Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
=
n care&
3 - aciditatea n procente'
n - numrul de mililitri de soluie de hidro0id de sodiu +5n consumai la
titrare'
f - factorul soluiei de hidro0id de sodiu +5n'
t - cantitatea de acid #g$ echivalent unui mililitru de soluie de hidro0id de
sodiu +5n'
d - volumul total al e0tractului #volumul balonului cotat$'
a - masa probei analizate #g$'
v - volumul e0tractului luat pentru titrare #ml$.
+. O"e (.onoglucide= .ono"a>aride= .ono"e
Ozele sunt hidro0ialdehide sau hidro0icetone. .le pot fi considerate ca
rezult"nd din poliolii alifatici prin o0idarea grupelor funcionale hidro0il. Dintre
ozele naturale cele mai importante se consider a fi pentozele i he0ozele.
*eac-ia !ollens
%rincipiul reaciei
Cn prezena ozelor reductoare #aldoze$ azotatul de argint n mediu
alcalin la cald este redus la argint metalic care se depune pe pereii eprubetei sub
forma unei oglinzi. %eaciile care au loc sunt&
*9
$
-
NO #N< : < 3g $
-
O< #N< : $
-
NO #3g :
D 7 : : 7 D
+ + + + + +
+ + +
9 9
9 9 Ag
: : D 7 :
< D $
-
O< [ $ 3g#N< \ # : $
-
O< 7#N< + + + +
+ +
&eacti$i
5. glucoz soluie :,
:. azotat de argint soluie apoas :,
D. amoniac soluie diluat :,
7. hidro0id de sodiu soluie concentrat #7+ - *+,$.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc 5-: ml soluie azotat de argint :, se adaug
apoi amoniac pictur cu pictur p"n se dizolv precipitatul format iniial se
mai adaug o pictur de hidro0id de sodiu concentrat i apoi : ml soluie de
glucoz. -e omogenizeaz coninutul i apoi se nclzete uor la flacr. -e
observ depunerea argintului pe pereii eprubetei.
*eac-ia 1e>ling
%rincipiul reaciei
)n mediu alcalin ozele reduc hidro0idul cupric cu formare de o0id cupros
#;u
:
O$ care se depune sub forma unui precipitat rou-crmiziu.
?ecanismul reaciei este urmtorul& sulfatul de cupru din soluia 8ehling C
#soluie de ;u-O
7
$ reacioneaz cu hidro0idul de sodiu din soluia 8ehling CC
#amestec de soluii de sare -eignette - tartrat dublu de sodiu i potasiu - i
hidro0id de sodiu$
#;u
:E
E -O
7
:-
$ E :#Na
E
E O<
-
$ M #:Na
E
E -O
7
:-
$ E ;u#O<$
:
<idro0idul cupric de culoare albastr n prezena glucozei sau a altor oze
care au gruparea glicozidic liber la cald este redus la hidro0id cupros de
culoare galben.
.Cu(13)
.
4 13C (C313)
n
C3
.
13 2 . Cu13 4 3
.
1 4 311C (C313)
n
C3
.
13
oza acid aldonic
Prin nclzire hidro0idul cupros se deshidrateaz transform"ndu-se n
o0id cupros.
:;uO< M ;u
:
O E <
:
O
&eacti$i
5. glucoz soluie :,
:. soluie 8ehling C #7+ g ;u-O
7
dizolvate n 5+++ ml ap distilat$
D. soluie 8ehling CC #5*+ g NaO< E :++ g sare -eignette dizolvate n 5+++ ml
ap distilat$
;odul de lucru
>+
C
O
H
(CHOH)
n
CH
2
OH
+ 2 (*%g(+H
3
)
2
,
+
+ OH
-
)
C
O
OH
(CHOH)
n
CH
2
OH
+ 2 %g + ! +H
3
+ H
2
O
)ntr-o eprubet se introduc cu pipeta 5-: ml din soluia de analizat
#glucoz :,$ i apoi se adaug 5 ml licoare 8ehling #amestec proaspt preparat
din soluiile 8ehling C i 8ehling CC n proporie de 5 & 5$. ;oninutul eprubetelor se
nclzete p"n la fierbere. -e observ depunerea unui precipitat rou-crmiziu.
-area -eignette are rolul de a menine ionii cuprici n soluie sub form de
comple0 tartro-cupric.
*eac-ia cu al/astru de .etil
%rincipiul reaciei
Ozele reductoare sunt o0idate cu formarea acidului aldonic respectiv iar
soluia de albastru de metil este redus cu formarea leucoderivatului #derivat
incolor$.
&eacti$i
5. glucoz soluie 5,
:. carbonat de sodiu soluie :,
D. albastru de metil soluie 5,.
;odul de lucru
Fa : ml soluie de glucoz 5, se adaug D picturi soluie carbonat de
sodiu :, i * picturi soluie albastru de metil 5,. 3mestecul astfel obinut se
nclzete pe o baie de ap. -e observ decolorarea treptat a coninutului
eprubetei.
8orma redus incolor a colorantului n contact cu o0igenul din aer
cedeaz acestuia : atomi de hidrogen cu formare de ap i reapariia formei
colorate.
*eac-ia cu acidul 'icric
%rincipiul reaciei
Ozele reductoare reduc acidul picric n mediu alcalin la cald
transform"ndu-l n acid picramic.
>5
CHO
CHOH ( )
!
CH
2
OH
+
Cl
CH
3
CH
3
-
+
+
+
S
+
CH
3
CH
3
+ H O
2
CHOH ( )
!
COOH
CH
2
OH
+
+
H
S
+H
CH
3
CH
3
+
Cl
-
+
CH
3
CH
3
glucoza
albastru de #etil
acid gluconic
leucoderi-atul albastrului de #etil
O
CH
CH
2
OH
OH ( )
!
+ (CHOH)
!
C
CH
2
OH
OH
+O
2
+O
2
+O
2
+H
2
OH
+H
2
O+
2
+O
2
+
OOH
acid $icric
aldohe(oza
acid $icra#ic
acid aldonic
C H
&eacti$i
5. glucoz soluie 5, sau alt glucid reductor
:. acid picric soluie +*,
D. hidro0id de sodiu soluie 5+,.
;odul de lucru
Cntr-o eprubet se introduc 5-: ml soluie de analizat se adaug : ml
soluie de acid picric +*, i 5 ml soluie de hidro0id de sodiu 5+,. Prin fierbere
culoarea galben a acidului picric trece n rou.
*eac-ia :eli(ano(
%rincipiul reaciei
;etozele #fructoza$ prin nclzire n prezena acidului clorhidric i a
rezorcinei coloreaz soluia n rou-viiniu sau rou. %eacia -elivanov este
specific pentru cetoze permi"nd identificarea acestora din amestecurile cu
aldoze deoarece acestea din urm dau produsul colorat mult mai lent #aproape de
:+ de ori$.
&eacti$i
5. fructoz soluie 5,
:. reactiv -elivanov& n 5++ ml soluie de acid clorhidric :+, se dizolv ++* g
de rezorcin
D. acid clorhidric soluie :+,& 7*ml acid clorhidric d M 559 se dilueaz p"n la
volumul de 5++ ml.
>:
O
C
C
C
C
CH
2
OH
OH
HOCH
2
H
HOH HOH
te#$eratura
3 H
2
O
C C
C C
O
CHO HOCH
2
H H
OH
OH
OH
H
OH
H
+
- 2 H O
2
rezorcina
O
C C
CH
HOCH
2
OH
OH
C
C H
H
O
2 2
+ H O
- H O
2
O
C
HOCH
2
C
O
OH
C H CH
O C C
fructoza (for#a furanozica)
hidro(i#etil-furfurol
$rodus colorat rosu--isiniu
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se pipeteaz 5 - : ml soluie -elivanov la care se adaug : -
D picturi de soluie de fructoz. .prubeta se nclzete pe o baie de ap p"n la
fierbere c"nd apare comple0ul colorat.
*eac-ia Molisc>?Udrans@i
%rincipiul reaciei
(lucidele dau cu alfa-naftolul n prezena acidului sulfuric concentrat
compui colorai n violet. %eacia este urmtoarea&
&eacti$i
5. soluie de glucid 5 - :, #glucoz$
:. soluie alcoolic proaspt preparat de alfa-naftol 5,
D. soluie de acid sulfuric concentrat d M 567.
;odul de lucru
-e introduce ntr-o eprubet apro0imativ 5 ml din soluia de analizat se
adaug D - 7 picturi din soluia de alfa-naftol i se agit coninutul. -e prelinge cu
atenie pe pereii eprubetei nclinate 5 ml de acid sulfuric concentrat fr a se
agita ulterior eprubeta. Fa suprafaa de separare a celor dou lichide apare un inel
colorat n viiniu.
,. Oligo"ide
Dintre oligozide diholozidele au importana biologic cea mai mare.
>D
OH
HOCH
2
CH
HOHC CHOH
CH
OH
CHO
H SO
2 !
conc.
- 3 H O
2
C H CH
O
C CHO C HOCH
2
OH
OH
C H CH
HOCH
2
C C CHO
+
- H O
2
O
HOCH
2
C
OH
C
C
aldoza
hidro(i#etilfurfurol
O
alfa-naftol co#$us colorat rosu -isiniu
Caracterul reductor #i nereductor al di>olo"idelor
%rincipiul reaciilor
Diholozidele n care ozele se leag monocarbonilic #maltoza lactoza
celobioza etc.$ au proprieti reductoare. Diholozidele n care ozele se leag
dicarbonilic nu au proprieti reductoare.
&eacia 5ehling
&eacti$i
5. maltoz soluie 5,
:. lactoz soluie 5,
D. zaharoz soluie 5,
7. soluie 8ehling C
*. soluie 8ehling CC.
;odul de lucru
Cn trei eprubete se pipeteaz c"te 7 ml licoare 8ehling format din volume
egale de soluie 8ehling C i CC. -e fierbe coninutul eprubetelor pe o baie de ap.
-e adaug apoi n prima eprubet : ml soluie de zaharoz n a doua : ml soluie
lactoz n a treia : ml soluie maltoz continu"ndu-se fierberea. Cn eprubeta cu
soluie de zaharoz nu apare precipitatul rou-crmiziu aa cum apare n
celelalte dou eprubete cu lactoz i maltoz.
