Cromatografia pe gel permeabil Cromatografie pe gel permeabil in solutii organice

(GPC): determinare de mase moleculare medii si polidispersitate la polimeri

Cromatografia pe gel permeabil sau cromatografia de excludere difuziune
este o tehnica cromatografica al carei mecanism de separare se bazeaza pe diferenta
de dimensiuni moleculare ale componentelor probei de analizat; se-pararea
componentelor se mai datoreaza si intarzierilor relative determinate de difuzia in porii
fazei stationare.
Practic nu are loc distributia componentelor de separat intre faza mobila si cea
stationara cu ajutorul diferitelor forte intermoleculare, ca in procesele cromatografice
propriu zise, ci separarea componentelor cu ajutorul mate-rialelor cu porozitate bine
definita, care consta in excluderea moleculelor mari care depasesc dimensiunile porilor
si accesibilitatea totala sau partiala a mole-culelor mai mici in interiorul porilor.
Mecanismul elementar de separare in CGP se explica prin faptul ca parti-culele de
umplutura poseda canale conice in care patrund moleculele compo-nentelor de
separat, considerate sferice.
Cu cat dimensiunile moleculelor componentelor vor fi mai mici, cu atat ele
vor patrunde mai adanc in porul conic, timpul de retinere al acestora fiind mai
mare decat in cazul moleculelor de dimensiuni mai mari, care patrund doar partial sau
nu patrund deloc in porii granulelor de umplutura.
Timpii de retinere diferiti provoaca intarzieri inegale ale componentelor in
coloana cromatografica producandu-se in acest fel separarea lor.

Fluxul de faza mobila antreneaza permanent moleculele de dimensiuni mari in timp

ce moleculele mai mici, care patrund mai mult in porii granu-lelor de gel vor fi retinute,
deci intarziate, in masura gradului de difuzie in interiorul porilor.
Moleculele componentelor vor fi eluate din coloana cromatografica in or-dinea
descrescatoare a dimensiunilor lor, respectiv a maselor lor molare, adica intai cele
mari, apoi cele medii, iar in final cele mici.
Componentele separate sunt identificate din efluent prin spectrofotometrie in
ultraviolet, refractometrie, ionizare in flacara, spectrofotometrie in infrarosu sau
spectrofotometrie de absorbtie atomica.

CGP nu este o metoda absoluta; interpretarea cantitativa a rezultatelor ne-cesita

calibrarea aparatului si trasarea curbei de calibrare pentru sistemul gel solvent
respectiv, folosind etaloane cu masa molara cunoscuta.
Faze stationare
In CGP se folosesc ca faze stationare diverse materiale solide, caracterizate printro structura poroasa, perfect controlabila si reproductibila.
La alegerea fazei stationare trebuie avut in vedere sa se selectioneze acea
umplutura cu dimensiuni ale porilor care sa corespunda domeniului de mase molare
(dimensiunilor moleculare) ale componentelor de separat.
In cazul in care nu se poate acoperi intreg domeniul de dimensiuni mole-culare,
cum este cel al probelor foarte complexe, cu o faza stationara de o anu-mita porozitate,
se procedeaza la cuplarea mai multor coloane in serie, fiecare continand materialul
adecvat.
Materialele folosite pentru umplerea coloanelor in CGP trebuie sa indeplineasca o
serie de conditii:
sa nu fie adsorbante;
sa posede stabilitate chimica;
sa aiba proprietati fizicomecanice adecvate, care sa permita folosirea
unor viteze mari de curgere a fazei mobile
sa fie compatibile cu solventii folositi;
particulele sa fie sferice, uniforme si de dimensiuni mici, pentru a realiza
rapid echilibrul si pentru a rezista la comprimare;
sa fie ieftin.
Se cunosc doua tipuri de materiale folosite ca faze stationare:
Xerogelurile, de tipul polimeri reticulati, care se umfla in prezenta unui solvent,
formand un mediu poros relativ mare, porii fiind constituiti din spa-tiile dintre lanturile
polimerice ale retelei. Din aceasta categorie cele mai importante suntgelurile dextranice
reticulate cu epiclorhidrina, al caror repre-zentant principal este Sephadexul, care
poseda un numar mare de grupe OH, care ii confera un puternic caracter hidrofil. In
practica se comercializeaza diverse tipuri de Sephadex, dintre care tipul G este cel mai

cunoscut, posedand grade diferite de reticulare, respectiv de umplere, ceea ce il face

apt pentru un domeniu larg de separare.
In functie de scopul separarii, calitatea si dimensiunile Sephadexului sunt
diferentiate: in cromatografia de inalta rezolutie se foloseste Sephadex tip G superfin,
cu diametrul particulelor uscate de 1040 m, iar in scopuri prepa-rativese foloseste tip
G fin, mediu si mare, cu diametrul particulelor uscate de 2080, 50150 si 100300 m.
Aerogelurile sunt materiale rigide, solide poroase, care permit patrunderea
solventului, dar care nu-si schimba forma, deci nu se umfla; in aceasta categorie
intra silicagelul si sticla poroasa, sub denumirea comerciala de Porasil, Merckogel,
Bioglass.
Hibrizii xerogel aerogel sunt materiale intercalate intre cele doua cate-gorii mai
sus mentionate, cu o structura destul de rigida, dar care se umfla in prezenta solventilor
organici.
Din
aceasta
categorie
fac
parte
gelurile poli-stirenice de
tip stirendivinilbenzeni, al caror reprezentant mai cunoscut este Styragelul.
Faze mobile
Avand in vedere faptul ca in CGP faza mobila nu are contributii in rea-lizarea
rezolutiei separarii, alegerea ei se face in functie de viscozitatea si indicele de
refractie al acesteia.
La selectionarea fazei mobile trebuie avut in vedere solubilitatea ei; un bun solvent
trebuie:
sa dizolve proba de analizat;
sa aiba caracteristici chimicostructurale apropiate cu gelul pentru al u mecta, evitand in acest fel adsorbtia componentelor; solventul trebuie sa umfle gelul
poros, marimea porilor fiind functie de natura solventului care imbiba gelul;
sa aiba viscozitate corespunzatoare; solventii cu viscozitate ridicata nu
sunt adecvati deoarece impiedica difuzia componentelor de separat, scazand rezolutia
separarii; pe de alta parte, solventii cu viscozitate scazuta permit folosirea unor coloane
lungi, pentru o cadere de presiune data, ceea ce se traduce printr-o eficienta crescuta
de separare a coloanei;
sa fie compatibili cu tipul de detector folosit: pentru detectorii refractro metrici, bazati pe masurarea indicelui de refractie, este indicat a se folosi sol-venti care
sa prezinte valori ale acestei caracteristici mult diferentiate de cele ale componentelor

separate; in cazul folosirii detectorilor spectrofotometrici este indicata folosirea unor

solventi care nu absorb in domeniul de lungimi de unda pentru care este calibrat
detectorul.
Gama solventilor folositi ca faza mobila in GCP este mare, cei mai des uti-lizati fiind
apa, cloroformul, tetrahidrofuranul si dimetilformamida; tetrahidro-furanul, datorita
domeniului larg de solubilitate si a indicelui de refractie scazut, se remarca printr-o
frecventa utilizarea ca eluent al coloanelor CGP.
De mentionat ca in cazul gelurilor de tip polistirenic (Styragel) trebuie evitata
folosirea solventilor acetona si alcooli.
In general, pentru a preveni fenomenul de adsorbtie a componentelor pe gel, se
indica intrebuintarea solventilor polari.
Aparatura
Aparatura CGP este simpla, asa dupa cum se prezinta in figura 5.3.

