Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
INTRODUCERE
Spectroscopia este o ramură a fizicii care se ocupă cu studiul metodelor de obținere a
spectrelor, precum și cu măsurarea și interpretarea acestora.
Spectrul unei radiații electromagnetice se opune prin descompunerea ei într-un aparat
spectral (spectroscop, spectrograf cu prismă, cu rețea etc) și constă dintr-o succesiune de imagini
ale fantei de intrare, formate de diferitele radiații monocromatice ale luminii incidente.
Spectroscopia Raman a luat un real avânt în zilele noastre în faţa altor metode pentru
monitorizarea a reacţiilor chimice, analize alimentare, farmaceutice şi chimice şi de asemenea
pentru diverse alte aplicaţii de zi cu zi. Spectroscopia Raman oferă informaţii detaliate asupra
vibraţiilor moleculare. Întrucât aceste vibraţii depind de tăria şi tipul legăturilor chimice,
spectroscopia Raman e utilă nu doar în identificarea moleculelor ci şi în studiul interacţiunilor 6
intra- şi intermoleculare. Spectroscopia vibraţională serveşte la elucidarea structurilor şi a
proprietăţilor fizico-chimice ale compuşilor investigaţi.
Preocupările (mai ales din ultimii ani) privind analiza produselor alimentare, necesită
elaborarea unor metode rapide şi exacte de determinare a aditivilor alimentari şi a substanţelor
toxice, iar una dintre aceste metode o poate constitui spectroscopia vibraţională în special prin
ramura ei Spectroscopie Raman Ultrasenzitivă - SERS.
Spectroscopia Raman este o tehnică spectroscopică utilizată pentru a observa modurile
vibraționale, rotaționale, și alte mișcări de frecvență joasă într-un sistem. Spectroscopia Raman
este frecvent folosită în chimie pentru a oferi o amprentă structurală prin care moleculele pot fi
identificate.
Spectrometria Raman permite analiza chimică rapidă şi non-distructivă a solidelor,
pulberilor, lichidelor şi gazelor, fiind astăzi utilizată în domenii variate, de la cercetare
fundamentală până la soluţii aplicate.
Spectrometria Raman se bazează pe efectul Raman, a cărui denumire este dată după
descoperitorul acestuia, omul de ştiinţă indian C. V. Raman şi care constă în schimbarea
frecvenţei unei mici părţi din lumina reflectată de suprafaţa unui material, ca urmare a vibraţiilor
atomice din moleculele acelui material.
Astfel, spectrometria Raman implică iradierea unei mostre de material cu o rază de lumină
intensă, monocromatică (ex. diodă laser, λ=685 nm), urmată de colectarea fasciculului Raman
27
reflectat, prin lentilele obiectivului unui microscop şi analizarea acestuia în spectrometru pentru
stabilirea spectrului Raman.
Spectrul Raman obţinut va prezenta vârfuri proeminente ale căror deplasări Raman sunt
caracteristice frecvenţelor vibraţionale ale atomilor din moleculele în care se găsesc. De aceea,
compoziţia moleculară diferită a două probe de material poate fi pusă în evidenţă prin
compararea directă a deplasărilor Raman ale acestora
PRINCIPIUL DE FUNCȚIONARE
Spectrometria Raman se bazează pe împrăștierea inelastică, sau pe împrăștierea Raman a
luminii monocromatice, provenind de obicei de la un laser ce emite în domeniu vizibil, infraroșu
apropiat sau ultraviolet. Lumina laser interacționează cu vibrațiile moleculare, cu fononii sau alte
excitații din sistem, rezultând în modificarea în sus sau în jos a energiei fotonilor laserului.
Modificarea energetică oferă informații despre modul de vibrație în sistem. Spectroscopia în
infraroșu oferă informații similare, dar complementare .