%idroli"a "a>aro"ei (in(ertirea "a>aro"ei
%rincipiul reaciei
Prin fierbere cu acid clorhidric diluat zaharoza hidrolizeaz n
componenii si #glucoz i fructoz$. 4otodat se produce i o inversiune n
activitatea optic a zaharozei. Cnainte de fierbere cu acid clorhidric diluat
zaharoza este de0trogir. Dup fierbere cu acid clorhidric diluat amestecul este
levogir datorit fructozei. Cn urma acestui fapt hidroliza zaharozei poart numele
de invertire iar amestecul zahr invertit prezent"nd proprieti reductoare&
&eacti$i
5. zaharoz soluie :,
:. acid clorhidric diluat 5 & 5
D. carbonat de sodiu cristale
7. soluie 8ehling C
*. soluie 8ehling CC
>. h"rtie de turnesol.
;odul de lucru
>7
O
H
HO
OH
H
H
OH
CH
2
OH
H
H
O
O
H
OH
HO
H
H
CH
2
OH
HOCH
2
O
H
HO
OH
H
H
OH
CH
2
OH
H
H
OH
O
H
OH
HO
H
H
CH
2
OH
HOCH
2
HO
+
+ H
2
O
Cntr-o eprubet se pipeteaza : ml soluie de zaharoz peste care se adaug
:-D picturi de acid clorhidric diluat i se fierbe. Peste soluia fierbinte se adaug
cristale de carbonat de sodiu p"n la neutralizare #n prezena h"rtiei de turnesol$
i apoi licoarea 8ehling dup care se continu fierberea. -e va obine un precipitat
rou-crmiziu de o0id cupros datorit funciei aldehidice a glucozei.
$olio"ide
-unt substane macromoleculare greu solubile sau insolubile n ap nu
prezint caracter reductor i nici proprietile specifice ozelor.
Pentru poliozide este caracteristic reacia de hidroliz acestea prezent"nd
i unele reacii specifice.
*eac-iile a.idonului
&eacia amidonului cu iodul
%rincipiul reaciei
3midonul formeaz la rece cu o soluie de iod n iodur de potasiu o
coloraie albastr ce permite identificarea sa.
3pariia acestei culori se datoreaz adsorbiei iodului la suprafaa
micelelor aflate n soluie. ;oloraia dispare la o temperatur mai mare de >+
o
; i
reapare la rcire.
&eacti$i
5. amidon soluie 5,
:. soluie de iod n iodur de potasiu #5 g iod i : g iodur de potasiu se
completeaz cu ap p"n la 5++ ml$
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc 5 - : ml soluie de amidon i se adaug c"teva
picturi de soluie de iod n iodur de potasiu. 3pare imediat o coloraie albastr.
-e nclzete soluia la fierbere i culoarea dispare imediat. %cind soluia
culoarea albastr reapare.
%idroli"a a.idonului
%rincipiul reaciei
)n prezena enzimelor sau pe cale chimic #n mediu slab acid$
macromoleculele de amidon se scindeaz pe r"nd n molecule ce se pot identifica
prin reacii de culoare. -chematic hidroliza amidonului poate fi reprezentat
astfel&
>*
a#idon a#ilode(trine eritrode(trine acrode(trine
#altode(trine #altoza glucoza
3milode0trinele dau o coloraie violet cu iodul n iodur de potasiu'
eritrode0trinele o coloraie roie-brun' acrode0trinele maltode0trinele maltoza
i glucoza nu coloreaz soluia de iod .
<idroliza se poate urmri i efectu"nd reacia 8ehling cu diferii produi
de hidroliz ce se obin. 3pariia i creterea puterii reductoare a acestora ne
indic faptul c se obin compui cu mas molecular din ce n ce mai mic.
&eacti$i
5. amidon soluie *,
:. acid clorhidric concentrat
D. reactiv 8ehling C
7. reactiv 8ehling CC
*. hidro0id de sodiu soluie D+,.
;odul de lucru
)ntr-un pahar !erzelius se introduc 5+ - :* ml soluie de amidon. -e
adaug 5 ml <;l concentrat i se nclzete pe baia de ap la 6+ - 9+
o
;. -eparat
pe o plac de porelan cu caviti se picur n fiecare cavitate c"teva picturi de
soluie de iod n iodur de potasiu. ;u o baghet se ia n momentul iniial o
pictur de soluie de amidon din pahar i se picur n prima cavitate peste soluia
de iod. -e observ apariia coloraiei albastre. ?enin"nd aceeai temperatur n
baie reacia se repet din timp n timp cca * minute not"ndu-se culorile obinute.
3pariia culorilor diferite indic diferite trepte ale hidrolizei. <idroliza se
consider terminat atunci c"nd o pictur de hidrolizat nu se mai coloreaz cu
iodul. (lucoza rezultat n urma hidrolizei este pus n eviden prin reacia
8ehling e0ecutat cu o poriune de soluie final neutralizat cu o soluie de
NaO< D+,. %eacia va fi pozitiv.
Metode cantitati(e de anali"
?etodele pentru dozarea glucidelor sunt numeroase i variate. Dup o
prim clasificare se mpart n metode chimice i metode fizico-chimice.
?etodele chimice pentru dozarea glucidelor sunt cele mai utilizate. .le se
bazeaz mai ales pe capacitatea glucidelor reductoare de a fi o0idate uor n
soluii alcaline de ctre unii o0idani relativ slabi #o0izi de cupru i mercur
ferocianur de potasiu iod$.
4. Do"area glucidelor reductoare 'rin .etoda iodo.etric
%rincipiul metodei
?etoda se bazeaz pe proprietatea pe care o au aldozele de a putea fi
o0idate la acizii carbonilici #aldonici$ corespunztori sub aciunea iodului n
mediu alcalin conform reaciilor&
>>
+ 2 (+a + OH )
+
-
2
(+a + O ) + (+a + ) + H O
+ -
+
-
2
/ C
O
H
+ (+a + O )
+ -
/ COOH
+
(+a + )
+ -
/ C
O
H
+ + 2 (+a + OH )
+
-
2
/ COOH +2(+a
+
+
-
) + H O
2
2n volum determinat din soluia de analizat se trateaz la rece cu un e0ces
dintr-o soluie de iod i apoi iodul rmas dup reacia cu aldoza se titreaz cu
tiosulfat de sodiu n mediu acid.
&eacti$i
5. soluie de acid sulfuric 7 n #555: ml acid d M 567 la 5+++ ml soluie$
:. amidon soluie 5,
D. carbonat de sodiu 5 n #5:: g carbonat de sodiu cristalizat la 5+++ ml soluie$
7. soluie iod +5 n #5:/ g iod se dizolv ntr-un vas n care se gsesc :* g
iodur de potasiu i :* ml ap' se agit p"n la dizolvare se filtreaz i se
aduce la volumul de 5+++ ml cu ap distilat'
*. tiosulfat de sodiu soluie 5n #5:* g tiosulfat de sodiu cristalizat se dizolv
ntr-un litru de ap distilat fiart i rcit apoi se aduce la volumul de * litri
tot cu ap distilat fiart i rcit$.
;odul de lucru
-e pipeteaz * ml din soluia de analizat #care s nu conin mai mult de
++* g glucoz sau +5 g maltoz sau lactoz$ ntr-un flacon conic cu dop de sticl
lefuit. -e adaug 5+ ml #R
5
$ soluie de iod+5n msurat cu biureta i / ml soluie
de carbonat de sodiu 5n. -e astup flaconul cu dopul se agit uor i se las n
repaus :+ de minute la temperatura camerei ntr-un loc ferit de lumin. Dup
scurgerea acestui interval se aciduleaz coninutul flaconului cu * ml acid sulfuric
7n i se titreaz e0cesul de iod cu o soluie de tiosulfat de sodiu+5n n prezena
amidonului #R
:
$.
Calculul raional
Notaii utilizate&
R
5
M volumul de soluie de iod+5n introdus iniial'
f
5
M factorul soluiei de iod+5n'
R
:
M volumul de soluie de tiosulfat de sodiu+5n folosit la titrare'
f
:
M factorul soluiei de tiosulfat de sodiu+5n
C. ;alcularea e0cesului de iod
-oluia de tiosulfat de sodiu este +5 n deci se poate scrie&
5+++ ml sol. Na
:
-
:
O
D
................ +5
.
:76
.
f
:
g Na
:
-
:
O
D
R
:
ml sol. Na
:
-
:
O
D
........... +5
.
:76
.
R
:
f
:
S5+++ g Na
:
-
:
O
D
;onform reaciei de titrare a e0cesului de iod rezult&
5
D : :
9 S ;a
2
.......... 5
:
-
2
:76 g ..................... 5:/ g
+5
.
:76
.
R
:
f
:
S5+++ g Na
:
-
:
O
D
............... 0 g C
:
0 M +5
.
R
:
f
:
.
5:/S5+++ g C
:
>/
+ 2 (2+a + S O )
2
+
2 3
2-
2 (+a + ) + (2+a + S O )
+ - +
! 0
2-
CC. ;antitatea total de iod& se calculeaz numarul de grame de iod din :*
ml soluie +5n conform relaiei&
+5
.
5:/
.
R
5
.
f
5
S5+++ M b grame C
:
CCC. Codul consumat in reactia de o0ido-reducere &
b - a M c grame C
:
CR. ;antitatea de glucid o0idat #glucoza$ &
56+ g glucoz .............:
.
5:/ g C
:
9+ g glucoz ................. 5:/ g C
:
I g glucoz ....................... c g C
:
I M 9+
.
cS5:/ grame glucoz n 5+ ml soluie
, glucoz M I
.
5+
6. Deter.inarea 'olari.etric a a.idonului du' EAers?Grossfeld
%rincipiul metodei
3midonul se dizolv n acid clorhidric diluat i se citete la polarimetru
deviaia planului luminii polarizate de ctre soluia obinut.