Figura 5.3 Schema de principiu a unei instalatii de separare prin cromatografie

pe gel permeabil (1 rezervor pentru solvent; 2 pompa; 3 coloana de separare; 4coloana
de rferinta ;5-ssitem de detectie; 6inregistrator; 7colector de fractiuni ; 8colector de solvent
pentru circuitul de referinta).

Coloanele cromatografice sunt confectionate din sticla (pentru presiuni de operare

sub 3,5 bari) sau otel pentru presiuni de lucru mai mari de 3,5 bari; dimensiunile lor
variaza in limitele: diametrul 6 40 mm, iar lungimea intre 10 150 cm, functie de
scopul separarii, analitic, respectiv, preparativ.

In cazul folosirii coloanelor din sticla se procedeaza la acoperirea lor inte-rioara cu

solutie de 5 % dimetildiclorsilan in cloroform, pentru a evita influ-enta peretilor asupra
procesului de separare.
Sistemul de pompare trebuie sa asigure un flux continuu de solvent, cu debit
variabil, in limitele 0,1 0,5 ml / minut; pulsatiile pompei deranjeaza sistemul de
detectie, motiv pentru care aparatele CGP sunt echipate cu amor-tizoare de pulsatii.
De mare importanta in construirea unei instalatii CGP este realizarea unor legaturi
(conexiuni) intre diversele parti componente de asa maniera incat sa asigure
etanseitatea perfecta, evitand pierderile de solvent.
Instalatiile CGP au in componenta lor si un vas de degazare a solventului, care are
scopul de a elimina aerul dizolvat din solvent; prezenta aerului in solvent faciliteaza
formarea canalelor preferentiale in stratul de gel, datorita bulelor, ceea ce duce la
micsorarea capacitatii de separare a coloanei.
Introducerea probei de analizat in aparat se realizeaza cu ajutorul unor dispozitive
speciale.
Folosirea CGP in scop preparativ implica marirea dimensiunilor coloa-nelor de
separare; acest lucru induce dificultati, in sensul ca folosirea coloa-nelor cu diametrul
mai mare de 15 mm atrage dupa sine micsorarea capacitatii de separare datorita
neomogenitatii umpluturii, si in special a segregarii particulelor de gel: cele cu
dimensiuni mari au tendinta de a se acumula langa peretele coloanei.
O instalatie CGP pentru scopuri preparative este formata din o baterie de 4 coloane
din otel, cu lungimea de 122 cm, diametrul de 6 cm, umplute cu geluri de diferite
porozitati, functie de natura probei de analizat.
Viteza de curgere a fazei mobile este de 50 ml / minut, iar cantitatea de proba
introdusa este de 100 ml, de concentratie 1 %.
Referitor la separarea prin CGP prezentam unele aspecte evidentiate din
activitatea practica:
modificarea vitezei de curgere prin coloana CGP, pentru probe cuprin zand componente cu domeniu larg de mase molare, induce modificarea formei
cromatogramei, pozitia picurilor ramanand neschimbata;
marimea si distributia particulelor de gel influenteaza eficienta de separare a coloanei; s-a constatat ca cea mai buna eficienta se obtine pentru particule de gel
cu diametrul mediu mai mare sau egal cu 0,01 cm;

 marirea eficientei coloanei se obtine cand raportul dintre diametrul coloanei si cel al particulei scade;
capacitatea de rezolutie creste liniar cu cresterea lungimii coloanei; pen tru acest motiv aparatele CGP sunt echipate cu baterii de coloane legate in
serie;
efectul concentratiei probei de analizat este mai pronuntat cand distributia
maselor molare este ingusta si cand aceasta caracteristica are valori ridicate;
timpul de injectie influenteaza forma cromatogramei, volumul de eluat
crescand cu cresterea timpului de injectie;
temperatura modifica volumul de eluat, prin influenta ei asupra solubili tatii si volumului hidrodinamic al componentei dizolvate; cresterea tempera-turii mareste
valoarea volumului eluat, precum si porii gelului, micsorand astfel volumul interstitial al
coloanei.
Performanta procesului de separare cromatografica este dirijata de triada de factori
independenti: puterea de rezolutie, viteza de elutie, cantitatea de proba analizata, care
pot fi dispusi in varfurile unui triunghi echilateral; majorarea unui parametru atrage dupa
sine micsorarea celorlalti doi, realizarea unui compromis intre acesti factori asigura
obtinerea unei performante mari a procesului de separare cromatografica.

Aplicatiile CGP
De regula, CGP reprezinta o treapta intermediara, mai avansata, in schema de
separare a diverselor amestecuri, realizand separarea componentelor dupa marimea
moleculelor lor, fiind plasata dupa CSL de adsorbtie pe silicagel si alumina; se obtin
subfractiuni constituite din componente inrudite din punct de vedere chimico-structural,
relativ omogene.
Subfractiunile separate prin CGP sunt analizate detaliat din punct de vede-re
chimicostructural prin metode spectrale: spectrometria de masa, rezonanta magnetica
nucleara etc.