PRINCIPIUL ANALIZEI RAMAN
1)Absorbţia radiaţiei
2)Emisia radiaţiei
3)Difuzia radiaţiei şi difuzia combinată a radiaţiei (efectul Raman)
Absorbţia radiaţiei
În urma absorbţiei de energie se poate modifica direcţia sau mărimea momentului de dipol
electric al moleculei care interacţionează. Vor avea loc tranziţii între stări energetice de rotaţie,
vibraţie sau electronice, al căror studiu constituie baza spectrometriei moleculare.
Emisia radiaţiei
Din stările excitate apărute în urma interacţiei moleculelor cu radiaţii electromagnetice, o
parte dintre acestea pot reveni la stări cu energie mai mică prin emisie de energie. Acesta
constituie fenomenul de fluorescenţă şi fosforescenţă.
Spre deosebire de absorbţie şi emisie, difuzia radiaţiei nu implică tranziţii între stări cu
energie cuantificată ale unei particule. Dacă un fascicul de radiaţii electromagnetice vine în
contact cu o particulă (atom, ion sau moleculă) care este mică în comparaţie cu lungimea de undă
a radiaţiei, aceasta va fi supusă unei perturbaţii puternice, determinată de câmpurile oscilante,
magnetic şi electric ale radiaţiei. În timp ce radiaţia trece, particula se va găsi într-un câmp
puternic a cărui polaritate alternează cu frecvenţa oscilaţiei. Dacă particula este polarizabilă,
sarcina indusă va oscila de asemenea.
Dipolul oscilant indus în particulă va produce un câmp propriu care oscilează cu aceeaşi
frecvenţă cu cea a radiaţiei incidente. Acest câmp acţionează el însuşi ca o sursă de radiaţii, astfel
că o radiaţie de aceeaşi lungime de undă ca a celei incidente este emisă într-o direcţie aleatoare
(radiaţiile difuzate fiind emise în toate direcţiile posibile). Acest tip de împrăştiere se numeşte
27
difuzie (împrăştiere) Rayleigh şi este caracteristică pentru particule de dimensiuni mici, ca de
exemplu atomi şi molecule. Pentru ca o radiaţie să fie difuzată prin efect Rayleigh este necesar ca
polarizabilitatea particulei să rămână constantă. Dacă polarizabilitatea particulei variază în timpul
difuziei radiaţiei frecvenţa radiaţiei difuzate se va modifica. Să presupunem că o moleculă suferă
o schimbare de polarizabilitate în timpul unei vibraţii normale. Un asemenea mod de vibraţie
constituie baza pentru efectul Raman, iar vibraţia respectivă este Raman activă.
De exemplu, la vibraţia simetrică de întindere a legăturilor în molecula de CO2 nu va fi
nici o variaţie a momentului de dipol, deci molecula nu va putea absorbi radiaţii în domeniul IR.
Totuşi, norul de electroni din jurul moleculei se întinde şi contractă alternativ ceea ce determină o
variaţie a polarizabilităţii. Dacă radiaţia incidentă este monocromatică radiaţia împrăştiată prin
efect Raman îşi pierde acest caracter, apărând în plus o serie de linii (linii Raman) de o parte şi de
alta a liniei corespunzătoare lungimii de undă a radiaţiei incidente. Efectul Raman este aplicat
pentru elucidarea structurii unor molecule, pentru identificarea unor grupări funcţionale sau
legături chimice şi pentru analizacantitativă a unor amestecuri complexe.
Pentru studierea efectului Raman se folosesc surse de radiaţii intense, de exemplu lămpi cu
vapori de mercur. Proba de analizat este conţinută într -un tub de sticlă prevăzut cu o fereastră
transparentă. Între tubul ce conţine proba şi lampa de mercur se găseşte un filtru ce permite
trecerea radiaţiilor de o anumită lungime de undă, de exemplu 435,8 nm.
Rezultate mult mai bune se obţin utilizând drept sursă de excitare un fascicul laser (de
exemplu un laser He- Ne) care furnizează o radiaţie monocromatică foarte intensă.