&eacti$i
5. acid clorhidric soluie 55:7,' */* - *6 ml acid clorhidric concentrat pur #d
M 559$ se introduc n circa *++ ml ap distilat i se completeaz apoi
volumul soluiei cu ap distilat la ::* litri'
:. acid clorhidric soluie :*,' se dilueaz >++ ml acid clorhidric concentrat #d M
559$ cu ap distilat p"n la un volum de 5+++ ml'
D. soluie de fosfoAolframat de sodiu' 5:+ g fosfat disodic cristalizat #Na
:
<PO
7
.
5: <
:
O$ i :++ g Aolframat de sodiu cristalizat #Na
:
@O
7
.
: <
:
O$ se dizolv
n ap distilat i se aduce la un volum de 5+++ ml.
;odul de lucru
Fa balana analitic ntr-o nacel se c"ntresc * g material fin mcinat
care se trece fr pierderi ntr-un balon cotat de D++ ml unde se amestec bine
cu :* ml acid clorhidric 55:7, p"n nu se mai observ aglomerri de material.
-e mai adaug :* ml din aceeai soluie de acid clorhidric #55:7,$ pentru
splarea g"tului balonului se amestec uor i se introduce balonul ntr-o baie de
ap fierbinte unde se ine e0act 5* minute #fierberea nu trebuie s se opreasc
dup introducerea balonului$. !alonul se agit des n primele D minute fr a-l
scoate din baie. -e scoate apoi balonul se toarn n el imediat :+ ml ap distilat
rece se rcete c"t mai repede coninutul p"n la temperatura de :+
+
; cufund"nd
i agit"nd balonul ntr-un cristalizor mare cu ap rece. -e adaug apoi :+ ml de
acid clorhidric :*, i 5 ml soluie fosfoAolframat de sodiu. -e aduce coninutul
balonului la semn cu ap distilat se amestec i se filtreaz printr-un filtru uscat
turn"nd filtratul ntr-un vas uscat i elimin"nd primii 5+ ml. -e polarimetreaz
filtratul limpede ntr-un tub de :++ mm av"nd gri1 ca temperatura soluiei s fie
de :+
+
;.
Calculul rezultatelor
;antitatea de amidon brut coninut n produsul de c"ntrit e0primat n
grame este dat de relaia&
>6
A
p
l
p
p
D
=
=
5++ 5++
: 56D/
+ :/::
:+
.
.
n care&
p M grade polarimetrice citite'
l M lungmea tubului polarimetric n decimetri'
D
:+
M deviaia polarimetric specific amidonului care n cazul
soluiilor obinute n modul de mai sus are valoarea medie de E 56D/
+
.
7. 2nali"a calitati( a gliceridelor
1or.area #i identificarea acroleinei
3croleina se formeaz pe seama glicerolului prezent n gliceride precum
i n glicerofosfolipide.
3croleina aldehid nesaturat poate fi pus n eviden printr-o reacie
specific aldehidelor #4ollens 8ehling$.
&eacti$i
5. sulfat acid de potasiu substan solid'
:. reactiv 4ollens #vezi reacia 4ollens$.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc c"teva picturi de ulei vegetal i circa +* g
sulfat acid de potasiu. -e nclzete eprubeta amestecul din eprubet se nnegrete
i se dega1 produse volatile #vapori de ap bio0id de carbon acrolein$. Fa gura
eprubetei se aeaz o f"ie de h"rtie de filtru impregnat cu reactiv 4ollens.
<"rtia de filtru n contact cu acroleina se nnegrete datorit depunerii argintului
metalic din reactiv.
:a'onificarea gliceridelor
Prin hidroliz gliceridele se descompun n glicerol i acizii grai
componeni. )n cazul hidrolizei n mediul alcalin rezult srurile acizilor grai
numite spunuri de unde i numele de saponificare.
>9
C3
.
C3
C3
.
13
13
13
C3
C3
C3
.
13
13
C3
.
C3
C3
.
13
13
13
C
C3
.
C3
.
13
1
3
-3
.
1
C
C3
C3
.
1
3
tautomerizare
- 3
.
1
C
C3
C3
.
1
3
4
acid acrilic
4 . &g 4 8(3
5
43
.
1
C113
C3
C3
.
. 13
-
4 . &g((3
5
)
.
4
4 5 (a13
C3
.
13
13 C3
13 C3
.
4
!9punuri
) C11(a
): C11(a
):: C11(a
C3
.
1 C
1
)
):
1
C 1 C3
C3
.
1 C
1
)::
&eacti$i
5. hidro0id de sodiu soluie 7+ ,'
:. clorur de sodiu soluie saturat.
;odul de lucru
)ntr-o capsul de porelan se introduc D ] 7 g ulei vegetal i > ] / ml
soluie de hidro0id de sodiu de concentraie 7+, #cu cilindrul$.
;oninutul capsulei se fierbe la flacra unui bec pe o sit de azbest sau pe
o baie de nisip timp de :+ ] D+ minute agit"nd continuu cu o baghet de sticl.
Din timp n timp se completeaz apa evaporat prin adugare de ap fierbinte n
aa fel nc"t s se pstreze volumul iniial.
-f"ritul saponificrii se controleaz prin introducerea c"torva picturi din
amestec ntr-o eprubet n care se gsesc * ] > ml ap fierbinte se agit' lipsa
picturilor de grsime indic sf"ritul saponificrii.
)n acest moment se adaug 5+ ] 5* ml soluie cald de clorur de sodiu se
agit cu bagheta i se las s se rceasc.
-punul se ridic la suprafaa soluiei sub forma unui strat solidificat.
8. Deter.inarea indicilor ce caracteri"ea" li'idele
Determinarea unor caractere fizice sau chimice cum sunt densitatea
punctul de topire indicele de refracie de aciditate de saponificare de iod etc ale
grsimilor naturale este important deoarece prin acestea se pot stabili& natura
originea nsuirile tehnologice i n general valoarea diferitelor grsimi cu alte
cuvinte caracterizarea lor.
Deter.inarea indicelui de aciditate
2leiurile i grsimile naturale conin ntotdeauna mici cantiti de acizi
liberi organici aprute prin hidroliza lor din care cauz au o oarecare aciditate. )n
general la materiile grase proaspt preparate aceti acizi se gsesc n proporie
mic cantitatea de acizi liberi crete ns odat cu nvechirea grsimii. Pentru
aceste motive determinarea aciditii libere a unei grsimi e0primat prin Nindice
de aciditateN ne permite s apreciem gradul de conservare al grsimii repective.
Prin Nindice de aciditateN nelegem cantitatea - n mg - de hidro0id de
potasiu necesar neutralizrii acizilor grai liberi dintr-un gram de materie gras.
%rincipiul metodei
?etoda se bazeaz pe neutralizarea aciditii libere a unei anumite cantiti
de grsime cu o soluie alcoolic de hidro0id de potasiu de titru i factor
cunoscut n prezena fenolftaleinei. %ezultatele se e0prim n mg de hidro0id de
potasiu la un gram de materie gras.
/+
Determinarea se poate e0ecuta la rece sau la cald.
&eacti$i
5. solventul neutru& 5 volum alcool etilic E : volume alcool metilic sau un
volum alcool etilic E 7 volume eter etilic'
:. soluie alcoolic de hidro0id de potasiu +5 n& *> g hidro0id de potasiu se
dizolv n minimum posibil de ap distilat i se aduce apoi la volumul de 5+++
ml cu alcool etilic 9> ,'
D. fenolftalein 5,& 5 g fenolftalein se dizolv n 5++ ml alcool etilic de 6+,.
;odul de lucru
Determinarea la rece& se c"ntrete la balana analitic 5 g material de
analizat #ulei$ se adaug 5+ cm
D
amestec solveni #5 volum alcool etilic E 7
volume eter etilic$. -e titreaz la rece cu o soluie alcoolic de hidro0id de potasiu
+5 n n prezen de fenolftalein agit"nd mereu p"n la completa neutralizare.
Dac se presupune o aciditate liber mai mare de * , este de preferat titrarea cu o
soluie de hidro0id de potasiu +* n.
Calculul rezultatelor
Fa titrare s-au folosit R ml hidro0id de potasiu +5 n cu factorul de
corecie f. .chivalentul gram al PO< este *> g. Deci&
5+++ ml PO< +5 n de factor f ......................
-7
" ;0
g PO<
R ml PO< ...................................................0
g
-7 -777
" ;0 +
x
=
Raloarea lui 0 se nmulete cu 5+++ pentru a e0prima conform definiiei
indicele n mg de PO<. %ezultatul se raporteaz la 5 g grsime. Deci valorea
indicelui de aciditate se poate calcula conform relaiei&
G
0 , ; " +
I
&
=
n care&
C
3
reprezint indicele de aciditate'
( reprezint masa de substan luat n studiu n g.
Deter.inarea indicelui de sa'onificare
-e numete indice de saponificare numrul de miligrame de hidro0id de
potasiu necesar pentru a saponifica un gram dintr-o grsime. Determinarea acestei
valori va da indicaii asupra greutii moleculare medii a acizilor grai din
grsimea respectiv.
%rincipiul metodei
Pentru determinarea indicelui de saponificare se supune saponificrii o
cantitate cunoscut de grsime prin fierbere cu o cantitate n e0ces de hidro0id de
potasiu +* n #soluie alcoolic$. Dup terminarea saponificrii se determin prin
titrare cu un acid hidro0idul de potasiu rmas nereacionat #e0ces$' se stabilete
/5
prin diferen cantitatea de hidro0id ce a fost folosit la neutralizarea i
saponificarea grsimii. -e raporteaz la un gram de grsime.
&eacti$i
5. soluie alcoolic de PO< +* n& :6 g PO< se dizolv n c"t mai puin ap
fiart i rcit i se completeaz la 5+++ ml cu alcool etilic 9>^'
:. soluie de <;l +* n i factor determinat& 75 ml <;l d M 559 se aduc la
volumul de 5++ ml cu ap distilat'
D. fenolftalein 5 , n alcool etilic.
;odul de lucru
-e c"ntresc la balana analitic prin diferen ntr-un flacon conic uscat
circa : ] D g grsime. -e adaug apoi n flacon cu o biuret e0act :* ml hidro0id
de potasiu +* n. Fa flacon se adapteaz un refrigerent ascendent rcit cu aer.