Dintre numeroasele aplicatii ale CGP, amintim: separarea oligozaharidelor pe

Sephadex G50, folosind ca faza mobila solutie de acid acetic 0,1 molar, proteine, pe
Sephadex G100, cu acid acetic 50 %, steroizi, peptide, antibiotice, hidrocarburi
aromatice policiclice etc.
CROMATOGRAFIA

Cromatografia grupeaz o variat i important grup de metode care permit cercettorului

s separe compui foarte asemntori din amestecuri complexe. n toate separrile
cromatografice proba este dizolvat ntr-o faz mobil: gaz, lichid sau fluid supercritic.
Aceast faz este frecvent numit eluent, iar dup ce trece de captul coloanei se numete
eluat.
Metoda cromatografic a fost descoperit de botanistul rus Mihail Tsvet, n 1906 i a fost
folosit nti pentru separarea unor substane colorate pe coloan sau ca eluate colorate.
Dac substanele sunt incolore, prezena lor pe coloan sau n eluate se recunoate prin alte
metode.
Metodele cromatografice sunt bazate pe adsorbia amestecului de substane (solidlichid;lichid-lichid; gaz-lichid) pe un material adsorbant, urmat de desorbia succesiv (cu
ajutorul unui dizolvant adecvat eluant) a componentelor din amestec.
Coloana de adsorbant poate fi nlocuit, n unele variante cu o foaie de hrtie poroas
preparat n mod special (cromatografie pe hrtie) sau cu un strat subire de adsorbant fixat
pe o plac de sticl, cu ajutorul unui liant (cromatografie n strat subire).
Separarea compusului de analizat de potenialele interferene este unul din paii eseniali n
analiza chimic. Cromatografia este una dintre cele mai frecvent utilizate metode pentru a
realiza aceste separri analitice. Aplicaiile cromatografiei cresc exponenial cu timpul, n
mare parte datorit faptului c ea i gsete aplicaii n toate ramurile tiinei. Este rapid,
simpl, cu costuri relativ reduse i variabilitate mare relativ la alegerea metodei de
separare.
O analiz cromatografic se rezum n general la urmtoarele concepte fundamentale:
proba este dizolvat n faza mobil;
faza staionar este cel mai frecvent un lichid adsorbit la suprafaa unor particule de solid
utilizate pentru a mpacheta coloana;

 faza mobil este trecut peste faza staionar nemiscibil; aceasta se numete eluie;
solutul care are o mare afinitate fa de faza mobil se va mica prin coloan foarte ncet;
componenii probei se vor separa n benzi discrete vizibile la detector, i rezult
cromatograma.
Cromatografia a devenit principalul instrument pentru separarea speciilor asemntoare. Ea
poate fi de asemenea utilizat pentru determinri cantitative i calitative ale speciilor
separate,
n termeni de informaie calitativ, o cromatogram furnizeaz timpul de retenie al speciilor
sau poziiile acestora pe faza staionar dup un timp de eluie specific. Cromatografia poate
fi extrem de util pentru recunoaterea prezenei sau absenei unor componeni n amestec
ce conine un numr limitat de specii cunoscute. Confirmarea identitii servete i pentru
alte investigaii, i nu n ultimul rnd cromatografia servete ca precursor pentru alte analize
chimice calitative sau pentru analize spectroscopice.
Informaia cantitativ este principalul motiv pentru care cromatografia are o att de larg
folosin. Ea se bazeaz pe compararea mai multor nlimi sau suprafee ale picurilor
analitice cu etaloane. Analiza bazat pe aria picurilor, care este independent de efectele de
deformare este mult mai precis i de aceea mult mai comun. Oricum, toate datele
cantitative sunt dependente de prepararea standardelor i calibrrile succesive ale coloanei
folosind aceste standarde. Fr exactitate i calibrare precis a datelor, nici o dat
cromatografic nu poate fi considerat exact.
Sunt 5 categorii de cromatografii: de adsorbie; de partiie; cu schimb de ioni; prin
excluziune molecular; de afinitate.
Metodele de cromatografie pot fi de asemenea clasificate n dou moduri: cromatografia
planar i cromatografia pe coloan. Ele sunt bazate pe interaciunea fizic, ceea ce
nseamn c faza staionar i faza mobil sunt n contact. n cromatografia pe coloan,
faza staionar este introdus n interiorul unui tub ngust i faza mobil este introdus n
tub cu ajutorul presiunii sau a greutii proprii. n contrast, cromatografia plan folosete o
faz staionar care este depus pe o suprafa plan sau n hrtie. Faza mobil se
deplaseaz prin faza staionar datorit aciunii
capilare sau a greutii.
Cromatografia de lichide, gaze i de fluide supercritice sunt 3 clase generale bazate att
pe tipurile de faze mobile i staionare ct i tipurile de echilibre implicate n transferul
solutului ntre faze. Fazele mobile sunt gaze, lichide i fluide supercritice. Fazele staionare

variaz i tipul de echilibru este dependent de alegerea acestei faze.

Cromatografia de adsorbie utilizeaz o faz staionar solid i o faz mobil care este un
lichid sau un gaz. Solutul poate fi adsorbit la suprafaa particulelor solide, unde echilibrul
dintre starea adsorbit i soluie produce separarea moleculelor solutului.
n cromatografia de partiie faza staionar este un film subire pe suprafaa unui suport
solid. Solutul stabilete un echilibru ntre lichidul staionar i faza mobil (lichid sau
gazoas).
n cromatografia de schimb ionic anionii sau cationii sunt legai covalent de o faz staionar
solid, frecvent o rin sau o faz solid tare i amorf. O faz mobil lichid este utilizat.
Ionii solutului de sarcin opus sunt atrai de faza staionar datorit forelor electrostatice.
Cromatografia de excluziune molecular este mai comun denumit de gel permeabil sau de
filtrare cu gel. Aceast tehnic separ moleculele dup mrime i moleculele mari trec cu o
vitez mai mare dect moleculele mici. Nu exist interaciuni atractive. n loc, faza mobil
gazoas sau lichid este trecut printr-un gel poros, care exclude moleculele mari, dar nu i
pe cele mici.
Moleculele mari curg peste fr a intra n gel, i ele elueaz primele.
Cromatografia de afinitate este bazat pe interaciunea ntre un tip de molecule de solut i
un al doilea tip, acestea legate covalent de faza staionar. Cnd un amestec este trecut
prin coloan, doar un tip de molecule de solut reacioneaz cu moleculele legate i formeaz
legturi la rin.
Moleculele de solut dorite sunt dislocate apoi de moleculele legate variind pH-ul sau tria
ionic a solventului .
n cromatografia de gaze (GC) lichidul volatil este injectat cu ajutorul unei pompe de cauciuc
ntr-un port injector, care vaporizeaz proba. Probele gazoase pot fi injectate folosind
osiring adecvat. Un gaz inert purttor poart proba prin coloana ce conine faza
staionar.
Gazul purttor servete ca faz mobil. Dup traversarea coloanei, particulele separate de
solut intr ntr-un detector. Rspunsul este afiat pe un calculator ca funcie de timp.
n cromatografia pe strat subire (TLC), un spot de prob este aplicat peste o bucat de
hrtie sau sticl avnd faza staionar impregnat. Captul suprafeei de hrtie sau sticl
este apoi scufundat ntr-o cantitate de solvent, care servete ca faz mobil. Solventul
migreaz de-a lungul fazei staionare, separnd componenii probei n lungul drumului su.

