EFECTUAREA ȘI

COLORAREA
FROTIURILOR
 EFECTUAREA FROTIURILOR
Are drept scop etalarea în strat cât mai
subţire şi uniform a celulelor în vederea
evaluării lor la microscop.
Se pot folosi mai multe metode, cele mai
folosite fiind prin întindere, amprentare şi
strivire.
Prin strivire se pot efectua simultan două
frotiuri
Presiunea excesivă poate duce la ruperea
celulelor.
 PRECIZĂRI
Specificaţi pe banda abrazivă datele de
identificare a cazului şi locul prelevării
probei (când recoltarea se face din mai
multe locuri).
Folosiţi creion negru; marker-ul (inclusiv
cel permanent) interferează cu coloranţii şi
se şterge cu uşurinţă .
Evitaţi etalarea frotiului până la capătul
lamei, această zonă fiind dificil de
examinat la microscop.
TEHNICI DE COLORARE
FOLOSITE ÎN
DIAGNOSTICUL
CITOPATOLOGIC
Metodele de colorare se bazează pe
absorbţia şi fixarea colorantului
după afinitatea pe care diferiţii
constituenţi celulari, acizi sau
bazici, o au pentru componetele
acide, bazice sau neutre ale soluţiei
colorante
TEHNICI UZUALE DE COLORARE

Cele mai folosite metode de

colorare folosite în citodiagnostic
sunt: colorațiile tip Romanowsky și
tip Papanicolaou.
COLORAȚII TIP ROMANOWSKY

May-Grunwald Giemsa
Giemsa rapidă
Coloraţia rapidă Diff-Quick
Wright – S.U.A
Leishmann – Marea Britanie
 COLORAŢIA MAY-GRUNWALD
GIEMSA
Este perfect adaptată studiului morfologiei
celulelor la microscopul optic
Permite evidențierea tuturor structurilor
celulare, nucleare și nucleolare, detalii
esențiale pentru diferențierea proceselor
inflamatorii de cele tumorale și de evaluare
a criteriilor de malignitate
 COLORAŢIA MAY-GRUNWALD
GIEMSA
Este tehnica cea mai frecvent folosită
Este supranumită “panoptică”
Foloseşte două amestecuri de coloranţi:
May Grunwald – (eozinat albastru de metilen
+ glicerină neutră + alcool metilic)
Soluţia Giemsa – (eozinat de azur II + azur II
+ glicerină neutră + alcool metilic)
Colorantul May-Grunwald foloseşte la
fixarea frotiului
Colorarea propriu-zisă se realizează numai
după ce i se adaugă apă
Cele două componente (colorant+apă) se
vor asocia şi vor colora granulaţiile din
celule, mai puţin cele azurofile
Soluţia Giemsa colorează nucleii,
citoplasma şi granulaţiile azurofile
 TEHNICA DE COLORARE
Deasupra unei tăvi se pune un suport
de sticlă de forma literei U
Se aşează lamele pe suport cu frotiul în
sus
Se acoperă lamele cu un număr
cunoscut de picături se soluţie May-
Grunwald (6-8-10 picături), astfel încât
frotiul să fie complet acoperit
Timpul de fixare – 2 minute
Fără să îndepărtăm soluţia M-G, se
acoperă frotiul cu acelaşi număr de
picături de apă distilată, cu pH neutru
Colorarea durează 2 - 3 minute
Se prepară extemporaneu sol. Giemsa
din apă distilată şi soluţie Giemsa
concentrată (mamă): 2 picături de sol.
Giemsa la 1 ml apă distilată
Se varsă soluţia M-G de pe frotiu
Se spală frotiul cu apă distilată
Se aplică sol. Giemsa (2-3 ml/lamă), astfel încât
frotiul să fie acoperit complet, într-un strat
uniform
Timp de colorare 20-30 minute
Se spală cu apă distilată sau de robinet sub jet
moderat
Se clarifică frotiurile rapid în alcool sanitar
Se tamponează cu hârtie de filtru
Se examinează la microscop cu obiectiv 10, 20,
40, 100 (imersie).
REGULI DE BAZĂ:
Se vor folosi coloranţi de foartă bună
calitate (ex. Merck)
Se vor respecta timpii de fixare şi colorare
Se va respecta pH-ul apei distilate (6,8)
Amestecul între sol. M-G şi apă va fi cât
mai omogen, pentru o colorare uniformă a
întregului frotiu
Spălarea finală se va face cât mai corect
pentru a nu rămâne frotiul pătat
 INTERPRETARE
Nucleii se colorează roşu-roz-violet
Citoplasma - albastru închis sau deschis, roz
sau cenuşiu-violet, în funcţie de conţinutul în
ARN
Granulaţiile neutrofile – roz-deschis
Granulaţiile eozinofile - portocaliu
Granulaţiile bazofile - violet închis