-e fierbe moderat timp de 5* minute agit"nd flaconul din c"nd n c"nd.
<idroliza este terminat atunci c"nd n lichidul din flacon nu se mai vd picturi
de grsime. )n acest moment se scoate refrigerentul se adaug : ] D picturi de
fenolftalein care va colora lichidul n rou se titreaz apoi repede la cald cu o
soluie de <;l +* n p"n la dispariia culorii roii. )n paralel e0act n aceleai
condiii se e0ecut o prob martor.
Calculul rezultatelor
Notm&
R
5
- volumul de acid clorhidric +* n folosit pentru proba martor n cm
D
'
R
:
- volumul de acid clorhidric folosit pentru titrarea e0cesului de hidro0id de
potasiu n cm
D
'
f - factorul de corecie al soluiei de acid clorhidric +* n'
( - greutatea materiei grase luate n analiz n grame.
.
PO<
M *> grame'
.
<;l
M D>* grame
5$ R
5
- R
:
M R cm
D
<;l +* n reprezint volumul echivalent de hidro0id de
potasiu consumat la saponificare'
:$ *> g PO< .............................................................D>* g <;l
I ....................................................................
g
-777 .
+ " ; , 50
-777 .
+ " ;0
<
= g de PO< consumai la saponificare
I _ 5+++ M ? mg PO<
G
=
I
6
=
n care ( M cantitatea de grsime luat n analiz.
Pentru aflarea indicelui de saponificare se raporteaz la 5 g grsime.
;onform calculului raional a1ungem la urmtoarea formul pentru
calcularea indicelui de saponificare&
/:
G
.> " ) + + (
I
. -
6
=
#la 5 cm
D
acid clorhidric +* n corespund :6 mg PO<$.
Ralorile indicelui de saponificare la principalele uleiuri vegetale&
ulei de bumbac 595 ] 596'
ulei de floarea soarelui 566 ] 597'
ulei de in 566 ] 59:'
ulei de msline 569 ] 59>'
ulei de porumb 566 ] 596.
Deter.inarea indicelui de iod.
)n constituia lipidelor naturale intr i diferii acizi grai nesaturai ca&
oleic linoleic linolenic. Prezena n molecula lipidelor a acestor acizi confer
grsimilor proprietatea lor caracteristic nesaturarea.
Dintre reaciile de adiie pe care le pot da importan analitic o are adiia
halogenilor la dubla legtur conform reaciei&
-e numete Nindice de iodN cantitatea n grame de iod pe care o poate
adiiona 5++ g materie gras.
Raloarea indicelui de iod este una din constantele analitice importante
care servete la caracterizarea lipidelor naturale.
?etodele de determinare a indicelui de iod se deosebesc prin natura
halogenului i a solventului n care soluia acestuia este preparat.
;etoda 0anus
)n aceast metod se folosete soluie de monobromur de iod #C!r$ n acid
acetic glacial.
%rincipiul metodei
-e trateaz grsimea respectiv cu un e0ces cunoscut de iod cu care se
las n contact un anumit interval de timp dup care se determin prin titrare
cantitatea de iod rmas necombinat. Prin diferena fa de iodul introdus iniial
se afl cantitatea de iod pe care s-a fi0at grsimea.
0 8 . 5 . . .
.
1 6 (a (aI . 1 6 (a . I
I *,r I,r *I
+ = +
+ = +
&eacti$i
5. cloroform'
:. reactiv <anus& soluie de bromur de iod n acid acetic concentrat'
D. soluie de PC 5+ , proaspt preparat'
7. soluie de tiosulfat de sodiu +5 n i factor cunoscut'
*. soluie de amidon +* ,.
;odul de lucru
/D
C3
5
(C3
.
)
?
C3 C3 (C3
.
)
?
C113
I I
acid oleic
acid diiod !tearic
C3
5
(C3
.
)
?
C3 C3 (C3
.
)
?
C113 4 I
.
-e c"ntresc ntr-un flacon uscat cu dop lefuit +5 ] +5* g ulei. -e
dizolv uleiul n 5+ ml cloroform se adaug :* ml reactiv de halogenare care n
cazul acestei metode este o soluie acetic de bromur de iod i se las s
reacioneze timp de 5*=. Pentru uleiurile cu indici mai mari dec"t 5:+ se las timp
de 5S: ] 5 or. Dup scurgerea acestui interval de timp se adaug 5* ml de soluie
apoas de iodur de potasiu 5+ , *+ ml ap i se titreaz cu soluia de tiosulfat
+5 n n prezen de amidon.
)n paralel se e0ecut e0act n aceleai condiii o prob martor prin care se
determin titrul #n iod$ reactivului <anus.
Calculul rezultatelor
Dac notm cu&
R
5
- volumul de tiosulfat de sodiu +5 n consumat la titrarea probei martor n ml'
R
:
- volumul de tiosulfat de sodiu +5 n consumat la titrarea probei cu ulei n ml'
f - factorul de corecie al soluiei de tiosulfat de sodiu +5 n'
( - cantitatea de ulei luat n analiz n grame.
5 . .
1 6 (a
E
M :76 g .
C
M 5:/ g
5$ R
5
- R
:
M R ml tiosulfat de sodiu echivalent volumului de iod adiionat
:$ 5:/ g C ...............................................................:76 g Na
:
-
:
O
D
0 .......................................................................
-777 -7
" + .8>
-777 -7
" + -.?
x
=
grame iod fi0at de ( grame de grsime
-77
G
x
I
I
= n care C
C
M indicele de iod
;onform calculului raional a1ungem la urmtoarea relaie pentru
calcularea indicelui de iod cunosc"nd c 5 ml Na
:
-
:
O
D
nS5+ titreaz ++5:>9 g
iod.
-77
G
7-.0@ , 7 " ) + + (
I
. -
I
=
Cndicele de iod pentru c"teva uleiuri vegetale&
ulei de bumbac 5+: ] 555
ulei de floarea soarelui 559 ] 5D7
ulei de in 5/> ] 56:
ulei de msline /9 ] 6*
ulei de porumb 555 ] 5D+
ulei de ricin 65 ] D>
B. *eac-ii calitati(e 'entru a.inoaci"i
*eac-ia a.inoaci"ilor cu nin>idrina
%rincipiul metodei
3minoacizii particip n reacie cu funciunile amino i carbo0il rezult"nd
compui colorai n albastru-violet cu e0cepia prolinei i hidro0i-prolinei care dau
coloraii galbene. %eacia se nt"lnete i la proteine peptide amine etc. Printr-o reacie
concomitent de decarbo0ilare i dezaminare aminoacizii trec ntr-o aldehid cu un atom
de carbon mai puin.&
3ceste reacii se petrec n cazul folosirii ninhidrinei ca reactiv de developare la
separarea cromatografic a aminoacizilor.
&eacti$i
5. soluie apoas de glicocol concentraie +5-+:,'
/7
:. soluie ninhidrin n alcool absolut concentraie 5,.
;odul de lucru
-e introduc ntr-o eprubet 5-: ml soluie de aminoacid i se adaug c"teva
picturi de soluie de ninhidrin. 3pare coloraia albastru-violet.
*eac-ia cu acidul a"otos
%rincipiul metodei
3minoacizii la fel ca i aminele primare alifatice se dezamineaz cu
acidul azotos i dau
-hidro0i-aminoacizi.
%eacia st la baza determinrii aminoacizilor prin metoda van--lIKe.
&eacti$i
5. soluie apoas de glicocol de concentraie *-5+,'
:. soluie apoas de azotit de sodiu concentraie *-5+,'
D. acid acetic glacial.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc : ml soluie de glicocol se adaug : ml soluie
de azotit de sodiu i c"teva picturi de acid acetic glacial. -e observ dega1area
azotului sub form de bule.
*eac-ia cu alde>idele
%rincipiul metodei
3minoacizii particip cu gruparea funcional amino la reacii de
condensare cu aldehidele rezult"nd azometine #baze -chiff$. (ruparea amino este
blocat iar cea carbo0ilic liber va ioniza. Protonii rezultai #aciditatea$ se pun
n eviden cu a1utorul unui indicator adecvat.
/*
O
O
OH
OH
+
/-CH-COOH /-CHO +
+H
2
3
+CO +H
2+
O
O
H
OH
%#inoacid +inhidrina +inhidrina redusa
O
O
H
OH
+ 2 +H
3
+
O
O
OH
OH
O
O
C
+ C
O
O+H
!
Pur$ura lui /uhe#an
) C3 C113
(3
.
4 31(1 ) C3 C113
13
4 (
.
4 3
.
1
) C3 C113
(3
.
4 1C3 )
-
) C3 C113
( C3 )
-
4 3
.
1
&eacti$i
5. soluie apoas de glicocol concentraie 5-:,'
:. soluie apoas de formaldehid concentraie :+,'
D. soluie apoas de indicator rou de metil +5,.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc : ml soluie de glicocol i se adaug 5-:
picturi de indicator. -e observ colorarea soluiei n galben deoarece p<T>
#indicatorul are intervalul de vira1 la p<M7->:$. -e adaug : ml soluie de
formaldehid i se observ schimbarea coloraiei soluiei n roz datorit eliberrii
protonilor din gruparea carbo0il #p<-ul devine`7$. 3ceast reacie st la baza
metodei -Qrensen de dozare a aminoacizilor.
Diferii aminoacizi prezint reacii specifice de identificare reacii date i
de peptide i proteine ce sunt descrise n continuare.
*eac-ia cu srurile de cu'ru
%rincipiul metodei
-oluiile apoase ale aminoacizilor dau cu srurile cuprice o coloraie
albastru nchis datorit formrii unor combinaii comple0e solubile #chelai$.
(licocolul formeaz urmtoarea combinaie&
&eacti$i
5. soluie de glicocol 5,'
:. soluie apoas concentrat de sare cupric #clorur acetatetc$.
;odul de lucru
-oluia de aminoacid se trateaz cu o soluie neutr de sare cupric. Dac
se concentreaz i se rcesc soluiile de chelai formate acetia se separ n stare
solid cristalin.