Cnd solventul ajunge n vecintatea prii superioare, este nlturat cantitatea

suplimentar
de solvent i este lsat s se usuce. Civa dintre componenii probei sunt vizibili n acest
moment.Alte msurtori sunt n mod curent efectuate pentru a detecta toi componenii
probei .
Cromatografia de lichide de nalt performan (HPLC) refer noile proceduri de
cromatografie de lichide bazate pe o instrumentaie sofisticat.
Acestea sunt cele mai mult folosite dintre toate metodele de separare .
Detecie
Foarte multe detectoare sunt angajate n separrile cromatografice. Detecia absorbanei
moleculare UV-VIS este cea mai comun. Detectorul ideal este necesar s aib: sensibilitate
adecvat; bun stabilitate i reproductibilitate; timp de rspuns scurt; rspuns liniar la
diferite ordine de concentraie; stabilitate pe un larg domeniu de temperatur; durat lung
de via i uurin n utilizare.
Monocromatorul este adesea o component a instrumentului UV-VIS. El permite scanri
spectrale, ceea ce nseamn capacitatea de a varia lungimea de und a radiaiei n mod
continuu ntr-un domeniu larg. Fantele monocromatorului joac un rol important. Fanta de
intrare servete ca surs de radiaie. Fantele largi sunt tipic utilizate pentru determinri
cantitative n care detaliulspectral este important, n comparaie cu analiza calitativ.
Metode de prelucrare a informaiei cromatografice
Metoda standardului intern furnizeaz cea mai mare precizie pentru cromatografia
cantitativ deoarece ea elimin incertitudinile introduse de simpla injecie. n aceast
metod, o cantitate exact msurat de substan este adugat fiecrui standard sau
probe. Standardul intern trebuie s fie ales astfel nct el s se separe foarte bine de
celelalte picuri componente ale probei.
De asemenea, picul standard trebuie s fie aproape de picul analitic. Cantitatea de
substan din picul de standard intern servete apoi ca parametru analitic.
Metoda normalizrii ariilor este o alt aproximare utilizat pentru eliminarea incertitudinilor

asociate cu simpla injecie. n aceast metod, aria tuturor picurilor complet eluate este
calculat. Concentraia analitic este gsit ca raport al ariei de pic la aria total a tuturor
picurilor.
Lrgimea benzii n cromatografie
O cromatogram:
ilustreaz rspunsul detectorului la un compus de analizat din prob la ieirea acestuia din
coloan ca funcie de timp sau de volum de faz mobil adugat;
este util att pentru determinrile cantitative ct i calitative;
furnizeaz o serie de picuri, unde aria de sub picuri furnizeaz informaia cantitativ
despre cantitatea de component iar poziia picului servete pentru identificarea compusului
din prob;
Cteva forme de band pe cromatogram este posibil s depind de concentraia
compusului de analizat n fazele mobil i staionar i de comportamentul fiecrui compus
n parte .
Publicat de just us la 03:51 2 comentarii:

Linkuri de ntoarcere ctre aceast postare

ehnici de cromatografie filtrare cu gel sunt dezvoltate n anii aizeci

nceputul anilor o separare rapid i simpl i tehnici de analiz, deoarece
echipamentul este simplu, uor de utilizat, nu are nevoie de solveni organici,
materiale polimer are o eficien ridicat de separare. De asemenea,
cunoscut sub numele de penetraie n gel cromatografia cromatografia de
excludere molecular. Cromatografiei permisive gel este folosit n special
pentru analiza polimer i clasificarea masa molecular relativ distribuie
relativ masa molecular a testului. A fost acum biochimie biologie
moleculara, bioinginerie, imunologie, moleculara si medicina si alte domenii
conexe utilizate pe scar larg, care nu sunt utilizate numai n cercetarea
tiinific experimental, i a fost utilizat pe scar larg n producia
industrial.

Clasificare
Potrivit obiectului de separare compus sau o chestiune solvent organic
solubil n ap-solubil, poate fi divizat n penetraie n gel cromatografie
cromatografie filtrare pe gel (GFC) i cromatografie cu penetraie n gel
(GPC).

Filtrarea cromatografic pe gel

Filtrarea cromatografic pe gel este utilizat n general pentru separarea
macromolecule solubile n ap,
Cum ar fi multi-zaharide. Glucozamina este reprezentat gel, eluare solvent n
principal de ap.
Gel de permeabilitate cromatografie
Cromatografiei permisive gel este utilizat n principal pentru polimerul solubil
solventul organic (polistiren, clorur de vinil, polietilen, polimetilmetacrilat,
etc) de distribuie a greutii moleculare i separarea gelului folosit reticulat
gel polistiren, eluie solventul este un solvent organic, cum ar fi
tetrahidrofuran.
Nu numai c poate fi utilizat pentru penetraie n gel de separare
cromatografic i determinarea greutatea molecular a polimerului i
distribuiei maselor moleculare, n timp ce n funcie de diferite umplutur
gel, substane solubile n ulei i ap-solubil separabile, masa molecular
relativ separare n intervalul de la cteva milioane la 100.
Cromatografie de gel este, de asemenea, utilizat pe scar larg pentru a
separa compui moleculare mici. Structur chimic diferit, dar substane
similare cu mas molecular, este imposibil s se realizeze complet prin
separare cromatografic gel i scopuri de purificare.
Principiul separrii
O soluie de prob coninnd diverse molecule ncet prin coloan de gel,
fiecare molecul n coloana simultan a dou tipuri diferite de micare:
micarea descendent vertical i proliferarea a micrii nedirecionat.
Deoarece macromoleculele particule mai mari diametru n porii de gel nu
este uor, dar numai distribuia ntre particulele, astfel eluarea descendent
mai repede n micare. Molecule mici, n plus fa de diferena de difuzie n
particulele de gel, particulele pot intra n porii gel, gelul este nscris faz,
deplasarea n jos a procesului, de la o difuz n particulele de gel dup
clearance i apoi n alte particule de gel, astfel nct intr continuu i
rspndit n jos molecule mici dect ntr-un material macromolecular, astfel

