efectuează încă de 4 ori peste 15, 30, 60 și 90 minute după
începutul incubării. Rezultatele se înscriu în Tabelul 5.
Tabelul 5. Studiul activității lipazei.
Numărul balonului
Soluție
1 2 3
Lapte 50 ml 50 ml 50 ml
Extract de lipază 2 ml 2 ml 2 ml (fiert)
Extract de bilă 5-6 pic. - -
S-a consumat la
titrare soluție
NaOH 0,1 N
1 titrare (0´)
2 titrare(15´)
3 titrare(30´)
4 titrare(60´)
5 titrare(90´)

Pe baza rezultatelor obţinute se reprezintă grafic activitatea lipazei în timp

ca funcţie de prezenţa sau lipsa bilei, trecând pe axa absciselor timpul, iar pe
ordonată - volumul (ml) soluţiei de NaOH 0,1 N, consumat pentru titrarea
acizilor graşi liberi.