C. 2nali"a cantitati(. Metode de do"are a a.inoaci"ilor
Do"area a.inoaci"ilor 'rin .etoda :Drensen
%rincipiul metodei
-e bazeaz pe reacia aminoacizilor cu aldehidele iar gruparea carbo0il
care ionizeaz poate fi titrat cu o soluie alcalin de concentraie i factor
cunoscute.
/>
&eacti$i
5. soluie apoas de formaldehid concentraie :+, neutralizat n prezen
de fenolftalein'
:. soluie hidro0id de sodiu +5 n de factor cunoscut
D. soluie alcoolic de fenolftalein 5,'
7. soluie acid clorhidric +5 n'
*. soluie de aminoacid
;odul de lucru
Din soluia de analizat #adus la volumul de 5++ ml$ se pipeteaz 5+ ml se
introduc ntr-un balon cotat de 5++ ml i se adaug * picturi soluie de
fenolftalein. Pentru aminoacizii cu reacie acid #cei neutri i cei
monoaminodicarbo0ilici$ se neutralizeaz amestecul cu soluie de hidro0id de
sodiu +5 n. )n cazul aminoacizilor cu reacie bazic n soluie #cei
diaminomonocarbo0ilici$ se neutralizeaz amestecul cu soluie de acid clorhidric
+5 n. Dup neutralizare se introduc 5+ ml soluie formaldehid i se titreaz cu
soluie de hidro0id de sodiu +5 n p"n la reapariia coloraiei roz palid
persistent timp de D+N. -e introduc nc : ml de soluie de formaldehid iar dac
soluia rm"ne roz reacia de ionizare a gruprii carbo0il este terminat. -e citete
volumul R de hidro0id de sodiu consumat la titrare. Dac la adugarea celor : ml
de soluie de formaldehid coloraia roz dispare se continu titrarea cu hidro0id
p"n la reapariia acesteia.
Calculul rezultatelor
;antitatea de aminoacid e0primat sub form de grame de aminoacid la
5++ ml soluie #,$ se calculeaz conform ecuaiei&
, 3minoacid M
n
1 f 2a
5++
n care&
.
a
- echivalentul chimic al aminoacidului de analizat'
8 - factorul de corecie volumetric al soluiei de NaO< +5 n'
R - volumul de NaO< consumat la titrare'
n - volumul #ml$ de prob luat pentru titrare.
1E. 2nali"a calitati( a 'roteinelor. *eac-ii s'ecifice. *eac-ii de identificare
Proteinele sunt substane foarte reactive datorit prezenei funciunilor
libere amino i carbo0il a legturilor peptidice i a naturii radicalilor
aminoacizilor componeni. Din multitudinea de reacii calitative se e0ecut acelea
care dau ca produi de reacie compui colorai sau precipitate. De aceea n
tehnica de laborator aceste reacii calitative sunt cuprinse n dou grupe&
a$ %eacii de culoare
b$ %eacii de precipitare #denaturare$.
*eac-ii de culoare
-unt frecvent efectuate i sunt prezente at"t la holo c"t i la heteroproteine.
&eacia 'iuretului
//
%rincipiul reaciei
-oluiile proteinelor n prezena sulfatului de cupru i a mediului puternic
alcalin se coloreaz n albastru-violet. %eacia se realizeaz pe seama legturilor
peptidice la nivelul crora se stabilesc legturi chelatice cu cuprul. %eacia
conduce la formarea de compui chelatici colorai i n cazul folosirii srurilor de
cobalt sau nichel. 3ceast reacie este nt"lnit i la peptide #ncep"nd cu
tripeptidele$ i la unii aminoacizi n soluii concentrate #histidina treonina
serina$ precum i la substanele care au n molecul gruparea
B
;-N<
:
. -e mai
numete Nreacia biuretuluiN fiind prezent i la substana organic numit biuret.
&eacti$i:
5. hidro0id de sodiu soluie apoas 5+,
:. sulfat de cupru soluie apoas 5,'
D. soluii proteice pentru analiz&
soluie de albumin'
soluie diluat de albu de ou'
soluie de cazein 5, etc.'
7. uree sub form de pulbere.
;odul de lucru
)n dou eprubete uscate se introduc c"te +: g uree. 2na dintre ele se
nclzete la flacra unui bec de gaz i se formeaz biuretul cu dega1are de
amoniac.
-e dizolv n ap coninutul ambelor eprubete i n fiecare se adaug c"te
5 ml soluie de hidro0id de sodiu i * picturi de soluie de sulfat de cupru. -e
agit eprubetele i se observ apariia unei coloraii roz n eprubeta cu biuret.
-oluia din eprubeta cu uree se coloreaz n albastru culoarea sulfatului de cupru.
)n alte dou eprubete se vor lua diferite soluii proteice de analizat i se
urmeaz aceleai etape. Dup agitarea soluiilor se observ apariia unei coloraii
violacee n ambele eprubete. )n cazul peptidelor coloraia este roz-roie.
&eacia cu ninhidrina
;a i aminoacizii proteinele formeaz cu ninhidrina n soluie alcoolic
sau acetonic o coloraie albastru-violet.
&eacia (antoproteic (reacia ;udler)
%rincipiul reaciei
Prin tratarea soluiilor de proteine cu acid azotic concentrat se formeaz
un precipitat galben care la alcalinizarea soluiei trece n portocaliu. 3cidul
azotic pe l"ng aciunea de precipitare #denaturare$ formeaz cu aminoacizii
aromatici nitroderivai ce dau culoarea galben.
/6
CH
2
-CH-COOH
+H
2
OH
+
HO+O
2
2
CH
2
-CH-COOH
+H
2
OH
+O
2
O
2
+
+ H O
2
2
1irozina Dinitrotirozina
%eacia se efectueaz pentru identificarea aminoacizilor aromatici
#fenilalanin tirozin$ precum i a celor heterociclici #triptofan$ n hidrolizatele
proteice. )n cazul triptofanului coloraia obinut este mai roie.
&eacti$i
5. acid azotic dM57+'
:. hidro0id de sodiu sau amoniu soluie apoas D+-7+,.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet cu 5-: ml soluie proteic se adaug 5 ml acid azotic
concentrat. 3pare un precipitat alb care la fierbere se solubilizeaz parial
apr"nd coloraia galben. Dup rcire soluia se alcalinizeaz i culoarea vireaz
n portocaliu.
%eacia 0antoproteic se poate realiza direct pe seciuni de material vegetal
sau pe produse biologice animale& l"n piele pene ser sangvin etc.
&eacia ;illon
%rincipiul reaciei
-oluiile proteice nclzite cu reactivul ?illon formeaz un precipitat rou-
crmiziu. %eacia este dat de aminoacizii fenolici #tirozina$ din proteine care cu
acidul azotos din reactivul ?illon formeaz nitrozoderivatul colorat. 8ormarea
precipitatului se datoreaz compoziiei reactivului #azotat mercuric acid acetic
acid azotos$ cu aciune de precipitare a proteinelor. %eacia este dat de toi
compuii fenolici.
&eacti$i
5. reactivul ?illon - livrat de firma productoare n sticle brune cu dop
rodatnchise ermetic. %eactivul se prepar uzual dup urmtoarea reet&
- soluia a - soluie de sulfat mercuric *, n acid sulfuric de concentraie
*,. Prepararea soluiei de acid sulfuric& ntr-o capsul de porelan se introduc
9/5* ml ap distilat i se adaug :6* ml acid sulfuric concentrat #dM567$
cu pictura sub agitare continu'
- soluia / - soluie apoas de azotat de sodiu 5,'
3ceste dou soluii se pstreaz separat i se prepar reactivul ?illon n
momentul utilizrii astfel & peste : ml soluie a se adaug 5-: picturi
soluie /.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se trateaz : ml soluie proteic #e0tract proteic vegetal ser
sangvin albu de ou cazein etc.$ cu * picturi reactiv ?illon. 3pare un
precipitat alb care la nclzire devine rou-crmiziu cu structur spongioas.
&eacia sulfurii de plum'
/9
%rincipiul reaciei
-oluiile proteice care conin tioaminoacizi la fierbere cu hidro0izi alcalini
elibereaz sulful sub form de anion sulfur. 3cesta formeaz n prezena
cationului plumbos sulfura de plumb brun-negricioas.
5. %
B
-< E :#Na
E
E O<
-
$ M #:Na
E
E -
:-
$ E <
:
O E %
B
O<
:. #:Na
E
E -
:-
$ E #Pb
:E
E :;<
D
B
;OO
-
$ M Pb- E :#Na
E
E ;<
D
B
;OO
-
$
&eacti$i
5. soluie de hidro0id de sodiu :+-D+, '
:. soluie saturat de acetat de plumb '
D. soluie proteic de analizat #albu de ou hidrolizate proteice vegetale bogate
n tioaminoacizi etc$.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se trateaz :-D ml de soluie proteic de analizat cu : ml
soluie de hidro0id de sodiu. -e fierbe coninutul timp de : minute dup care se
adaug 5 ml soluie de acetat de plumb. 3pare precipitatul negru de sulfur de
plumb.
&eacia #dam<ie=icz
%rincipiul reaciei
-oluiile proteinelor care conin triptofan dau cu acidul glio0ilic n
prezena acidului sulfuric concentrat o coloraie roie-violet. .liberarea
triptofanului are loc la hidroliza acid a proteinelor #n prezena acidului sulfuric$.
&eacti$i
5. acid glio0ilic sau acid acetic glacial'
:. acid sulfuric concentrat dM567'
D. soluie proteic de analizat & cazein 5, sau hidrolizat proteic vegetal.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc : ml soluie de analizat 5+-5* picturi acid
glio0ilic dup care se preling pe peretele eprubetei : ml acid sulfuric concentrat.
Fa limita de separare a celor dou faze se formeaz un inel colorat n rou-violet.
3cidul glio0ilic poate fi nlocuit cu acidul acetic glacial #dup -chultz$
caz n care se folosesc n reacie D ml i este necesar o nclzire uoar a
amestecului nainte de adugarea acidului sulfuric.