nct moleculele mari din eantionul la ieirea din prima coloan, dup fluxul
de molecule medii, cea mai mic molecul de la ultimul afar, un fenomen
numit efect sit molecular. Gelul este o sit molecular poros.
Diferite site moleculare au o serie de distribuia dimensiunii porilor, o limit
maxim i limita minim. Diametrul maxim al porilor dect diametrul
molecular de gel, gelul va fi toate particulele de excludere, acest tip de
situaie se numete excluziune complet. Chiar de dou excludere molecular
plin de dimensiuni diferite, nu pot avea efect de separare. Diametru dect
diametrul gurii de gel molecule mici pot intra toate a porilor de gel. Dac
dou molecule pot intra toi porii gel, chiar dac diferenele de mrime, i nici
nu exist un efect de separare bun. Prin urmare, acesta trebuie s aib un
anumit grad de aplicare sit molecular de utilizare.
n primul rnd, molecule mici, pot intra toate de sit molecular porilor
interior n al doilea rnd, molecule mari, nu pot intra nici de gel n interiorul
porilor, trei dimensiuni moleculare este moderat, poate intra n porii
dimensiunea porilor de gel n seciunea corespunztoare. Mari, medii i mici
trei molecule mai uor separate unul de altul, dar fiecare molecule izolate gel
afara intervalului, fr a schimba tipul de gel este dificil s se separe caz.
Moleculele de dimensiuni diferite, dar care aparin aceleiai molecule n
domeniul de aplicare al separrii gel, n distribuia de pat gel este diferit:
moleculele mai mari pot intra doar acea parte de mari porilor dimensiune a
porilor de gel, mai degrab dect molecular Multiple particule gel mici pot
intra n interiorul, astfel nct moleculele mari din patul gelul este deplasat
pe o distan scurt, lungi molecule distane mai mici. Deci primul moleculele
mari i moleculelor prin patul gel de pat gel dup mai mici, astfel nct
utilizarea sitelor moleculare cu diferite substane cu greutate molecular pot
fi separate. n plus, gelul n sine are o structur de reea tridimensional,
molecule mari prin porii astfel de structur ochiuri pe mare rezisten, mai
mic rezisten de molecule mici pentru a trece prin. O varietate de diferite
componente mas molecular prin patul de gel, conform linia mrime
molecular, performana molecular efectul sit gel.
Gel Tip
Gel de poliacrilamid
Gel de poliacrilamid este un gel sintetic, este n uniti de acrilamid,
metilen bis-acrilamid prin reticulat n, asupra procesului de deformare

uscate i mcinate sau granulate, de control poate fi fabricat din cantitatea

de agent de reticulare diverse tipuri de geluri. Mai agent de reticulare, porii
mai mici. Produsul gel de poliacrilamid este biologic lipici-P (Bio-Gel P), de
Tosoh japonez de TSKGEL seria PW, potrivite pentru purificarea proteinelor i
polizaharide. O cantitate mic de agent de reticulare, acrilamid i metilen
bis-acrilamid, persulfat de amoniu catalizator sub polimerizarea gel.
Poliacrilamid numit PAM, greutate molecular de 100 pn la 5.000.000.
Exist dou produse principale ale formelor de poliacrilamid, unul sub form
de pulbere, iar cellalt este gel, i emulsie poliacrilamid (Institutul Shanghai
dezvoltat o rin sintetic). Solubil n ap rece, foarte lent, poliacrilamid cu
greutate molecular mare atunci cnd concentraia depete 10% dup. Vor
forma o structur de gel-ca. Temperaturi uor ridicate poate promova
dizolvarea, dar temperatura nu trebuie s depeasc 50 , pentru a evita
degradarea molecular. Insolubil n solveni organici. Temperatura depete
120 descompunere. Neutru, non-toxice. Utilizate ca ageni de ngroare,
ageni de floculare, DRA, cu gel, de decontare, cum ar fi efect consolidarea. A
se pstra la un loc rcoros, ventilate, cuferele uscat, umiditate, lumin,
cldur-rezistente. Timpul de depozitare nu trebuie s fie prea lung.
Cross-legate de dextran gel (Sephadex)
Sephadex G reticulat dextran Sephndex tradename, specificaii diferite de
dextran cu litera G, G este numrul de spate a gelului Ap Arab a fost de 10
de ori valoarea. De exemplu, G-25 gel pe g de ap 2,5 g umfl, acelai G-200
gel mie per gram de ap de 20 grame. Tipurile de Sephadex G-10, G-15, G25, G-50, G-75, G-100, G-150, i G-200. Astfel, "G" reflectat gradului de
reticulare de gel, gradul de extindere i variaz de segment.
Sephadex LH-20, Sephadex G-25 este un derivat carboxipropil, solubil n
ap i lipofile solvent pentru separarea substanelor insolubile n ap.
Gel de agaroz
Agarose Agarose, prescurtat AG, se neacoperite compoziia agar de, agar
neutru, de asemenea, tradus sau agaroz simplu. Structura chimic Agarose
de -D-galactopiranozil-(1-4) Racord 3,6 - deshidratare de compoziie de
uniti -L-galactopiranozil.
Agaroz, sau aproape fr sulfat polizaharid agar component principal,

solubil n ap, gel de rcire fcut. Formata din particule mici de filtrare pe gel.
Nu este adecvat pentru utilizare Sephadex macromolecule fracionate prin
filtrare pe gel, utilizarea de 5% din concentraia de particule de gel poate fi
celulele fracionate, virus. Utilizarea caracteristicilor sale de adsorbie ale
unei mici, uneori n loc de agar, sau sub form de gel imunoelectroforez
reacie sedimentare sprijin.
Gel de agaroz lot denumirea comercial, o comun,
Sepharose (Suedia, Pharmacia), Bio-Gel-A (Statele Unite ale Americii, BioRad), i aa mai departe. Gel de agaroz se bazeze lan de zahr, cum ar fi
legturi de hidrogen ntre lanul secundar pentru a menine ochiuri,
densitatea ochiurilor depinde de structura de concentraia de agaroz. In
mod normal, structura sa este stabil, poate fi folosit ntr-o serie de condiii
(cum ar fi apa, pH4-9 n soluie de sare). Gel de agaroz ncepe s se
topeasc la peste 40 , nici autoclavare, activiti de sterilizare chimici
tratament disponibil. Gel de polistiren
Marfa Styrogel, cu o structura cu ochiuri mari, greutate molecular 1600 la
40.000.000 de separarea de macromolecule biologice de polimeri organici,
determinarea greutate molecular i de clasificare solubila in grasimi produs
natural, rezistenta mecanica gel, se spal agent de degresare sulfoxid
disponibil.
Umpluturi sintetice
Cromatografie de filtrare cu gel de ambalare avanseaz tehnologia de
sintez n principal n urmtoarele patru aspecte: de umplere de microsfere
din distribuia dimensiunea ngust de siliciu poros microsfere sintetizat cu
succes, sinteza mic deschidere de siliciu poros microsfere succes i noi
modificate chimic suprafata de siliciu a microsferelor dezvoltare. n acest
sens, exist mai multe produse noi, China are, de asemenea, mai multe
uniti, n dezvoltare i producie. Cromatografie de gel de nalt performan
se schimb rapid fata aplicaii cromatografie de gel.
Patru tipuri de siliciu poros numrul de plac teoretic
[romn]

