Abstract A fost efectuat un studiu privind continutul liber de amine biogene n
legumele proaspete i conservate.
A fost aplicata o metoda simpla de extracie, care implic omogenizarea, cu HCl 0,1 M. Dou proceduri diferite (folosind aldehida orto-ftalic i clorura de dansil) au fost aplicate pe parti diferite ale extraselor de acid i analiza HPLC a fost efectuata cu faz invers si coloana HPLC (C18). Rezultatele obinute cu cele dou proceduri au fost
comparate. Cu excepia varzei murate, putresceina (0.2-0.5
mg/100 g greutate n stare proaspt) i spermidina (0.4-4.5 mg/100 g) au fost ntotdeauna aminele cele mai bine reprezentate, n general, urmata de spermina (maxim 1.1 mg/100 g). Nivelul de tiramin a fost de 4,9 mg/100 g in varza murata conservata, n timp ce alte mostre prezentate nu au depasit nivelul de 1.2 mg/100 g. Proba de spanac a artat cel mai ridicat coninut de histaminei (2,0 mg/100 g).
Introducere Aminele biogene sunt compusi organici cu masa
molecular mic care pot fi gsite n cantiti relativ
mari n unele produse alimentare fermentate, ca o consecin a activitii microbiene (decarboxilarea enzimatic corespunztoare aminoacizilor). Aminele biogene din fructe i legume formeaza gustul tipic i caracteristic de alimente mature i sunt precursorii de aroma a anumitor compusi. Ele pot fi, de asemenea, exploatate n scopuri de difereniere. Prezena lor n concentraii relativ mari n legume a fost, de asemenea, asociata cu alterarea din cauza prelungirii timpului de stocare.
Datorit proprietilor lor psihoactive i vasoactive, unele
amine biogene introduse in regimul alimentar (n special
tiramina i histamina), pot provoca efecte farmacologice i toxice distinctive, mai ales atunci cnd sunt prezente enzimele de detoxifierea monoaminoxidaz (MAO) n tractul gastrointestinal,acesta fiind afectat, ca i n cazul pacienilor tratai cu inhibitori ai MAO. Acesti inhibitori includ analgezice si medicamente utilizate pentru tratamentul impotriva stresului, depresiei i boala Parkinson. Autori diferii au raportat crize hipertensive in urma consumului de alimente bogate n tiramin sau a altor amine vasopresoare, cum ar fi n: branza invechita, vin, bere i extracte de drojdie, legume, cum ar fi varza, fasolea, coji de banane i avocado. Tiramin cu un aport mai mare de 6 mg, ntr-o perioad de 4 h, a fost considerata periculosa pentru aceti pacieni.
Poliaminele cum ar fi putrescina, cadaverina, spermidina i
spermina, cu toate c nu exercita un efect toxic direct, pot
potena efectele toxice ale tiraminei i histaminei concurand pentru enzimele detoxifiante i acioneaz n calitate de precursori ai nitrozoaminelor cancerigene. Mai mult, unii autori au raportat faptul c un regim privat de poliamine poate avea efecte benefice n reducerea tumorilor. n plante, poliaminele sunt implicate ntr-o serie de procese celulare (diviziunea i diferenierea celular, sinteza de acizi nucleici i proteine, stabilitate membranara), iar n SUA, exist un brevet pentru utilizarea de poliamine exogene ca o metod de extindere a duratei de depozitare a fructelor i legumelor.
Studii diferite au demonstrat c poliaminele: putrescina,
spermina i spermidina sunt practic omniprezente n toate
legumele, la nivel de cteva mg/100 g produs n stare proaspt. Fructele i sucurile de fructe sunt deosebit de bogate n putrescine, n timp ce legumele verzi sunt mai bogate n spermidina. Conform unor autori, procesele de gtit i tratamentele de cldur pot influena coninutul poliaminelor. Tiramina i alte amine aromatice sunt mai puin rspndite dect poliaminele, dar acestea pot atinge concentraii deosebit de mare n unele legume (de exemplu n salcam Berlandieri), caz n care pare s aib un rol de aprare mpotriva insectelor i a erbivorelor. Putini risca cu prezena acestor amine fiziologic active (serotonina, triptamina, dopamin i noradrenalin), n legume. n special, s-a raportat un coninutul insemnat de tiramin de 0,7, 2.3, 1.0 i 0.4 mg/100 g, respectiv, pentru past de banane, avocado, pulp de portocale i roii. Niveluri medii ridicate de tiramin raportate pentru legume (84.0, 26.6, 25.0 i 67.0 mg/100 g, respectiv, pentru cartofi, boia de ardei, roii i varz) nu au fost confirmate de respectivele analize. S-a constatat, n diferite legume cu frunze,un coninut de tiramin ntotdeauna mai mic dect 0.3 mg/100 g.