&eacia ;olisch
%rincipiul reaciei
6+
+
H
CH
2
- CH - COOH
+H
2
+
C = O
C = O
H
H
+
H
HOOC-CH-CH
2
+H
2
+
+H
2
H
CH
2
-CH-COOH
CH
2 +
CO
2
+
H O
2
1ri$tofan
%cid glio(ilic Produs de condensare
rosu--iolet
2
(lucoproteinele formeaz cu -naftolul pe seama glucidelor din
compoziia lor n prezena acidului sulfuric concentrat compui colorai n violet.
3cidul sulfuric concentrat deshidrateaz aldohe0ozele la hidro0imetil-furfurol
care prin condensare cu -naftolul formeaz compusul colorat.
&eacti$i
5. -naftol soluie alcoolic :+, '
:. acid sulfuric concentrat dM567 '
D. soluie de analizat #cazein 5,$.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet uscat se trateaz 7 ml soluie de cazein cu D-7 picturi
soluie de -naftol. Dup agitarea soluiei se preling pe pereii eprubetei n
poriuni mici : ml acid sulfuric concentrat. Fa suprafaa de separare a celor dou
faze se formeaz un inel colorat n violet.
*eac-ii de 'reci'itare (denaturare
Proteinele sunt precipitate #denaturate$ sub aciunea unor factori fizici
chimici i fizico-chimici modific"ndu-se solubilitatea lor n ap sau n solveni
specifici. Numeroase reacii de precipitare stau la baza unor metode de separare a
proteinelor din e0tracte vegetale sau lichide biologice.
%eaciile de precipitare pot fi reversibile sau ireversibile. )n precipitarea
reversibil denaturarea proteinelor nu este profund iar precipitatul format se
redizolv. Precipitarea ireversibil modific at"t structura secundar c"t i cea
teriar fc"nd imposibil refacerea structurilor denaturate.
-ubstanele care produc precipitare reversibil sunt& solvenii organici
#alcool aceton dio0an$ srurile neutre #Na;l #N<
7
$
:
-O
7
?g-O
7
$.
3genii de precipitare ireversibil sunt& srurile metalelor grele #Pb ;u
3g ;r <g etc.$ reactivii de precipitare ai alcaloizilor #acidul picric fericianura
de potasiu etc.$ acizii minerali tari concentrai acizii organici #sulfosalicilic
Aolframic tricloracetic etc.$ cldura etc.
%recipitarea cu sol$eni organici
%rincipiul reaciei
-olvenii organici miscibili cu apa deshidrateaz particulele coloidale care
aglutineaz i precipit. 8iind o precipitare reversibil la adugare de ap
precipitatul se dizolv.
&eacti$i
5. alcool etilic 9*,'
:. aceton'
D. soluie proteic.
;odul de lucru
)ntr-o eprubet se introduc : ml de soluie proteic se adaug n poriuni
mici 5-: ml alcool i se agit puternic p"n la apariia precipitatului. -e adaug
5+-5* ml ap. -e agit amestecul i se observ dizolvarea precipitatului.
-e e0ecut aceleai operaii i cu acetona.
%recipitarea cu sruri neutre (salifierea)
65
%rincipiul reaciei
-rurile neutre ale unor metale alcaline i alcalino-pm"ntoase precipit
reversibil proteinele. 3cest fapt se datoreaz neutralizrii sarcinilor electrice ale
particulelor coloidale cu sarcinile de semn contrar ale ionilor adsorbii pe
suprafaa particulelor precum i deshidratrii acestora de ctre ionii srii.
&eacti$i
5. soluii saturate de Na;l #N<
7
$
:
-O
7
?g-O
7
'
:. soluie proteic de analizat.
;odul de lucru
)n trei eprubete se introduc c"te : ml soluie proteic de analizat i se
adaug n fiecare c"te 5 ml din reactivul respectiv de precipitare. 3par precipitate
care la adugare de ap se dizolv.
%recipitarea cu acizi minerali tari
%rincipiul reaciei
3cizii minerali tari precipit ireversibil proteinele iar precipitatele formate
nu se dizolv la adugare de ap.
&eacti$i
5. acizi minerali tari #acid clorhidric dM559' acid sulfuric dM567' acid azotic
dM57+$'
:. soluii proteice.
;odul de lucru
)n trei eprubete se introduc c"te : ml soluie proteic de analizat. )n fiecare
eprubet se adaug de-a lungul pereilor c"te 5 ml acid mineral concentrat. )n
cazul acizilor clorhidric i sulfuric la suprafaa de separare a celor dou faze se
formeaz un inel alb #precipitat$ care prin agitare se dizolv #dizolvare n e0ces
de reactiv$. Precipitatul format la adugarea de acid azotic nu se dizolv #insolubil
n e0ces de reactiv$.
%eacia cu acidul azotic #n diferite concentraii$ st la baza unei metode
de dozare a albuminelor din urin.
%recipitarea cu acizi organici
%rincipiul reaciei
2nii acizi organici au aciune specific asupra proteinelor fiind folosii la
precipitarea acestora din diferite lichide biologice.
&eacti$i
5. acid tricloracetic soluie 5*-:+,'
:. acid sulfosalicilic soluie 5*-:+,'
D. soluie proteic de analizat.
;odul de lucru
)n dou eprubete se introduc c"te : ml soluie proteic de analizat. )n
prima se adaug n picturi soluie de acid tricloracetic sub agitare continu p"n
c"nd se observ formarea unui precipitat alb abundent. )n cea de-a doua eprubet
6:
se introduce n acelai mod acidul sulfosalicilic i se observ formarea unui
precipitat alb af"nat #cu aspect de nor$.
%recipitarea cu sruri ale metalelor grele
%rincipiul reaciei
2nele sruri ale metalelor grele precipit ireversibil proteinele modific"nd
profund structura acestora.
&eacti$i
5. sulfat de cupru soluie *,'
:. clorur mercuric soluie +*-5,'
D. azotat de argint soluie +*-5,'
7. acetat de plumb soluie 5+,'
*. soluie proteic de analizat.
;odul de lucru
)n patru eprubete se introduc c"te : ml de soluie de analizat i se adaug
apoi soluiile de sruri. -e observ formarea precipitatelor. ;ele rezultate din
reaciile cu sulfatul de cupru i acetatul de plumb sunt solubile n e0ces de reactiv
iar celelalte dou sunt insolubile.
%recipitarea cu reacti$ii de precipitare ai alcaloizilor
%rincipiul reaciei
-ubstanele care produc precipitarea alcaloizilor precipit ireversibil i
proteinele. %eacia are loc n mediu acid #n cel alcalin precipitatele se dizolv$.
&eacti$i
5. acid picric soluie saturat'
:. tanin soluie apoas saturat'
D. fericianur de potasiu soluie apoas 5+,
7. reactiv ?aIer #comple0 de iodur mercuric i potasiu$ & se dizolv 5D* g
clorur mercuric n >+ ml ap distilat la care se adaug soluia de iodur
de potasiu #* g dizolvate n 5+ ml ap distilat$. -e completeaz cu ap distilat la
5++ ml'
*. reactiv .sbach & se dizolv 5 g acid picric : g acid citric n ap distilat
cu care se completeaz p"n la volumul de 5++ ml'
>. acid acetic soluie apoas 5,'
/. acid clorhidric soluie apoas 5+,'
6. soluie proteic de analizat.
;odul de lucru
)n cinci eprubete se introduc c"te : ml soluie de analizat apoi se adaug &
- n eprubeta C - 5-: ml acid acetic i 5-: ml soluie de tanin. -e formeaz un
precipitat alb.
- n eprubeta CC - se aciduleaz soluia cu 5-: ml acid acetic i se adaug 5 ml acid
picric. 3pare un precipitat galben.
- n eprubeta CCC - dup acidularea cu acid acetic se adaug 5 ml soluie de
fericianur de potasiu. -e formeaz un precipitat rou-crmiziu.
- n eprubeta CR - : ml acid clorhidric i 5 ml reactiv ?aIer. 3pare un precipitat
rou-brun.
6D
- n eprubeta R - 5 ml reactiv .sbach. -e formeaz un precipitat galben.
11. Deter.inarea a"otului total #i a 'roteinei /rute din 'lante
(.etoda FGelda>l
Proteina brut reprezint totalitatea substanelor organice cu azot din care
fac parte proteinele i substanele azotate neproteice #alcaloizi pigmeni cu azot
lipide comple0e amide etc.$
;oninutul n protein brut se calculeaz dup coninutul n azot total
organic din plant.
%rincipiul metodei
-ubstanele azotate organice la fierbere cu acid sulfuric se descompun n
elementele componente & carbon o0igen hidrogen azot fosfor etc. ;arbonul se
elimin sub form de ;O
:
hidrogenul i o0igenul sub form de <
:
O iar azotul
formeaz amoniacul. 3cesta n prezena acidului sulfuric se transform n sulfat
de amoniu #mineralizarea azotului organic$.
-ulfatul de amoniu rezultat se descompune ulterior ntr-un mediu puternic
alcalin cu formarea amoniacului i a sulfatului alcalin. 3moniacul este separat
prin distilare i captat ntr-un volum cunoscut i n e0ces de acid sulfuric de titru
determinat. .0cesul de acid se titreaz la sf"ritul distilrii cu o soluie de hidro0id
de sodiu de titru i factor cunoscute.
Diferena dintre cantitatea iniial de acid sulfuric i e0cesul determinat la
titrarea cu hidro0id de sodiu reprezint cantitatea de acid sulfuric ce a fi0at
amoniacul sub form de sulfat de amoniu. -e calculeaz cantitatea echivalent de
azot care se e0prim n procente raportat la masa substanei de analizat uscate n
prealabil la 5+*^;.
-e pot folosi mai multe amestecuri de catalizatori pentru etapa de
mineralizare &
a$ mercur metalic - +/ g pentru 5g produs #D picturi$ E P
:
-O
7
-5+ g
b$ amestec de ;u-O
7
.
*<
:
OEP
:
-O
7
n proporie de 5&5+ apro0. 5+-5* gSprob
c$ amestec de ;u-O
7
.
*<
:
OEP
:
-O
7
Eseleniu n proporie de 7&5>&5 cca +*
gSprob
d$ amestec b$ E 5+ ml pero0id de hidrogen D+,.
