UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

METABOLISMUL TESUTURILOR SPECIALIZATE

BIOSINTEZA PROTEINELOR

Curs 1B

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 1

 2 clase majore de proteine: fibroase si globulare

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 2

 Experimentele lui Anfinsen Nobel 1972

Denaturarea proces cooperativ variatia gradului de depliere cu temperatura

modificari in absorbanta UV (albastru), viscozitate (rosu), rotatia optica (verde)
tranzitie abrupta temperatura de topire (Tm) depinde de pH si taria ionica a
solutiei la majoritatea proteinelor Tm ~ 50 C
2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 3
 Anfinsen
"thermodynamic hypothesis" of protein folding
native or natural conformation is thermodynamically the most stable in the
intracellular environment
It is determined by the totality of interatomic interactions and hence by the
amino acid sequence, in a given environment."

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 4

 Protein folding

MKELAASTLRVTTPKLKSGERVAWCKKAPVGLNST

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 5

 Esecul in plierea proteinelor produce proteine inactive acumularea
proteinelor pliate gresit (prion) pot sa dea nastere la maladii neurodegenerative
Maladii asociate cu multimerizarea proteinelor pliate gresit, incluziuni
insolubile intra- si extracelulare, ca in:
maladia Creutzfeldt-Jacob,
encefalopatia spongiforma bovina (boala vacii nebune),
acumularea proteinei amiloid ca in maladia lui Alzheimer si
fibroza cistica

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 6

 Chaperoni moleculari concept general

introdus la sfarsitul anilor 1980s, de catre John Ellis pentru a descrie proteine
cu rol in pliere si asamblare, in depliere-repliere, prevenirea agregarii si functii
specializate

Functii:
asista plierea si asamblarea proteinelor nascente si nu fac parte din
ansamblul final
pot modula conformatia proteinelor
pot media transportul proteinei prin structuri membranare cand previn
asamblarea;
sunt implicate in dezagregarea agregatelor proteice, asista deplierea, etc

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 7

 Proteine Chaperon

Proteinele Chaperon sunt molecule care asista plierea proteinelor sau

care pot corecta proteine pliate gresit

Familia proteinelor Chaperon include si proteinele Hsp (heat shock

proteins) sintetizate ca rezultat a unui stres chimic, fizic

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 8

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 9
 Tip de Hsp Descriere Localizare
ubiquitina faciliteaza marcarea si ndepartarea proteinelor citoplasma, nucleu
denaturate
Hsp10 cofactor pentru Hsp60 mitocondrie
Hsp27 stabilizarea citoscheletului citoplasma, nucleu
Hsp40 dinamica actinei intracelulare citoplasma
Hsp40 reglarea activittii Hsp70 citoplasma, nucleu
Hsp47 procesarea procolagenului reticul endoplasm
Hsp60 chaperona moleculara mitocondrie
Hsp70 preotejare mpotriva ischemiei, nalt inductibila citoplasma, nucleu
Hsp72 chaperona moleculara
Hsp73 indusa de hipoxie citplasma, nucelu
Hsp75 inclusa n complexul receptorului pentru steroizi mitocondrie
Hsp90 implicata n termotoleranta citplasma, nucleu
implicata n replierea proteica
Hsp105 nucelu, citoplasma
Hsp110 Citoplasma

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 10

 Proteine Hsp 70

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 11

 Reglarea translatiei la eucariote

Initierea este etapa biosintezei proteice care limiteaza viteza intregului proces
Ex controlul translational al sintezei Hb; in prezenta hemului reticulocitele
sintetizeaza catenele globinei (Hb) cu viteza mare; in absenta hemului sinteza
globinei stopata
Pi eIF-2.GDP GTP
Factorul de initiere eIF-2
proteina G nembranara, cu struc- inactiv
GEF=eIF-2B
tura , -rol reglare prin
fosforilare; -se leaga la Met- H2O GDP
tRNAi; - leaga GTP si GDP eIF-2.GTP
2.
activ

HRI (heme-regulated inhibitor kinase) este o kinaza care fosforileaza subunit.

a factorului de initiere eIF-2, deci care este o eIF-2 kinaza:

Inactiva in prezenta hemului Activa in absenta hemului

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 12

 Absenta HEM
Kinaza activa
Pi
eIF-2.GDP eIF-2.GDP
GEF eIF-2
ATP ADP =

Pi
eIF-2.GDP
Dead-end complex
GEF

Forma eIF2 fosforilata se leaga la GEF formand un complex inactiv, blocand

initierea biosintezei globinei
In prezenta hemului intervine o fosfataza;
eIF-2 revine la normal,
eIF2 faciliteaza legarea Met-tRNAi pe subunit 40 S
sinteza globinei este reluata;

Se pare ca fosforilarea eIF-2 este realizata de diferite protein kinaze fiind un

mecanism general de control al translatiei la EK
2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 13
 Interferonii (IFN) sunt proteine (glicoproteine, citokine) sintetizate si
eliberate de celula gazda ca raspuns la prezenta unor agenti patogeni
(virusuri bacterii, paraziti) sau celule tumorale; ce permit comunicarea
intre celule pentru a induce un raspuns al sistemului imun pentru a
eradica patogenii sau tumorile

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 14

 IFN stimuleaza expresia a peste 100 proteine
proteine celulare, printre care enzimele OAS (2,5-
oligoadenylate synthetase) si RNaza L ambele
existente intr-o forma inactiva si o forma activa.
OAS catalizeaza sinteza oligo-adenilatilor
ppp(A2p)nA (25A) care au legaturi 2,5-
fosfodiesterice.
RNaza L scindeaza RNAceea ce inhiba
sinteza proteica atat in celulele virale cat si in celulele
gazdei infectate.
Activarea OAS este un proces dsRNA-
dependent (double-stranded RNA) materialul genetic
al multor virusuri
Activarea RNazei L are loc sub actiunea 2-5A.

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 15

 IFN induc sinteza unor familii de
proteine:
Mx cu activitate GTPazica care
actioneaza asupra nucleocapsidelor
virale si inhiba sinteza RNA
ADAR 1 (human RNA-specific
adenosine deaminase) enzima care
destabilizeaza dsRNA prin conversia
adenozina inozina
dsRNA induce activarea protein
kinazei PKR intr-o maniera INF-
dependenta, care fosforileaza subuni-
tatea a eIF-2 inihiband initierea
sintezei proteice, similar cu cazul HRI
protein kinazei.

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 16

 Blocarea sintezei proteice de catre toxina difteriei (Dtx)

Difteria cauza majora a mortii n copilarie daca nu se realizeaza o

imunizare, produsa de Corynebacterium diphteriae, bacterie care
creste n partea superioara a tractusului respirator

Dtx se formeaza dintr-o proenzima de 535

aminoacizi, care sufera o proteoliza limitata la
forma activa constituita din doua catene polipep
tidice A si B legate printr-o punte S-S-

Structura 3D a Dtx arata o molecula in forma literei Y in care catena A se pliaza

in domeniul catalitic C, iar catena B se pliaza in doua domenii T si R
Domeniul C (N-terminal) blocheaza sinteza proteica prin transferul ADP-ribozei
de la NAD la EF-2;
Domeniul T/TM induce insertia domeniului C in membrana endosomala si
faciliteaza transferul acestuia in citoplasma;
Domeniul R recunoaste un receptor de pe suprafata celulei si permite Dtx sa
intre in celula prin endocitoza mediata de receptor
2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 17
 Intrarea si activitatea Dtx in celule suscetibile
Domeniul B al Dtx se leaga la receptorul cognate
de pe suprafata unei celule susceptibile.
Dtx este inglobata in endosom prin endocitoza
mediata de receptor. Acidificarea veziculei endocitice
permite deplierea catenelor A si B si expunerea
domeniului T hidrofob al toxinei.
Domeniul T se insera in membrana endosomala
translocand domeniul A in citoplasma unde adopta
conformtia enzimatic activa.

Domeniul A utilizeaza NAD

ca substrat si catalizeaza ata-
sarea ADP-ribozei din NAD la
factorul de elongare EF-2 blo-
cand sinteza proteica la acest
nivel.

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 18

 eEF-2 - implicat n translocare are un rest His
modificat post-translational DIFTAMIDA

ADP-ribozilarea eEF-2 blocheaza sinteza

proteica ceea ce explica toxicitatea remarcabila
a Dtx

diftamida

O varietate de alte toxine: holera, pertussis

constau din 2 domenii
un domeniu se leaga la un receptor de pe suprafata celulei
celalalt domeniu (catalitic) modifica ireversibil un component celular important

2/29/2012 Prof.Dr. Dana Iordachescu 19