[wml]Versiunea pentru mobil : http://ro.swewe

Vocabular Caut
Cauta

mbru :Autentificare |nregistrare |Libertatea de a publica cunotine vocabular

Anterior 2 Urmtor Selectai Pagini

2

ermeabilitate Cromatografie

de cerinele de ambalare granularitate coloan de eficien, cerinele pentru o relativ ngust distribuie a dimen

. Cu metoda general preparare adesea cu un produse dimensiune larg trebuie s fie n continuare selectai. C

articulelor de umplutur de 30 microni sau mai puin, acest screening este foarte dificil, a devenit umplere se p

lti tehnice. Kirkland, utilizarea de uree i formaldehid n mediu acid pentru a forma un polimer lichid de dime

adugnd un sol de silice, silice mrgele sol coagulat n polimer lichid. n cele din urm, polimerul organic poate

ea particulelor de mrgele poroase siliciu stivuite ambalare. Aceast acumulare de mrgele de siliciu sunt, foarte

mensiunii particulelor sferice, diafragma umplutur specificaiilor de silice original sol, gel de silice, cu diferite

fi realizate din diverse materiale de umplutur. Chai Zhi i larg utilizai o umplere de siliciu cu o distribuie a dim

este ngust, apoi utilizai metoda corespunztoare de alezat diafragma pentru a obine o varietate de umplutur

rosfere pregtit ca umplutur, se poate realiza un relativ ngust distribuie a dimensiunii particulelor, acesta po

ct, fr filtrare.

GPC-LALLS obine standardele de greutate molecular PS comparativ

de injectare i mbuntiri de design comune coloan poate obine deja eficiena coloana pe metru la 80000-10

afie de gel de ambalare. Urticarie n patru GPC cu o coloan umplut cu silice microsfere, se poate ajunge la 80.0
metru numr de nmatriculare eficient. El a folosit aceast coloan este efectiv efectuat investigaia necesar

oblemei.

erimentale

nologie coloan cromatografic de gel este subiectul sticl uz general sau tub plexiglas. Diametrul coloanei nu a

cantitate mare de prob, poate crete diametrul coloanei este, n general preparat folosind o coloan de gel, d

de 2 cm de prob n eantion trebuie s fie distribuite uniform n pat gel pe. n plus, diametru mai mare, de lichid

ete, gradul diluie a probei. Separare depinde de nlimea coloanei, n scopul de a separa diferite componente,

trebuie s aib un grad adecvat de separare asociat cu rdcina ptrat a nlimii coloanei, dar din cauza gel

xtrudare excesiv, n general, nu mai mult de 1 m . Familie cu o coloan scurt de separare, n general, 20-30 cm

imea coloanei i compararea diametru 05:01 10:01, gel volumul patului de 4-10 ori volumul de soluie de pro

oloanei de fracionare i diametrul firului este de 20:1 100:1, coloana de obicei cu gel cu 50 25 , 10 25

ort coloan a plcii trebuie s fie ct mai mic posibil, dac mor suport placa palmier voluminoase, ntre compon

e din nou posibilitatea de amestecare mare, rezultatul este afectat forma vrfului de eluare, acolo decantare e

rena vigoare. La separarea precis, volum mort nu poate depi volumul patului total de 1/1000.

el

e volumul de gel dorit, a estimat cantitatea de adeziv. General Sephadex gel dup ce absoarbe volumul apei es

v 2 ori cantitatea de ap su, de exemplu, Sephadex G-20 i capacitatea absorbant 20,1 g Sephadex G 200 ge

soarbe o cantitate de aproximativ 40ml. Dimensiunea particulei poate afecta, de asemenea, separarea cromato

epararea celulelor granular este bun, dar rezistena este fluxul de mare, lent. Separarea general a proteinelor

umrul ochiurilor de Sephadex G-200 laborator este bun, desalinizat folosind Sephadex G-25, G-50, cu grosier,

za fluxului.

ul se usuc particule nainte de a utiliza direct n eluant expansiune dorit. Pentru accelerarea procesului de extin
incalzire utilizat, gel umed ntr-o baie de ap n fierbere timp nclzete treptat la apropierea de fierbere, astfel

e fi extins foarte mult, de obicei n 1-2 ore. n special n utilizarea moale, natural expansiv nevoie de 24 de ore

dar cu metoda de nclzire poate fi realizat n cteva ore. Aceast metod nu numai c economisete timp, d
dezinfectarea, eliminarea bacteriilor i a gelului contaminare excludere aerian gel.
soluia de prob

a de prob se filtreaz sau se centrifugheaz pentru ndeprtarea precipitatului, cum ar fi lipide coninnd centrif

sau prin Sephadex G-15 coloan scurt eliminat. Vscozitate de prob nu poate fi mai mare, care conin mai mu

e, maxima separare efect viscozitate. Volumul lichidului probei la volumul patului coloan n conformitate cu cer

e gelului determinat. Proteina eantion gel volum izolat patul de 1-4% (de obicei, aproximativ 0,5-2ml), pentru

id proba pentru 10% din pat gel, desalinizarea soluia proteine, proba pn la gel 20-30% din pat. Fracionarea v

ui trebuie s fie mici, astfel nct stratul de prob este ct mai redus posibil, forma vrfului eluat.

eveni contaminarea microbian

olizaharid dextran i agaroz sunt substane pentru a preveni creterea microbian n cromatografie de gel este
ageni antimicrobieni frecvent utilizate sunt:

moniac stiva (NaN3)

ct cromatografie gel cu 0,02% azid de sodiu pentru a preveni dezvoltarea microorganismelor este suficient,

il n ap, circa 40% la 20 , ea nu interacioneaz cu proteine sau carbohidrai, astfel azid sodiu nu afecteaz

i; nu modific proteine i carbohidrai cromatografie proprieti mei. Azida de sodiu poate interfera cu fluoresce

ichetate.

l [Cl3C-C (OH) (CH3) 2]

grafie gel folosind o concentraie de 0,01-0,02%. n soluie acid, acesta este cel mai bun efect bactericid, n sol

u temperaturi mai mari de 60 descompunere poate duce la insuficienta.

o etil mercur nlocuind salicilat de sodiu

grafia de gel ca agent bacteriostatic, cu o concentraie de 0.05-0. 01%. Soluia acid este cea mai eficient. Gen

ci pot etil substan tiol obligatoriu, i, prin urmare, conine proteine tiol n msur diferit, reducerea efectului in

rcur nlocuitori de sare

grafie gel folosind o concentraie de .001-0.01%. Suprimarea n uor soluie alcalin, cel mai bun, lung atunci c

halogen, ionii azotat i precipitare; reductor poate provoca descompunerea compusului; tiol substana conine

sau inhiba efectul antimicrobian.

