Dozarea hemoglobinei prin metoda colorimetrică  29 

DOZAREA HEMOGLOBINEI PRIN METODA COLORIMETRICĂ 
 
Hemoglobina,  o  proteină  conjugată,  este  principala  componentă  a  hematiilor.  O 
moleculă  de  hemoglobină  este  formată  din  două  perechi  de  lanţuri  polipeptidice 
(globina)  şi  patru  grupuri  prostetice  hem,  fiecare  conţinând  câte  un  ion  feros.  O 
moleculă  de  hemoglobină  poate  lega  reversibil  patru  molecule  de  oxigen  prin 
intermediul grupărilor hem. Prin urmare, cu cât numărul de hematii este mai mare, cu 

16
atât se va transporta mai mult oxigen. 
Determinarea concentraţiei de hemoglobină este unul dintre testele diagnostice cel mai 
frecvent efectuate, de regulă concomitent cu hemoleucograma. 

20
 
 
PRINCIPIU 

e,
 
Dozarea  hemoglobinei  prin  metoda  colorimetrică  presupune  utilizarea  unui  dispozitiv 

gi
special,  numit  hemometrul  Sahli,  care  cuprinde  două  baghete  de  sticlă  cu  colorație 
lo
standard,  dispuse  lateral,  şi  o  eprubetă  de  sticlă.  Hemoglobina  este  transformată  în 
clorhemină prin reacţia cu acidul clorhidric. Soluţia de clorhemină este de culoare maro, 
io
intensitatea  culorii  fiind  proporţională  cu  concentraţia  hemoglobinei.  Se  adaugă  apă 
distilată la proba astfel obţinută până când culoarea soluţiei este identică celei standard 
iz

din  hemometrul  Sahli.  Cu  cât  concentraţia  hemoglobinei  este  mai  mare,  cu  atât  va  fi 
necesară  mai  multă  apă  distilată  pentru  a  dilua  soluţia  de  clorhemină  până  când 
-F

culoarea  probei  este  aceeaşi  cu  cea  a  standardului.  Valorile  hemoglobinei  sunt 
determinate în funcţie de nivelul de lichid din eprubeta gradată. 
 
r

 
ta

MATERIALE NECESARE 
 
ep

– trusă hemometru Sahli conţinând suport de plastic sau lemn care susţine două 
baghete  fixe  cu  colorație  standard  şi  o  eprubetă  gradată  cu  două  scale  –  în 
procente şi grame % (g/100 ml), respectiv baghetă de sticlă pentru omogenizare; 
dr

– pipetă capilară cu piesă bucală de cauciuc şi o singură gradaţie, 20 µl (Figura 4) 
– soluţie HCl 0,1 N; 
În

– pipetă de sticlă gradată; 
– apă distilată; 
– materialele necesare pentru colectarea mostrei de sânge (vată, alcool sanitar, 
ace sterile, mănuşi de unică folosinţă) 
 30  Lucrări practice de fiziologie 

16
20
e,
gi
lo  
Figura  4.  Eprubeta  de  sticlă  gradată  şi  pipeta  capilară  de  sticlă 
utilizate pentru determinarea concentraţiei de hemoglobină. 
io
 
 
iz

METODA DE LUCRU 
 
-F

Pregătiţi hemometrul: cu o pipetă de sticlă gradată, puneţi soluţie HCl 0,1 N în eprubeta 
gradată până la diviziunea 10%.  
 
r

Pentru a evita riscul de infecție, spălați‐vă mâinile cu apă și săpun 
ta

înainte și după efectuarea oricăror teste sanguine. Când manipulați 
  probele de sânge ale altor persoane, folosiți mănuși de unică folosință. 
ep

Aruncaţi acele folosite în recipientele speciale, destinate acestui scop. 
 
dr

Dezinfectaţi  pulpa  degetului  cu  vată  şi  alcool  sanitar.  Lăsaţi  degetul  să  se  usuce  liber. 
Ţineţi degetul ferm între degetul mare şi arătător şi puncţionaţi pulpa degetului cu un ac 
În

steril, suficient de profund ca sângele să curgă liber. Ştergeţi prima picătură de sânge cu 
o  bucată  de  vată.  Aşteptaţi  să  se  acumuleze  o  a  doua  picătură  suficient  de  mare, 
introduceţi  vârful  pipetei  în  picătură  şi  aspiraţi  o  coloană  continuă  de  sânge  în  pipeta 
capilară până la diviziunea de 20 µl. Dacă picătura de sânge nu este suficient de mare, 
puteţi  aspira  bule  de  aer;  lumenul  pipetei  fiind  foarte  îngust,  riscaţi  ca  sângele  să  se 
coaguleze foarte repede. Nu stoarceţi degetul! 
 
 Dozarea hemoglobinei prin metoda colorimetrică  31 

Ştergeţi  sângele  de  la  exteriorul  pipetei.  Evitaţi  să  atingeţi  vârful  acesteia.  Introduceţi 
apoi  vârful  pipetei  în  soluţia  de  acid  clorhidric  din  pipeta  gradată  şi  expulzaţi  sângele. 
Clătiţi pipeta de două ori, aspirând şi expulzând conţinutul pipetei în eprubetă. 
 
Puneţi  eprubeta  în  suport  şi  adăugaţi  apă  distilată  picătură  cu  picătură  până  când 
culoarea  soluţiei  din  eprubetă  este  identică  cu  cea  a  standardului.  Omogenizaţi 
conţinutul eprubetei  cu bagheta de sticlă destinată acestui scop după fiecare cantitate 
de apă distilată adăugată. Citiţi gradaţia la care ajunge meniscul lichidului pe cele două 

16
scale. 
 

20
 
INTERPRETAREA REZULTATELOR 
 

e,
Valori normale: 
– bărbaţi: 15 – 17 g% (100%), 

gi
– femei: 13,5 – 14,5 g% (aproximativ 90%), 
– nou‐născuţi şi copii mici: 17 – 20 g% (110‐115%). 
lo
 
Creşterea  şi  scăderea  concentraţiei  de  hemoglobină  sunt  de  regulă  (nu  întotdeauna!) 
io
asociate cu creşterea sau scăderea numărului de hematii. Pe lângă anomaliile cantitative 
ale  hemoglobinei  există  şi  anomalii  calitative  ale  hemoglobinei  care  poartă  numele  de 
iz

hemoglobinopatii. 
 
r -F
ta
ep
dr
În