)n afar de catalizatorii menionai literatura de specialitate mai
recomand i o0idul de vanadiu o0idul de mercur o0idul de cupru etc.
&eacti$i
5. acid sulfuric concentrat dM567'
:. catalizator ;u-O
7
.
*<
:
O E P
:
-O
7
cristale'
D. hidro0id de sodiu soluie D+-7+,'
7. acid sulfuric soluie +5 n cu factor cunoscut'
*. hidro0id de sodiu soluie +5 n cu factor cunoscut'
>. rou de metil soluie ++:, #indicator$.
;odul de lucru
2. ;ineralizarea su'stanei de analizat
?ateria prim este mrunit c"t mai fin posibil i omogenizat. ;antitatea
luat n analiz este n funcie de coninutul n azot #cel mult 5+ mg azotSprob$.
67
-e c"ntresc la balana analitic - +5 g pentru semine' - 5 g pentru ierburi uscate
f"n paie' - 7-> g pentru materiale bogate n ap #fructe tulpini suculente$.
-ubstana c"ntrit se trece ntr-un balon P1eldahl de 5++ ml se adaug
+5-+: g ;u-O
7
.
*<
:
O #catalizator de mineralizare$ :-D g de P
:
-O
7
#are rolul de
a ridica temperatura de fierbere a amestecului$.i *-> ml acid sulfuric concentrat.
!alonul P1eldahl se monteaz n poziie nclinat pe un stativ metalic pe sit de
azbest sub ni. Fa gura balonului se aeaz o p"lnie mic de sticl ce are rolul de a
mpiedica pierderile prin stropire n timpul fierberii. )nclzirea se face la bec de gaz la
nceput cu flacr mic c"nd coninutul balonului devine negru i spumos. Dup
ncetarea spumrii se mrete flacra i ncepe dega1area unor vapori de dio0id de sulf. -e
regleaz flacra astfel nc"t s aib loc o fierbere linitit i uniform timp de c"teva ore
n funcie de natura i cantitatea materialului supus mineralizrii.
-f"ritul acestei etape este indicat de colorarea n verde a soluiei din
balon. -e recomand s se continue nclzirea nc 5-: ore pentru mineralizarea
complet a compuilor heterociclici cu azot care sunt n general mai rezisteni la
descompunere.
9. *istilarea amoniacului i captarea 7n acid sulfuric
Distilarea amoniacului din sulfatul de amoniu rezultat la mineralizare se
poate efectua ntr-un aparat Parnas-@agner #fig. 6 $ care este format din&
- balon generator de vapori #5$
- vas de siguran #recipient intermediar$ #:$
- vas de distilare #D$ prevzut cu
o p"lnie cu robinet #7$. -ervete
la splarea aparatului dup
determinare.
- refrigerent ascendent #*$. )ntre
vasul de distilare i refrigerent
se intercaleaz un separator de
picturi #deflegmator$.
(eneratorul de vapori are o
capacitate de 5-: litri n care se
introduce ap p"n la :SD din volum.
.ste prevzut cu dou tuburi de
sticl #ab$.
4ubul #a$ poate fi prevzut n e0terior cu o p"lnie cu robinet prin care se
introduce ap' n timpul distilrii robinetul va nchide tubul. Prin tubul #b$ vaporii
de ap din generator vor trece n vasul de distilare.
)nclzirea apei din generator se poate face electric sau la flacra unui bec
de gaz. 4ubul refrigerentului se introduce ntr-un recipient de sticl #>$ care poate
fi un balon .rlenmaIer pahar !erzelius etc. n care se gsete un volum msurat
e0act de acid sulfuric +5 n de factor cunoscut i D-7 picturi de indicator rou de
metil #coloraia soluiei trebuie s se menin roz tot timpul distilrii ceea ce
nseamn c acidul sulfuric este n e0ces$. ;aptul tubului refrigerentului trebuie
s ptrund n soluia de acid sulfuric.
!alonul P1eldahl cu coninutul mineralizat se rcete dup care prin
p"lnia de la g"tul su se introduc * ml ap distilat. P"lnia se cltete pe ambele
6*
pri cu puin ap distilat care se colecteaz tot n balon. -e agit soluia sau se
ncalzete uor pentru solubilizarea reziduului dup care se transvazeaz n vasul
de distilare prin p"lnia cu robinet #7$. !alonul P1eldahl se spal de :-D ori cu c"te
D ml ap distilat care se introduce tot n vasul de distilare. -e adaug prin p"lnie
7+-*+ ml hidro0id de sodiu de concentraie D+-7+, i c"teva picturi de
fenolftalein p"n se observ culoarea roz-intens M mediu alcalin$. )n absena
fenolftaleinei se adaug hidro0id de sodiu p"n se observ formarea unui
precipitat albastru de hidro0id cupric.
-e nchide tubul #a$ al generatorului de vapori. Raporii de ap trec din
generator prin tubul #b$ n vasul de distilare i antreneaz amoniacul care se
dega1 i este captat n soluia de acid sulfuric din recipientul #>$.
Distilarea dureaz :+-D+ minute iar verificarea se face astfel& se scoate
tubul refrigerentului din paharul cu acid sulfuric se cltete cu puin ap distilat
care se colecteaz tot n pahar iar urmtoarea pictur de distilat se las s cad
pe o h"rtie de turnesol. Dac h"rtia nu devine albastr distilarea este terminat. O
alt modalitate de a ncerca sf"ritul distilrii este reacia cu reactivul Nessler
specific pentru amoniac #trebuie s fie negativ$.
Fa sf"ritul distilrii se titreaz coninutul recipientului #>$ - e0cesul de
acid sulfuric - cu o soluie de hidro0id de sodiu +5 n p"n la virarea culorii
indicatorului de la roz la galben.
Calculul rezultatelor
, N
total
M
G
) -77 7,7-8 xF + +xF (
- -
n care&
+++57 M cantitatea n grame de azot care corespunde la 5 ml de acid sulfuric +5
n'
R M volumul de acid sulfuric +5 n luat pentru captarea amoniacului'
8 M factorul soluiei de acid sulfuric'
R
5
M volumul de hidro0id de sodiu care a neutralizat acidul sulfuric rmas n
e0ces'
8
5
M factorul soluiei de hidro0id de sodiu'
( M cantitatea n grame de substan uscat luat n analiz.
;antitatea de azot total se e0prim n grame la 5++ grame substan uscat #,$.
;oninutul n protein brut se determin astfel'
, Protein brut M , N
total
>:*
1+. Do"area acidului ascor/ic 'rin titrare cu += 7 ? diclorfenolindofenol
%rincipiul metodei
3cidul ascorbic are proprietatea de a reduce : > - diclorfenolindofenolul
#reactiv 4illmans$ n leucoderivatul corespunztor&
6>
O
O
OH HO
OH
HO
+ +
OH
O
Cl Cl
O
O
O O
OH
HO
+ +
OH
O
Cl Cl
H
H
22 0 - diclorfenolindofenol
leucoderi-at
*ozarea acidului ascor'ic 7n plante
&eacti$i
5. soluii de e0tracie& acid o0alic soluie :, sau soluie de acid
metafosforic i acid acetic preparat astfel& ntr-un balon cotat de *++ ml se
introduc 5* g acid metafosforic 7+ ml acid acetic glacial i :++ ml ap. -e agit
p"n la dizolvare dup care se aduce coninutul balonului la semn cu ap
distilat. -oluia se filtreaz prin h"rtie de filtru cu porozitate mare ntr-o butelie
de sticl care se nchide cu dop rodat i se pstreaz la temperatura de + - *
o
;.
-oluia poate fi utilizat timp de / - 5+ zile de la preparare'
:. colorant indofenolic #: > - diclorfenolindofenol$ soluie& ntr-un balon
cotat de :++ ml se introduc *+ mg sare disodic de : > - diclorfenolindofenol i
5*+ ml ap cald #*+ - >+
o
;$ n care s-au dizolvat n prealabil 7: mg carbonat
acid de sodiu #Na<;O
D
$. -e agit pentru dizolvare se completeaz coninutul
balonului la semn cu ap distilat i se filtreaz cu h"rtie de filtru cu porozitate
mare.
-oluia se pstreaz ntr-un flacon de sticl brun la temperatura de + - *
o
; timp de ma0. 5* zile.
.talonarea soluiei de colorant indofenolic se face astfel& se iau cu pipeta
* ml din soluia etalon de acid ascorbic #concentraie 5 mgSml$ se introduc ntr-un
vas .rlenmeIer de *+ ml se adaug * ml soluie de e0tracie i se titreaz repede
cu soluie de colorant indofenolic p"n la apariia coloraiei roz deschis care
persist * secunde.
-e repet aceast operaie i se nregistreaz volumul soluiei de colorant
utilizat de fiecare dat cu o precizie de +5 ml. -e calculeaz volumul mediu de
soluie folosit la titrare.
-e efectueaz o prob martor nlocuindu-se cei * ml soluie etalon de acid
ascorbic cu * ml soluie de e0tracie proced"ndu-se ca mai sus.
-e scade volumul soluiei de colorant obinut la titrarea probei martor din
volumul mediu al soluiei de colorant utilizat la etalonarea colorantului.
;oncentraia soluiei de colorant indofenolic se e0prim n miligrame acid
ascorbic la 5 ml soluie de : > - diclorfenolindofenol i este dat de formula ; M
;
5
SR n care&
;
5
- cantitatea de acid ascorbic aflat n * ml soluie etalon n miligrame'
R - volumul soluiei de : > - diclorfenolindofenol folosit la titrare n mililitri #din
care s-a sczut volumul folosit la titrarea probei martor$'
D. acid ascorbic soluie etalon&
se c"ntresc cu precizie de +5 mg *+ mg acid ascorbic pstrat n prealabil ntr-
un e0icator se transvazeaz cantitativ ntr-un balon cotat de *+ ml i se aduce la
semn coninutul balonului cu soluie de e0tracie. -oluia conine 5 mg acid
6/
ascorbic ntr-un mililitru. -oluia nu este stabil i se prepar n momentul
utilizrii'
7. sulfat de cupru soluie 5,'
*. albastru de metilen soluie ++*,'
>. indigocarmin soluie ++*,'
/. acid clorhidric diluat 5 & D.