e cercetare

nc o mulime de munc de cercetare are mai multe fatete, inclusiv instrumentele, materiale de umplutur, tehn

teoria cromatografia i alte aspecte ale progresului i progresul ntregii cromatografie lichid relevante. Dar sem

dintre urmtoarele patru tendine de cercetare demn de remarcat.

a cu alte instrumente folosite pentru a rezolva cromatografie de gel polimer distribuie a greutii moleculare de

lativ normal lege absolut. Distribuia maselor moleculare polimerului msurat prin cromatografie permeaie de

mportante aplicaii. Primul eantion bazat pe dimensiunea molecular (greutate molecular adic) a fiecrui elem

up separarea de greutatea molecular i coninut. Prob n separarea cromatografic de gel se efectueaz n col

ele s fie separate cnd fluxul de coloan n timp continuu la un detector de concentraie i greuti moleculare

etectoare concentrare i greutatea molecular a fiecrei componente, dou semnale de ieire detectorului este o

strrile nregistratorului reflect curba molecular distribuia greutii cromatografiei permisive gel. n trecut, deo

mai sensibil, iar greutatea molecular a rspunsului detectorului tranzitorie, i, astfel, utilizarea unui set de difer

greutate molecular a calibra coloan, i apoi turnat restul de la masa molecular de calibrare Parcela curba pen

datelor. Aceast metod de a detecta o greutate molecular relativ dei rezolva temporar problema, dar crete

volumul de munc i metodele de prelucrare a datelor experimentale au dificulti. Fiabilitatea datelor experime

mare msur pe curba de calibrare, valorile standard de mas molecular i fiabilitatea metodei de prelucrare

care eficiena de separare coloana nu este satisfctoare vrf lrgire cauzat de efectele o corecie, nu numai me

tal este greoaie, iar prelucrarea datelor este mai complex i necesit un calculator pentru a calcula. Prin urma

e specialitate se spune ca a fost recomandat de multe mai mulumii de modul de calcul, dar acest lucru nu est

a o soluie fundamental. Numai gsi cu adevrat absolut detector greutate molecular, problema considerat o

Multe dintre metoda original determinarea masei moleculare, pentru c nu este suficient de sensibil pentru a fa

ranzitoriu nu se poate aplica cu succes cromatografie gel.

hi mic cu laser difuzia luminii (LALLS) ca detector de greutate molecular pentru a obine un rezultat mai bun. D

tale nu are nevoie de curbe de calibrare, nu este nevoie de vrf lrgirea corectat.
laserului de preferin, o putere mai mare, pentru a permite un unghi mai mic dect soluia diluat se msoar

a luminii difuze, care poate calcula direct mas molecular medie aproximativ molecular fr a fi necesar, cu

te clasice usoare imprastiate date, ct i asupra concentraiei i unghiul mprtiere pentru extrapolarea dublu l

tal, gel cromatografia i mic-unghi laser, mprtierea luminii combinata cu, v putei conecta direct la un calcul

a datelor. Dup primul experiment, datele necesare pot fi obinute dintr-o dat. GPC-LALLS pare a fi o valoare mu

Lumina mic-unghi cu laser instrument de mprtiere a nceput comercializarea este de ateptat n curnd vor ex

i pentru a ilustra, n msura n care a fost rezolvat de penetraie n gel cromatografia relativa determinare a tra

e absolut. Concentraia detectorului cromatografie gel i ca cromatografia lichid de obicei este nc o legtur

ontinua cutarea unui detector de bun. Este nc detector de indice de refracie mai frecvent utilizat i un dete

i urban titrare turbiditate cu un dispozitiv automat pentru a face un detector de concentraie a primit, de asem

ct, n special n determinarea distribuiei maselor moleculare copolimer binar i distribuie compoziia, efectul e

v. Jorgenson cealalt parte a metodei difuzia luminii dat Cantitatea leiere solvat, dar, de asemenea, s-au doved

mai sensibil. Francois cealalt fa cu un densitometru pentru a verifica concentraia, prevzut un alt mod de det

Alii, cum ar fi spectrometrie de mas i spectroscopie de absorbie atomic i cromatografie permeaie de gel p

combinate. Cu aplicarea expansiune, cromatografie de gel poate fi utilizat pentru a determina polimerii ramifi

g gradul de ramificare.

afie de gel de nalt performan

l de cromatografie lichid, lichid cromatografie lichid de nalt performan cromatografie substituit tendin cl

d. Acest lucru se datoreaz teoria cromatografie, tehnici de preparare materiale de umplutur i instrumente de

raional a trei aspecte ale dezvoltrii n comun a rezultat inevitabil. Cromatografie de gel la dezvoltarea de nal

i, de asemenea, un sentiment mai mare progres, deoarece gel cromatografie, avnd n acelai timp mai multe a

onsiderat a fi o eficien de separare relativ sczut, de capacitate mic vrf coloan i tehnologia lent. n domen

i de baz non-polimer nu a fost utilizat corespunztor.

Anterior 2 Urmtor Selectai Pagini

2

Vocabular Caut
Cauta

| | Libertatea de a publica cunotine vocabular

Drepturi de autor @2015 Lume cunotine enciclopedice

n cromatografie gel clasic, mrimea particulelor de umplutur este utilizat,

n general, 37-75 . Lungimea coloanei 12 picioare sau mai mult, diametrul
7,8 mm coloan, debitul este de obicei 1 ml / min. n aceste condiii, un timp
de ncercare este adesea necesar trei ore. Accelera debitul va reduce
eficiena de separare, deoarece gel cromatografie este un proces de
separare controlat prin difuzie, difuzia polimerului n soluie este lent, care
este legat de limitrile de debit. Vrfuri de gel cromatografice datorit
capacitii mai mici i dimensiunea mecanism de separare excludere
aferente. Aceste defecte au fost nc s fie depite eficiena coloanei mult
mbuntit. De nalt performan gel cromatografic ambalaje sintez reuit,
precum i coloana de eficiente ambalare dezvoltarea tehnologiei, pentru a
realiza o mbuntire a eficienei coloan, n scopul de a realiza timpul
experimental este scurtat, vrf ngustarea lime i creterea capacitii de
vrf.