Cantitati mai mari de tiramin (0.4 - 3.2 mg/100 g) s-au constatat,
n 32 de probe din pungile congelate cu spanac piure. Valorile
medii ale tiramin de 0,7 i 3,7 mg/100 g au fost gsite, respectiv, in paste de tomate concentrate (n=16) i in probe de ketchup (n=24). Avnd n vedere potenialele efecte negative pe care aminele biogene (n special tiramin),le pot avea i datele contradictorii relativ puine disponibile in literatura de specialitate, scopul acestei lucrri este de a investiga coninutul de amine in diverse legume proaspete (mai ales produsele tipice in dieta mediteraneana). Unele legume conservate, de asemenea, au fost analizate pentru a vedea dac aceste alimente procesate au un coninut semnificativ in diferite amine in comparatie cu legumele proaspete. De asemenea au fost comparate dou proceduri diferite derivate din acelasi extract de proba, folosind, aldehida orto-ftalic i clorur de dansil, nainte de analiza HPLC.
Prelevarea de probe
Mostre de legume proaspete si conservate au fost
luate de la supermarket-uri si magazine de vnzare cu amnuntul i analizate la scurt timp dup cumprare. Unele dintre probele proaspete au fost mprite n dou pri: una a fost procesata imediat, iar celalalta era extrasa dup 3 sptmni de pstrare la temperatura de refrigerare (6-8 C). Toate probele au fost ngheate, nainte de extracie, n scopul de a facilita ruptura celulera.
O metoda de preparare simpl,
care implic prelevarea
eantionului cu 0,1 M HCl, a fost folosit pt aminele libere i determinarea de aminoacizi in probele de legume. Extractul de acid nu are nevoie de purificare si poate fi direct analizat HPLC. Fig. 1 (a) i (b) arat, respectiv, urmele HPLC obinute de la un eantion de spanac derivat cu OPA i procedura DCL. Dei spermidina i spermina sunt amine primare care reacioneaz cu reactiv OPA, derivaii acestora nu au fost suficient de stabili pentru a fi determinati n condiiile folosite n aceast lucrare.
Dup cum se observ din tabelul 1 ambele proceduri au dat
recuperri comparabile (n jur de 90%) cu un nivel sczut de
abateri reziduale (RSD). Unele studii au demonstrat c toate amine, cu excepia triptaminei, au fost stabile n unele zile atunci cnd extractul a fost depozitat la temperatura de refrigerare. Recuperarea triptaminelor a sczut cu timpul de depozitare i dup a 3-a zi de depozitare la temperature 6-8 oC, a fost mai mic de 50%. Tabelul 1 se refer la probele prelucrate imediat dupa extracie.
Poliaminele: putresceina, spermidina i spermina au fost
prezente n aproape toate legumele proaspete, n timp ce
cadaverina a fost prezent, n urme, doar n cteva mostre. Cantiti mici de 2 - feniletilamina, de asemenea, au fost gsite n cele mai multe probe (mai puin de 0,3 mg/100 g). Concentraii mai ridicate de tiramin (nu de peste 1,2 mg/100 g) au fost gsite n salata, fasole, spanac i cartofi. Valori mari de histamin au fost gsite n spanac (2,0 mg/100 g) i probe de tomate (0,7 mg/100 g). Cu excepia probei la varza (4,9 mg / 100 g de tiramin), un produs fermentat adesea caracterizat prin coninutul mare de amine, tiramin concentraii mai mari de legume conservate (tabelul 3) au fost gsite n sfecl roie (0,7 mg/100 g) i past de tomate (0,5 mg / 100 g). In cazul legumelor proaspete, putrescine si spermidine s-au dovedit a fi amine prezente in concentraii mai mari, dar fata de legumele proaspete, legumele conservate au un coninut mai mic spermidina.
Chiar dac detectarea spectrofluorometrica de derivai
OPA permit detectarea limitelor inferioare, ambele
metode au sensibilitate suficient de mare pentru a detecta cantiti mici de amine biogene din probele vegetale (< 0.1 mg/100 g greutate proaspata). n plus, atunci cnd este necesar o sensibilitate mai mare, de detectare spectrofluorometrica a derivatul DCL poate fi folosit n loc detecia UV.
Concluzii
In concluzie rezultatele acestui studiu confirma ca
aminele biogene continute in legumele proaspete nu
reprezinta un risc pentru sanatatea consumatorului.
Cu exceptia produselor fermentate (varza murata),
legumele conservate arata un nivel scazut de amine.
Spermidele continute de legumele proaspete scad
in valoare dupa o perioada de pastrare de 3 saptamani si valori mult mai scazute in general in produsele conservate.
Oricum in unele conditii patogene este important
sa se introduca cantitatea cea mai mica posibila de amine in dieta, iar viitoarele investigatii vor avea nevoie de suficiente date colectate pentru a evalua valoarea contributiei a diferitelor produse vegetale la aminele din dieta.