;odul de lucru
3erificarea prezenei su'stanelor interferente:
Dac se presupune c n prob sunt prezente substane interferente ca fier
cupru reductoni compui cu sulf se procedeaz astfel& se adaug dou picturi de
albastru de metilen soluie ++*, n 5+ ml amestec conin"nd volume egale din
soluia probei pentru analiz i din soluia de e0tracie i se agit pentru
omogenizare. Dispariia coloraiei n * - 5+ secunde indic prezena substanelor
interferente.
-taniul nu poate fi pus n eviden n modul descris mai sus i n acest caz
se procedeaz astfel& se adaug * picturi de indigocarmin soluie ++*, la 5+ ml
soluie pentru analiz la care s-au adugat 5+ ml acid clorhidric diluat 5 & D i se
omogenizeaz. Dispariia coloraiei n * - 5+ secunde indic prezena staniului sau
a altei substane interferente.
1(tracia
)n cazul produselor solide semisolide i cu coninut solid-lichid din proba
pentru analiz pregtit ca mai sus se c"ntresc cu o precizie de +5 mg 5+ - 5++
g #m
+
$ #n raport invers cu coninutul apro0imativ de vitamin ; a produsului
respectiv$ se introduc ntr-un mo1ar n care se adaug soluie de e0tracie n aa
fel nc"t volumul soluiei de e0tracie adugat n ml s fie cuprins ntre 5 & 5 i
5 & * ori masa probei n grame i se mo1areaz c"t se poate de repede. -e trece
cantitativ n balon cotat de 5++ - :*+ ml.
)n cazul produselor lichide pregtite conform metodei descrise se iau cu
pipeta 5+ - 5++ ml #R$ se introduc ntr-un balon cotat de 5++ - :*+ ml #R
D
$ n
care n prealabil s-a introdus o soluie de e0tracie menin"nd raportul de 5 & 5 -
5 & *.
-oluia obinut se filtreaz arunc"nd primii mililitri de filtrat.
:itrarea
)ntr-un vas .rlenmeIer de *+ ml se introduc * - 5+ ml #R
7
$ din e0tractul
acid al probei i se titreaz repede cu soluie de colorant indofenolic #R
+
$ agit"nd
continuu p"n la apariia coloraiei roz care persist minimum * secunde. -e
efectueaz dou determinri paralele din aceeai prob.
)n acelai mod se face i proba martor n care proba de analizat a fost
nlocuit cu acelai volum de soluie de e0tracie i se titreaz cu o soluie de
colorant #R
5
$.
)n cazul n care proba supus analizei conine reductoni se procedeaz
astfel& ntr-un vas .rlenmeIer de *+ ml se introduce cu pipeta acelai volum de
e0tract acid al probei #R
7
$ la care se adaug 5 ml de soluie de sulfat de cupru. -e
omogenizeaz amestecul i se nclzete pe o baie de ap adus la fierbere timp
de 5+ minute. Dup rcire proba se titreaz cu o soluie de colorant indofenolic.
66
Calculul rezultatelor
;oninutul de acid ascorbic e0primat n miligrame la 5++ g produs se
calculeaz cu formula&
-77
m +
C + ) + + (
7
+
C $ +it
7 8
5 . -
+
=
#mgS5++g$
n care&
m
+
M masa probei luate pentru determinare #grame$'
; M cantitatea de acid ascorbic corespunztoare unui ml soluie de colorant indofenolic
#miligrame$'
R
+
M volumul soluiei de colorant indofenolic folosit pentru titrarea probei #ml$'
R
5
M volumul soluiei de colorant indofenolic folosit pentru titrarea probei martor #ml$'
R
:
M volumul soluiei de colorant indofenolic folosit pentru titrarea reductonilor #ml$'
R
D
M volumul la care a fost adus proba luat pentru analiz #ml$'
R
7
M volumul e0tractului acid al probei luate pentru analiz #ml$.
1,. Deter.inarea acti(it-ii catala"ei 'rin titrare
'er.angano.etric
%rincipiul metodei
)n analiz se ia o cantitate n e0ces de ap o0igenat e0ces care se
determin prin titrare cu permanganat de potasiu.
.cuaia dup care are loc titrarea este urmtorea&
&eacti$i
5. ap o0igenat soluie 5, proaspt preparat din perhidrol i ap'
:. acid sulfuric soluie 5+,'
D. permanganat de potasiu soluie +5 n'
7. e0tract vegetal cu catalaz.
;odul de lucru
-e pipeteaz n dou pahare !erzelius c"te :+ ml e0tract de catalaz. 2na
din probe se fierbe pentru inactivarea enzimei. Dup rcirea acesteia n ambele
probe se introduc c"te 5+ ml ap distilat i D ml ap o0igenat. -e las n repaus
la temperatura camerei timp de D+ minute. -e adaug c"te * ml acid sulfuric 5+ ,
i se titreaz cu soluia +5 n de permanganat de potasiu p"n la vira1ul coloraiei
n roz pal. -e noteaz volumele de permanganat de potasiu utilizate la titrarea
celor dou probe& martor i cu catalaz.
Calculul rezultatelor
3ctivitatea catalazei se e0prim n mg ap o0igent descompus n D+
minute.
R M ml permanganat de potasiu +5 n titrat la proba martor'
R
5
M ml permanganat de potasiu +5 n titrat la proba cu catalaz'
f M factorul soluiei de permanganat de potasiu.
5 ml P?nO
7
+5 n este echivalent cu 5 ml soluie <
:
O
:
+5 n.
5 ml soluie <
:
O
:
conine 5/ mg <
:
O
:
.
3ctivitatea catalazei M #R - R
5
$ _ f _ 5/ M mg <
:
O
:
descompus n timp de D+
minute.
69
.
.
8
. .
8 .
.
8 8 . .
1 ; ) 61 =n ( . ) 61 * . ( 1 3 > ) 61 3 . ( 5 ) =n1 * ( . 1 3 ; + + + + + = + + + +
+ + + +
9I9LIOG*21IE
5. 3rtenie R. L 5995 !iochimie .d. 2niversitii 3l. C. ;uza Cai
:. !odea ;. 8rcanu R. Nicoar .lena -lusanschi <. L 59>7-59>6 4ratat
de biochimie vegetal .ditura 3cademiei %.-.%. !ucureti vol. C L
R
D. Dumitru C.8. L 596+ !iochimie .d. Didactic C Pedagogic !ucureti
7. Cvas .lena L 599D !iochimie animal centrul de multiplicare 23?R CaC
*. Fehninger 3.F. L 596/ !iochimie vol. C .d. 4ehnic !ucureti
>. Neamu (. L 599D !iochimie vegetal .d. Didactic C Pedagogic %.3.
!ucureti
/. Neamu (. L 599/ !iochimie alimentar .d. ;eres !ucureti
6. Popescu O. L 599: !iochimie centrul de multiplicare 23?R CaC
9. -avu ?aria L 5997 !iochimie vegetal curs L uz intern 23?R Cai
5+. -avu ?aria 3fusoaeCulia Nechita3ntoanela 4rofin 3lina ?arcu C. L
:+++ !iochimie vegetal Fucrri practice CaC
9+
CU$*I3:
MODUL I
Introducere
1. Glucide :
5.5. ;onsideraii generale :
5.:. Oze #monoglucide monozaharide$ :
5.D. Diholozide #dizaharide$ 6
5.7. Poliozide #poliglucide$ 9
4est de autoevaluare 5+
%ezumat capitol 5 55
+. Li'ide 5:
:.5. ;onsideraii generale 5:
:.:. ;onstituenii chimici din structura lipidelor 5:
:.D. Fipide simple 5D
:.7. Fipide comple0e 5*
4est de autoevaluare 5>
%ezumat capitol : 5>
,. $rotide 5/
D.5. ;onsideraii generale 5/
D.:. 3minoacizi 5/
95
D.D. Peptide :5
D.7. Proteine ::
D.*. <eteroproteine :*
4est de autoevaluare :/
%ezumat capitol D :/
4eme de verificare pentru modulul C :6
MODUL II
4. 2ci"i nucleici :9
7.5. ;aracterizare general :9
7.:. ;omponentele mononucleotidelor :9
7.D. Nucleotide D+
7.7. Polinucleotide #acizi nucleici$ D5
4est de autoevaluare D:
%ezumat capitol 7 DD
6. 0ita.ine D7
*.5. Definiie i clasificare D7
*.:. Ritamine liposolubile D7
*.D. Ritamine hidrosolubile D*
4est de autoevaluare D6
%ezumat capitol * D6
7. En"i.e D9
>.5. ;onsideraii generale D9
>.:. Natura i structura chimic a enzimelor D9
>.D. -pecificitatea enzimelor 7+
>.7. 8actorii care influeneaz viteza reaciilor enzimatice 7+
>.*. Nomenclatura i clasificarea enzimelor 75
>.>. Prezentarea principalelor clase de enzime 7:
4est de autoevaluare 7*
%ezumat capitol > 7>
4eme de verificare pentru modulul CC 7/
MODUL III
8. Meta/olis. 76
/.5. ;onsideraii generale 76
/.:. Procese generale n anabolism 76
/.D. Procese generale n catabolism 79
/.7. ?etabolismul intermediar al glucidelor *:
MODUL I0 ; Lucrri 'ractice
5. 3cizii organici din plante. 8orme de aciditate */
:. Oze #monoglucide$ *6
D. Oligozide >:
7. Dozarea glucidelor reductoare prin metoda iodometric >*
*. Determinarea polarimetric a amidonului prin
metoda .Aers L (rossfeld >>
>. 3naliza calitativ a gliceridelor >/
/. Determinarea indicilor ce caracterizeaz lipidele >6
6. %eacii calitative pentru aminoacizi /:
9. ?etoda -orensen de dozare a aminoacizilor /7
5+. 3naliza calitativ a proteinelor /*
55. Dozarea azotului total i a proteinei brute 65
9:
5:. Dozarea acidului ascorbic #vitaminei ;$ 67
5D. Determinarea activitii catalazei 6>
9i/liografie 66
Cu'rins 69
9D