COMPUSI CHIMICI DE

BIOSINTEZA
ACIDUL CITRIC
Acidul citric
a fost izolat pentru prima dat din sucul de lmie de ctre
chimistul suedez Carl Scheele n 1784;
este un produs intermediar de metabolism aproape universal,
fiind prezent n urme n aproape toate plantele i animalele;
prima producie comercial din fructe de lmie a fost
nregistrat n Anglia n 1826;
n 1893 Wehmer remarc acumularea de acid citric ntr-un
mediu cu coninut de zaharuri n prezena fungiei Citromyces
in 1917 Curie descoper c anumite tulpini de Aspergillus niger
prezint o cretere abundent, iar n timpul creterii produc
cantiti mari de acid citric;
n 1923, n SUA., are loc dezvoltarea primei producii industriale
de acid citric si se datoreaz companiei Pfizer;
Domenii de utilizare
- se bazeaz pe proprietile sale acidulante,
conservante, antioxidante, potenare de
arome, dar i de chelare
Microorganisme productoare
pe substraturi zaharoase: Mucor piriformis, Penicillium luteum, P.citrinum, P.
restrictum, Talaromyces sp., Apergillus niger, A. clavatus, A. wentii, A. fumaricus, A.
awamori, A. nidulans, A. fonsecaeus, A. luchensis, A. phoenicus,Trichoderma viride
etc.
din fraciuni de n-parafine: Arthrobacter paraffineus, specii de
Corynebacterium, Penicillium restrictum i diferite specii de drojdii din familia
Candida (lipolytica, oleophila, citrica)
au fost utilizate la scar industrial pe diferite substraturi speciile Candida
incluznd C. tropicalis, C. catenula, C. guilliermondii i C. intermedia dezavantaj:
produc alaturi de acid citric cantitati destul de importante de acid i-citric;
importan practic prezint numai Aspergillus niger, datorit obinerii
unor randamente ridicate de acid citric dintr-o gam destul de variat de
substraturi zaharoase.
Biochimia acidului citric
Ciclul Krebs
Materii prime
Surs de carbon - gam bogat de materii prime cu coninut de mono- sau
dizaharide (glucoza, fructoza, zaharoza, maltoz) ca melasa de sfecl,
respectiv trestie de zahr, hidrolizate de amidon, melas de citrice, deeuri
de fructe (ananas, fructe palmier dup extracia uleiului) subproduse din
industria berii.
se impune purificarea melasei, care poate fi realizat fie prin reinere pe
schimbtori de ioni, crbune activ, bentonit, fie prin precipitare cu
ferocianur de potasiu i acid sulfuric la 80-100
0
C/15 min.
mutani de Yarrowia lipolytica au fost testai cu succes pe substraturi cu
glicerin rezultat de la fabricarea de biodiesel, ape reziduale de la
fabricarea uleiului de msline, sau deeuri de ananas.
Materiile prime complexe, nu necesit suplimentare de surs de azot. In
mediile simple sursa de azot este asigurat de amoniac sau sruri de
amoniu (azotat sau sulfat), care pot fi suplimentate cu surse organice de
azot (extract de porumb, hidrolizate proteice).
Tehnologii de fermentaie
Cultura de suprafa
Materia prim: melas, purificat, diluat pn la o concentraie de zahr
de aprox. 15%, iar pH = 5-7;
Inocularea se realizeaz direct cu spori;
Fermentator celular - celulele fermentatorului au o capacitate de 50
100 L i o suprafa de 5 m
2
, grosimea stratului de mediu 5 - 20 cm;
Temperatura 28-30
0
C;
pH-ul dup 24 h scade la valoare 2;
Aerare cu aer steril, umiditate 45-60%, debit variabil funcie de faza de
cretere;
Producia de acid citric incepe dup 2-4 zile;
Durata: 8 15 zile;
Randament 70-95% (57-77% din cel teoretic);
Productivitatea trebuie s fie de peste 1 kg ac. citric/ (m
2
strat
micelarzi).
1.- vas preparare substrat;
2.- filtru de aer;
3.- saturator;
4.- preincalzitor aer;
5.- fermentator celular;
6.- vas colector mediu;
7, 11, 13.- filtre;
8.- vas spalarea micelii;
9.- vas colector filtrat;
10.- vas precipitare citrat
de calciu;
12.- vas acidulare;
14.- rezervor acid brut;
15.- filtru presa;
16.- evaporator;
17.- cristalizor