Acum mrimea particulelor de umplutur de 10 distribuiei maselor

moleculare se poate face timpul de msurare de la o perioad de trei ore
pentru zece minute, de data aceasta chiar mai mult dect un polimer ntr-un
solvent, timp mai scurt necesar pentru dizolvare. A fost folosit n industrie ca
o acceptare ordin cromatogram gel desemnat produs distribuiei maselor
moleculare polimerului. Din moment ce nu taxe au mult timp pentru a face
condiiile de testare, compusi cromatografie n gel n domeniul general de

uurina de aplicare i alte tipuri au fost n msur s concureze cu

cromatografie de lichide de nalt performan.
Referine

GPC - Gel Permeation Chromatography

GPC Introduction

Why is GPC important?

How GPC works

GPC systems
Gel permeation chromatography (GPC) is one of the most powerful and versatile analytical techniques
available for understanding and predicting polymer performance. It is the most convenient technique
for characterizing the complete molecular weight distribution of a polymer.
Waters commercially pioneered GPC in 1963. Since then, Waters has continued to develop and explore
new GPC applications and improve the instrumentation that makes GPC so powerful.

Why is GPC important?

GPC can determine several important parameters. These include number average molecular weight,
weight average molecular weight, Z weight average molecular weight, and the most fundamental
characteristic of a polymer its molecular weight distribution.
These values are important, since they affect many of the characteristic physical properties of a
polymer. Subtle batch-to-batch differences in these measurable values can cause significant
differences in the end-use properties of a polymer. Some of these properties include:

Tensile strength

Adhesive strenth

Elastomer relaxation time

Cure time

Brittleness

Elastic modules

Flex life

Melt viscosity

Impact strength

Hardness

Toughness

Softening temperature

Drawability

Tear Strength

Adhesive tack

Stress-crack resistance
Coefficient of friction

Materials characterization
Understanding the makeup of a polymer is particularly important due to the variety of resins available
for the same purpose, the high cost of specialty resins or compounds, and the value added to the
polymer during manufacturing. For example, the cost of a resin used in a printed circuit board is very
low, but the cost of the finished board is very high. Poor quality resin can result in an unacceptable
finished circuit board.
Where a polymer's end-use application requires precision performance or endurance under harsh
conditions, the need for polymer characterization is particularly acute. Because GPC fulfills these needs
better than any other single technique, it has become an extremely valuable tool for materials
characterization in the polymer industry.

Telling good from bad

Two samples of the same polymer resin can have identical tensile strengths and melt viscosities, and
yet differ markedly in their ability to be fabricated into usable, durable products. These differences can
be attributed to subtle, yet significant variations in the molecular weight distributions of the two resin
samples. Such differences, if undetected, can cause serious product defects.

Though they are subtle, differences such as those shown in the molecular-weight distributions to the left, could
cause marked variations in the performance of the polymer.

In addition to providing the molecular weight distribution, GPC also separates a complex polymeric compound into
its component parts - polymer, oligomer, monomer, and additives.

How GPC works

GPC separates molecules in solution by their "effective size in solution." To prepare a sample for GPC
analysis the resin is first dissolved in an appropriate solvent.
Inside the gel permeation chromatograph, the dissolved resin is injected into a continually flowing
stream of solvent (mobile phase). The mobile phase flows through millions of highly porous, rigid
particles (stationary phase) tightly packed together in a column. The pore sizes of these particles are
controlled and available in a range of sizes.

Cross sectional view of porous particle

The width of the individual peaks reflects the distribution of the size of molecules for a given resin and
its components. The distribution curve is also known as the molecular weight distribution (MWD)
curve. Taken together the peaks reflect the MWD of a sample. The broader the MWD, the broader the
peaks become and vice versa. The higher the average molecular weight, the further along the
molecular weight axis the curve shifts and vice versa.
You can see then how easily the MWD profiles of two resins can be compared. If the MWD profile of an
incoming resin doesn't match that of the control resin (i.e. one that is known to process well) closely
enough, the incoming resin can be modified or process conditions can be changed to make sure the
resin processes properly. If the differences between the control resin and the incoming resin are too
severe, the incoming resin can be returned to the supplier as unacceptable.

The Size Separation Mechanism

Molecules of various sizes elute from the column at different rates. The column retains low molecular weight
material (small black dots) longer than the high molecular weight material (large black dots). The time it takes for
a specific fraction to elute is called its "retention time".

GPC Systems
In designing instrumentation for GPC, a variety of requirements must be satisfied. Injectors are
needed to introduce the polymer solution into the flowing system. Pumps deliver the sample and
solvent through the columns and system. Detectors monitor and record the separation. Data
acquisition accessories control the test automatically, record the results, and calculate the molecular
weight averages. The gel permeation chromatograph contains a number of different components that
work together to provide optimum system performance with minimum effort. Schematic of a basic gel
permeation chromatograph.

Schematic of a basic gel permeation chromatograph

This diagram illustrates how the sample is injected into the mobile phase and the path the sample takes to the
detector.

1. Pump
Pumps the polymer in solution through the system.
Different polymers produce solutions of different viscosities. To compare data from one analysis to the
next, the pump must deliver the same flow rates independent of viscosity differences. In addition,
some detectors are very sensitive to the solvent flow rate precision. Such constant flow must be a
critical feature of the instrument.

2. Injector
Introduces the polymer solution into the mobile phase.
The injector must be capable of small volume injections (for molecular weight determinations) and
large volume injections (if fraction collecting is desirable). The injector should not disturb the
continuous mobile phase flow. It should also be capable of automatic multiple sample injection when
the sample volume is large.

3. Column Set
Efficiently separates sample components from one another.

High efficiency columns give maximum separating capability and rapid analyses. Every column must
provide reproducible information over extended periods for both analytical and fraction collecting
purposes.

4. Detector
Monitors the separation and responds to components as they elute from the column.
Detectors must be nondestructive to eluting components if they are to be collected for further
analysis.
In addition, the detectors must be sensitive and have a wide linear range in order to respond to both
trace amounts and large quantities of material if necessary.
Since all compounds refract light, the differential refractometer (RI) is referred to as a "universal"
detector. As a result it is the most widely used detector to monitor molecular weight distribution. The
refractive index of polymers is constant above approximately 1000 MW. Therefore, the detector
response is directly proportional to concentration.
Beside information about molecular weight averages and distribution obtained with RI, the use of UV
absorbance detectors may provide information about composition, while on-line light scattering
detectors and viscometers provide information about polymer structure.

5. Automatic data processing equipment

Automatically calculates, records, and report numerical values for Mz, Mw, Mv, Mn, and
MWD.
Data systems can also provide complete control of GPC systems so that large numbers of samples can
be run unattended and raw data can be automatically processed. Today's GPC software offerings need
to be able to provide special calculations for multi-detection processing, band broadening correction,
special calibration routines and polymer branching determination, just to name a few.