Universitatea Politehnica din Bucureşti

Facultatea de Inginerie Chimică și Biotehnologii

DETERMINAREA D-GLUCOZEI CU GLUCOXIDAZA

Profesor coordonator: Student:

Conf. dr. ing. Paul Catalin BALAURE 

Maicanu Florentina Andreea

IIPCB, an III

1
CUPRINS

Scopul lucrării.............................................................................................................................3
Introducere..................................................................................................................................3
Reactivi și aparatură....................................................................................................................4
Mod de lucru...............................................................................................................................4
Prelucrarea datelor......................................................................................................................4
Concluzii.....................................................................................................................................5

2
Scopul lucrării
Analiza unei probe de D-glucoză prin procesul de glucozoxidază.

Introducere
Glocozoxidaza catalizează oxidarea D-glucozei în d-D-gluconolactona.

Glucozoxidaza utilizează flavin adenin dinucleotid (FAD) ca agent oxidant, care este
transformat în forma sa redusă FADH 2.Forma redusă este oxidată din nou prin transferarea
echivalenţilor reducători la O2 , dând naştere la H2O2 .

Există o reacție secundară enzimatică catalizată de peroxidaza de hrean care produce

un compus colorat cu absorbanța maximă la 514 nm.

În această reacție H2O2 este folosit este folosit ca agent de oxidare de către
peroxidază pentru a genera un colorant roz din reacția dintre acid 3,5-dicloro-2-
hidroxibenzensulfonic și 4-aminofenazona.

3
 Densitatea optică la 514 nm este proporțională cu concentrația D-glucozei din probă.

Acesta este un exemplu de tehnică de reacție cuplată.

Reactivi și aparatură
 Kit-uri disponibile comercial (trebuie păstrate la 2-8ºC)
 Tuburi Eppendorf (1,5 mL)
 Spectofotometru, termostat, micropipete

Mod de lucru
 Se pipetează în 3 tuburi Eppendorf așa cum este indicat in următorul tabel:

 Se amestecă tuburile Eppendorf și apoi se așează pe o suprafață plană pentru un

anumit interval de timp (aproximativ 15 minute).
 Se citesc absorbanțele celor 3 soluții la 514 nm cu ajutorul spectofotometrului.

Prelucrarea datelor
o Soluția standard de D-glucoză are o concentrație de 100 mg/dL.
o Concentrația de D-glucoză din probă se calculează cu formula:

OD sample −ODblank −0,302−(−0,053 )

C= ∙ 100= ∙ 100=177 ,85 mg/dL
OD standard−OD blank −0,193− (−0,053 )

Rezultatul este exprimat în mg/dL.

4
Concluzii
 Se poate observa o concentrație de D-glucoză aproape dublă a probei analizate față de
cea standard.
 Cele trei probe procurate (cea analizată, standard și blank) au colorație diferită datorită
compozițiilor diferite.