Schema de principiu a instalatiei de fabricare a acidului citric
din melasa prin cultura de suprafata
Cultura submers
nltur principalele dezavantaje ale culturii de suprafa, necesit manoper
mai mic, ocup un spaiu mai redus i conduce la productiviti mai mari;
fermentatoarele, de diferite tipuri constructive (cu amestecare mecanic, tip
coloan sau air-lift) sunt confecionate din oel inoxidabil de nalt puritate,
datorit mediului puternic acid i a capacitii acidului citric de a dizolva ioni
metalici; sunt echipate cu sisteme eficiente de aerare;
surs de carbon: - se utilizeaz att melas ct i hidrolizate de amidon, a
cror concentraie n substrat se fixeaz la 15-20%.
inoculul se prepar ntr-un reactor de mic capacitate, n care condiiile sunt
modificate n sensul favorizrii unei etape rapide de cretere, etap care
dureaz 18-30 h.
Fermentaiile se desfoar n fermentatoare de 100-200 m
3
, la temperaturi
de cca. 30
0
C.
Principalii factori de influen n fermentaia citric sunt:
compoziia mediului de cultur (natura i concentraia sursei de
carbon, concentraia de azot i fosfor, concentraia de
microelemente Zn, Mn, Fe, Cu, metale grele i metale alcaline).
Anumii nutrieni trebuie s fie n exces (zaharide, protoni,
oxigen), altele trebuie limitate in mediu (azot i fosfor), iar unele
componente ale materiei prime trebuie s rmn sub anumite
limite bine definite (de ex. urmele de metale, n special Mn).
Monozaharidele (glucoza i fructoza), care rezult din hidroliza
zaharozei din melas nu sunt echivalente din punct de vedere al
asimilrii de ctre fungie. Fructoza este asimilat mai lent, iar
viteza sa de asimilare scade semnificativ o dat cu acumularea n
mediu a acidului citric.

Compoziia substratului n culturile submerse
Component, g/L Etapa de sporulare/
cretere
Etapa de producie
Zaharoz 140 140
Bactoagar 20 0
NH
4
NO
3
2.5 2.5
KH
2
PO
4
1.0 2.5
MgSO
4
7H
2
O 0.25 0.25
Ioni de Cu 4.810
-3
610
-5

Ioni de Zn 3.810
-3
2.510
-4

Ioni de Fe 2.210
-3
1.310
-3

Ioni de Mn 110
-3
110
-3

morfologia fungilor filamentoi variaz ntre pelei i filamente
libere, funcie de condiiile de cultur, respectiv de tulpina
productoare. Amestecarea intens este asociat cu formarea de
filamente scurte, groase i puternic legate, care au o
productivitate ridicat de acid citric. O amestecare intens
poate conduce la ruperea filamentelor. n culturile de Aspergillus
niger s-au observat cicluri de fragmentare micelial i recretere,
fenomene favorabile produciei de acid citric.
Formarea de pelei prezint ca avantaj o mai facil amestecare,
consumul energetic fiind mai redus. Trecerea de la forma de
pelei la un miceliu filamentos conduce la o scdere cu 50% a
concentraiei de oxigen dizolvat la un debit constant de aer.

pH-ul mediului de cultur este important n dou etape diferite ale
fermentaiei. n etapa de germinaie a sporilor pH-ul mediului trebuie
s fie mai mare de 5, n timp ce n etapa de producere a acidului citric
necesit un mediu puternic acid, pH 2. pH-ul puternic acid previne
contaminarea culturii cu alte microorganisme i inhib formarea unor
produse secundare nedorite (acid gluconic, oxalic), facilitnd
separarea acidului citric din mediul de fermentaie.
Aerarea este un factor semnificativ care afecteaz costul de
producie. Productorii de acid citric au constatat faptul c variaii ale
gradului de aerare n culturile discontinue poate avea efecte
dramatice asupra produciei de acid. n practica industrial se
realizeaz un grad relativ redus de aerare n etapa iniial (0.1 m
3
/(m
3

mediumin)), mrindu-se apoi n etapa de cretere la 0.5 1 m
3
/(m
3

mediu min). La un asemenea grad de aerare apare fenomenul de
spumare pentru limitarea cruia se utilizeaz diferite dispozitive i
ageni antispumani.