27
Drept detector de radiaţii poate fi utilizată o placă fotografică, însă în spectrometrele
moderne ea a fost aproape total înlocuită cu detectori fotoelectrici. Spectrul Raman se obţine cel
mai bine pentru probe lichide. Utilizarea laserului ca sursă de excitare permite însă obţinerea
spectrului Raman pentru aproape orice stare a probei: lichidă, soluţie, solid transparent, pulbere,
gaz etc. Şi cu un volum foarte mic, de domeniul microlitrilor sau chiar nanolitrilor. Utilizarea
lămpii cu vapori de mercur drept sursă de excitare necesită volume mult mai mari de probă, de
ordinul mililitrilor.
Cele mai intense linii în spectrul Raman corespund vibraţiei unor atomi legaţi prin legături
relativ nepolare, cu o distribuţie simetrică a sarcinii.
În aceste cazuri, se produc cele mai mari variaţii de polarizabilitate în cursul vibraţiei.
Astfel de grupări sunt:
27
Spectrele de absorbţie în IR şi Raman ale acidului butiric
Spectrometria Raman are multe avantaje faţă de spectrometria de absorbţie în IR. În primul
rând, spectrometria Raman poate fi utilizată pentru a identifica şi analiza molecule care nu absorb
în IR ca de exemplu molecule diatomice homonucleare.
Un alt avantaj îl constituie faptul că spectrele Raman pot fi obţinute pentru soluţii apoase,
spectrul Raman al apei fiind puţin intens. În IR însă apa absoarbe puternic mascând numeroase
benzi de absorbţie ale compuşilor studiaţi. Spectrometria Raman poate fi astfel aplicată la studiul
unor compuşi biologici, apa însoţind foarte frecvent aceşti compuşi.
Pe lângă efectul Raman obişnuit, în care nu au loc tranziţii între stări energetice electronice
ale moleculelor, în anumite condiţii experimentale, poate apărea efectul Raman de rezonanţă.
Acest efect constă în trecerea unui electron din starea fundamentală pe un nivel excitat de
vibraţie al unei stări electronice excitate, fenomen urmat de o tranziţie pe un nivel de vibraţie al
stării electronice fundamentale.
În cazul efectului Raman de rezonanţă nu are loc o relaxare preliminară pe cel mai coborât
nivel de vibraţie al stării electronice excitate, aşa cum se întâmplă în cazul fluorescenţei. Emisia
radiaţiei este instantanee iar spectrul obţinut este sub forma unor benzi înguste. Pentru a obţine
27
spectrul Raman de rezonanţă se foloseşte o radiaţie laser acărei frecvenţă este egală sau apropiată
de frecvenţa corespunzătoare unei tranziţii electronice.
Pentru un foton:
ΔJ = ±1 si + - (paritatea se schimba)
Pentru 2 fotoni:
ΔJ = 0, ±2 si + + sau -- (paritatea se conserva)
Daca o molecula primeste energie rotationala de la un foton, apar liniile din ramura S (la
numere de unda mai mici decât linia excitatoare), numite in acest caz linii Stokes. Daca molecula
pierde energie rotationala in urma coliziunii cu un foton, liniile ce apar sunt numite
linii Anti-Stokes (la numere de unda mai mici decât linia excitatoare), iar ramura ce se
formeaza e numita ramura O.
27
Spectrul Raman rotational pur pentru CO2
27
Comparatorul spectral Raman FORAM 685-2
Este un sistem alcătuit dintr-un calculator (personal computer - PC) care găzduieşte partea
software a spectrometrului Raman, respectiv programul sub care rulează comparatorul spectral
Raman şi unitatea principală FORAM care este destinată, în principal, analizei vopselelor şi a
cernelurilor.
27
Unitatea principală FORAM.
Are ca producător firma “foster+freeman” din Anglia, conţine o sursă de excitaţie laser cu
diodă (=685nm), un microscop optic şi un spectrometru cu grilă de difracţie. La această unitate
se disting următoarele elemente funcţionale (v. foto nr. 1):
- controlul intensităţii laserului (poziţiile: OFF, 10%, 25% şi 100%),
- turela cu obiectivele optice (x5, x10 şi x20),
- stativul pentru fixarea documentului de examinat,
- controlul deplasării stativului pe axa X (stânga-dreapta),
- controlul deplasării stativului pe axa Y (înainte-înapoi),
- controlul deplasării stativului pe axa Z (sus-jos, focus).