Schema instalaiei submerse de fabricare a acidului citric
1.substrat; 2, 9. coloane demineralizare; 2a. pasteurizator; 2b. rcitor;
3. inocul; 4. fermentator; 5, 6, 8, filtre; 7. vas acidulare; 10. coloana decolorare
carbune activ; 11, 14. evaporator; 11a, 14a, cristalizor; 12, 15. centrifuga;
13. vas dizolvare, 16. usctor; 17. ambalare
Cultura n faz solid
Utilizarea microorganismului productor (miceliu de Aspergillus
niger) n form imobilizat pe diferite suporturi (spum
poliuretanic, perle de alginat, agar, colagen, gel de poliacrilamid
etc), att n culturi de suprafa ct i n culturi submerse, conduce
la obinerea unor viteze mai mari de producere a acidului citric, n
special la concentraii mai mari de glucoz. De asemenea, este
atractiv posibilitatea recirculrii biomasei.

- s-a dezvoltat n Japonia pe deeuri de fructe i de orez. Ulterior au
fost testate resturile de sfecl, respectiv trestie de zahr, care au un
pre sczut dar ofer o suprafa mare de dezvoltare pentru
microorganisme. Dup sterilizare cu abur, suportul este mbibat cu
mediul de cultur, n care drept surs de carbon se folosete amidon
sau celuloz i se inoculeaz prin sprayere cu spori de A. niger. Fungia
produce suficiente celulaze i amilaze pentru hidroliza sursei de
carbon. Temperatura de incubare este de cca. 30
0
C. Durata procesului
este de 4-5 zile. Dezavantajul procedeului const n randamentele
sczute.
Separarea acidului citric
din mediile de fermentaie
Metoda precipitrii
Dezavantajele procedeului:
consum mare de reactivi chimici
(var-579 kg/t, acid sulfuric-765
kg/t) i 18 m
3
de ap;
obtinerea unor cantitati importante
de deseuri (sulfat de calciu-
aprox.1t/t acid citric)

Procedee alternative
Extracia cu solveni, insolubili sau cu o solubilitate extrem de
redus n ap. Drept solveni a fost testat o gam variat de
compui organici (alcooli, cetone, esteri, eteri, compui
organo-fosforici, amine), datorit ns toxicitii acestora, doar
procedeele utiliznd amine au aviz favorabil de utilizare pentru
industria alimentar, respectiv farmaceutic.
Separarea pe schimbtori de ioni este fezabil doar n cazul
utilizrii unor materii prime cu puritate ridicat. Se pot utiliza
anionii slab bazici, impregnai cu amine teriare sau piridin,
sau anionii puternic bazici, cu grupe funcionale cuaternare de
amoniu. Necesarul mare de efluent, obinerea de soluii
diluate de acid citric i necesitatea regenerrii schimbtorului
de ioni rmn ca principalele tare ale procedeului.
Extracia reactiv cu membrane lichide, respectiv membrane emulsionate
lichide n care diveri extractani organici complexeaz reversibil cu
acizii. Drept extractani pentru acidul citric se pot utiliza aminele
teriare care au dat cele mai bune rezultate n extracia cu solveni.
Dintre avantajele procedeului se pot enumera:
realizarea unor grade avansate de recuperare (de peste 97%) chiar i
la o singur contactare, cu posibilitatea realizrii unei concentrri
concomitent cu etapa de extracie,
consumul energetic mai redus,
generarea unor cantiti mai reduse de deeuri, precum i
un volum mai mic al instalaiei de separare.
Utilizarea membranelor lichide suportate nu a fost adoptat la scar
industrial, n principal datorit stabilitii reduse a membranei n
timp. Datorit obinerii unor grade avansate de recuperare i a
realizrii concomitent a concentrrii acidului citric, procedeul are
mari perspective n recuperarea acidului citric din soluii diluate.

Separarea prin electrodializ, utiliznd membrane bipolare, realizeaz
un grad avansat de recuperare. Procedeul nu cunoate nc o
aplicare la scar industrial n special datorit consumului relativ
ridicat de energie, a costului i duratei de via a membranelor.
O separare i concentrare continu a acidului citric din mediile de
fermentaie se poate realiza prin ultra-, respectiv nanofiltrare.
Aceste procedee membranare pot fi extrem de benefice la scar
industrial pentru recuperarea acidului citric datorit avantajelor pe
care le prezint:
consum energetic sczut,
lipsa de deeuri n comparaie cu metodele chimice convenionale i
posibilitatea realizrii lor n flux continuu.
Cu toate acestea necesit nc studii de verificare i optimizare la
scar pilot i industrial.