După cum orice aparat îşi are limitele sale, date în special de parametrii constructivi ai
fiecăruia, aşa şi comparatorul spectral Raman aflat în discuţie îşi are limitele sale în domeniul de
27
aplicabilitate, iar ca la orice aparat de analiză şi măsură, calitatea rezultatelor este în strânsă
legătură cu acurateţea modului în care se realizează achiziţia datelor. Această corelaţie este
influenţată, în cazul spectrometrului FORAM, de o serie de factori, cum sunt: focalizarea pe
materialul analizat, intensitatea fasciculului laser, parametrii achiziţiei şi sursele de lumină
parazită.
O altă cauză pentru care am luat în discuţie acest factor (focalizarea) este cea a fiabilităţii
scăzute a sistemului de translaţie pe cele trei axe de la stativul pentru fixarea documentelor de
examinat. Soluţia constructivă aleasă de fabricant, cu arcuri de presiune şi şine de ghidare, face
ca sistemul de translaţie pe axele X şi Y să se deregleze nu de puţine ori, având drept consecinţă
creşterea dificultăţii de realizare a focalizării.
Parametrii achiziţiei
Pentru achiziţia unui spectru Raman cu spectrometrul FORAM 685-2, avem la dispoziţie
doi parametrii care, prin valorile selectate pentru aceştia funcţie şi de materialul supus analizei,
conduc la obţinerea unor rezultate optime. Este vorba de durata achiziţiei (Integration Time) şi
numărul de achiziţii-medieri (Average Count).
În ceea ce priveşte durata achiziţiei, trebuie să remarcăm situaţiile extreme, care sunt de
evitat.
În primul rand este situaţia în care, datorită unei durate foarte scurte, semnalul obţinut este
prea slab, necesitând creşterea valorii pentru acest parametru.
27
Curbă de semnal slab pe graficul unui spectru Raman
Cea de-a doua situaţie de evitat este cea în care, datorită unei valori prea mari a duratei de
achiziţie, se obţine pe grafic un semnal de saturaţie (parţială sau totală).
Pentru eliminarea luminii parazite provenită din mediul ambiant, fabricantul oferă o
rezolvare simplă şi uşor de utilizat, care constă în coborârea cilindrului, ce reprezintă garda
obiectivului optic, până la contactul cu suportul de hârtie al documentului analizat, sau până la
contactul cu platforma stativului, în situaţia analizei unor fragmente mici de material. Astfel se
crează un paravan în calea luminii din mediul înconjurător.
27
De asemenea, pentru materialele care sub iradierea laser prezintă o fluorescenţă puternică,
situaţie în care spectrele acestora conţin o mare contribuţie din partea acestei fluorescenţe, făcând
dificilă observarea vârfurilor Raman, fabricantul a pus la dispoziţia utilizatorului o tehnică numită
prescurtat SERRS (Surface Enhanced Resonance Raman Scattering), care îmbunătăţeşte spectrul
Raman prin reducerea fluorescenţei. Această tehnică implică aplicarea peste probă, în punctul de
analiză a unui strat subţire de coloid de argint (recent s-a trecut la utilizarea coloidului de aur).
De menţionat este faptul că această tehnică nu deteriorează proba, astfel că analiza
spectroscopică îşi menţine caracterul nedistructiv.
Utilizare:
- Analiza structurii chimice a compusilor organici si materialelor polimerice prin indentificarea grupele
27
nepolare.
Caracteristici generale:
- Include microscop optic cu posibilitatea alegerii iluminãrii câmpului: câmp strãlucitor sau câmp
strãlucitor/câmp întunecat
-
Apertura confocalã este controlatã de computer pentru a controla rezolutia spatialã si spectralã
-
Rezolutie spatialã pânã la 1 micron
-
Rezolutie confocalã în profilul de adâncime pânã la 2 microni
-
Rezolutie spectralã standard de 4 cm^-1
-
Domeniul spectral de înregistrare 50-3500 cm^-1
-
Toate stagiile de înregistrare si achizitie spectralã controlate de computer
-
Detectorul de tip CCD nu implicã mãsuri suplimentare de racier
Avantaje in utilizare:
- screening rapid (analiza dureaza 2-3s) cu posibilitatea de analiza prin folia de polietilena
a ambalajului, prin peretele de sticla al flaconului sau prin contact direct cu proba
27
- spectrometru cu operare rapida "point and shoot" - nu necesita pregatirea probelor, fara consum
de reactivi chimici, metode transferabile, etc.
- cu schimbari minime de configuratie spectrometrul RAMAN model TruScan poate trece rapid
de la analiza probelor solide, la cea a pulberilor, a probelor lichide sau a foliilor.
APLICAȚII RAMAN
• Identificarea diferitelor materiale – spectru caracteristic obținut fără o pregătire prealabilă
a probei – prin comparație cu o bază de date
•Clasificarea probelor necunoscute
•Caracterizarea anumitor proprietăți fizice cum ar fi cristalinitatea și urmărirea unor reacții
chimice
• Analiza cantitativă
Prin aditiv alimentari „se înțelege orice substanță care în mod obișnuit nu este consumată
ca aliment în sine și care în mod obișnuit nu este folosită ca ingredient caracteristic al
alimentației, indiferent dacă are sau nu valoare nutritivă, a cărei adăugare intenționată în alimente
în scop tehnologic în procesul de fabricare, prelucrare, preparare, tratare, ambalare, transport sau
depozitare a acestor alimente are drept rezultat sau este de așteptat să aibă drept rezultat
transformarea directă sau indirectă a acestuia sau a produselor sale secundare într-o componentă a
produselor alimentare respective.”
Tiabendazolul (E233)
Tiabendazol are formula chimica C10H7N3S şi prezintă sub formă de pulbere albă cristalină.
Este o substanţă chimică, un fungicid special şi un antiparazitar, utilizată pe scară lungă în
tratamentul legumelor şi fructelor, pentru a preveni mucegai, mană, putregai, petele cauzate de
diferite ciuperci şi alte boli pentru transport şi depozit.
TBZ este, de asemenea, utilizat ca şi un aditiv alimentar, un conservant cu numărul E233.
De exemplu, acesta se aplică în mare măsură la banane pentru a asigura prospețimea și este un
ingredient comun în ceară, aplicate pentru cojile de fructe citrice. Se poate folosi numai pe
suprafaţa fructelor.
27
2. Identificarea biotoxinelor marine
Una dintre toxinele dăunătoare este acidul domoic (DA), care provoacă boli grave, toxină
responsabilă pentru sindromul de otrăvire amnesică crustacee (Amnesic shellfish poisoning,
ASP). ASP este o boală nouă descoperită, intrată în lexiconul de sănătate publică în 1987.
Toate crustacee și peștii pot acumula această toxină fără efecte negative parente. În
crustacee toxinele acumulează în principal în glandele digestive, la pește se acumulează în
țesuturi. DA produce, de asemenea, mortea de sute de păsări marine, mamifere și pești în diferite
părți ale lumii .
Probele pentru măsurători au fost pereparate prin îngheţarea probei de peşte la -20 ºC şi
pusă apoi în nitrogen lichid cîteva minute. Pentru mapping prin microscopie Raman, aceste probe
îngheţate au fost tăiate imediat la 40 µm în secţiuni subţiri cu un microtome (Cryostat Frigocut
2800E, at -25 ºC, şi depuse apoi pe o lama de de CaF2 pentru microscopie Raman (pentru a evita
fluorescenţa), şi măsurate imediat .
Bibliografie
27
FORAM 685-2, Raman Spectral Comparator - Instruction Manual & User
Guide,
http://www.total-spectrum.ro
http://www.aparatura.ro
27