Genele care se dezv in c dezv embr la droso -gene implic in stab genelor -gene pt stab identitatii acestor segm

-gene implicate in for segm larvare si embrionare -2 subcategorii: -gene coordonatoare maternale -genele zigotice I Genele coordonatoare maternale -se numesc maternale, pentru ca ele sunt transcrise in ovogeneza (deci la mama) -sunt implicate in formarea axelor embrionare anteroposterioara si dorsoventrala -pe baza fenotipurilor mutante ale embrionilor s-au descris 3 grupuri de gene coordonatoare maternale: -1) grupul anterior -2) grupul posterior -3) grupul terminal -in cadrul fiecarui grup, cel putin o gena functioneaza ca gena cheie, adica produsul ei reprezinta un reper spatial in embrion -produsii celorlalte gene din grup au functii accesorii si sunt implicati in transportul, localizarea sau activarea locala a produsilor genelor cheie -pentru descifrarea acestor sisteme genetice: Christiane Nusslein-Volhard si Eric Wieschaus, 1995 P. Nobel, pentru Medicina Grup genic Fenotipul mutant general Grupul Anterior bicoid (bcd) exuperantia (ewu) swallow (swa) staufen (stau) Gena cheie este bicoid Aceste gene ca fenotip mutant general-pierderea capului si toracelui larvelor si in plus, acronul este transformat in telson (are 2 cozi) -acron (gura) la polul anterior -telson (coada) la polul posterior -la gena exuperantia- un sfant care si-a carat capul pana in varful unui deal unde se afla catedrala in Zurich -swallow-larvele mutante sunt asem unui craniu de la o sp de randunica, endemica in SUa -stadufen- casa regala germana, ultimul mb al fam regale respective a murit decapitat Grupul Posterior Fenotipul mutant general nanos (nos) vasa (vas) valois (vls) tudor (tud) oskar (osk) pumilo (pum) staufen (stau) Gena cheie este nanos Fenotip mutant general-pierderea abdomenului larvelor cu exceptia telsonului, in plus, embrionii nu au celule polare si in consecinta, larvele sunt sterile. -nanos (spaniola: pitic)

Grupul Terminal Fenotip mutant terminal torso (tor) torso-like (tsl) trunk (trk) Gena cheie este torso Fenotip mutant genral-pierderea cronului si telsonului Grupul Anterior -in stadiile 9-10 ale ovogenezei, ARN-ul bicoid, incepe sa se acumuleze in citoplasma celulelor nutritive -spre deosebire de alte ARN-uri maternale care se distribuie in toata citoplasma celulelor nutritice, ARN-ul bicoid are o localizare periferica -aceasta localizare este datorata interactiei cu proteina exuperantia -s-a constatat ca in mutantele exuperantia (gena exuperantia nu se exprima si in consecinta nu exista proteina exuperantia in celulele nutritive) ARN-ul bicoid este distrubuit in toata citoplasma celulelor nutritive -in stadiile 10-11 ale ovogenezei, ARN-ul bicoid incepe sa dispara gradat din celulele nutritive si se acumuleaza in cortexul anterior al ovocitului -aceasta localizare depinde de interactia cu proteina swallow -se considera ca odata format complexul ARN-bicoid proteina exuperantia, el este atasat la citoscheletul ovocitar prin intermediul proteinei swallow -in stadiul 12 al ovogenezei, cand celulele nutritive incep sa degenereze, ARN-ul bicoid este eliberat din cortexul anterior si se dispune sub forma unei bonete in polul anterior al ovocitului -inaintea elimibarii oului din ovar, ARN-bicoid este eliberat in citoplasma anterioara unde este stabilizat de proteina staufen -s-a constatat ca in mutantele staufen ARN-bicoid se distribuie in toata citoplasma oului -ARN-bicoid este tradus dupa fecundare, pentru a forma proteina bicoid, care se dispune sub forma unui gradient de concentratie ce ocupa 2/3 din regiunea anterioara a embrionului timpuriu Grupul Posterior -este diferit de cel anterior, deoarece, desi semnalul localizat la polul posterior al ovocitului este tot un ARN maternal, produsul sau proteic nu influenteaza direct exprimarea genelor zigotice -si ARN nanos este produs in celulele nutritice si transportat in ovocit , pentru a fi localizat la polul posterior in asociere cu granulele polare -si ARN nanos este tradus dupa fecundare, proteina nanos difuzand din polul posterior pana la jumatatea embrionului -proteina nanos este implicata in controlul traducerii al controlului hunchback m (maternal) -in regiunea anterioara a embrionului, unde nu exista proteina nanos, ARN hunchback maternal este tradus, formana proteina hunchback maternala -in regiunea posterioara (in jumatatea posterioara) a embrionului proteina nanos se leaga de o secventa specifica din regiunea 3 UTR a ARN hunchback maternal, blocand traducerea determinand si degradarea acestui ARNm -in jumatatea post a embrionului nu exista proteina hunchback m (maternala) DESEN 2 Grupul Terminal -este diferit de grupul anterior si posterior in 2 aspecte 1)-controleaza 2 domenii embrionare ca nu sunt continue (acronul si telsonul) 2)-spre deosebire de ARN bicoid si ARN nanos, care prezinta o localizare precisa in ovocit, ARN torso este localizat in toata citoplasma ovocitului -ARN torso este produs tot in celulele nutritive si transportat in ovocit -este tradus dupa fecundare, proteina torso fiind reprezentata de un receptor tirozin-kinazic localizat in toata mb plasmatica a embrionului timpuriu, dar activat doar la cei 2 poli ai embrionului de un ligand prezent in anvelopa vitelina 2

La baza intelegerii acestor grupuri genice, au stat 2 tipuri de metode: analizele genetice transplantul de citoplasma Analizele genetice -deoarece genele polaritatii embrionului sunt transcrise din genomul matern in cursul ovogenezei, iar produsii lor actioneaza la scurt timp dupa fecundare -fenotipul embrionului depinde de alelele prezente la mama -genele coodronatoare maternale, au fost descoperite pe baza analizei fenotipurilor mutante ale embrionilor proveniti din femele fenotipic normale dar care prezentau o mutatie ce determina formarea de ovocite anormale -mutatiile cu caracter maternal sunt cel mai frecvent recesive, musculitele fiind homozigote pentru gena mutanta -EX: in generatia bunicilor, bunicul si bunica sunt heterozigoti pentru o mutatie pe care o notam m -ovocitele provenit de la bunica prezinta in citoplasma produsul normal al genei, de ex: ARN bicoid, insa unele ovocite de la bunica prezinta gena respectiva in stare mutanta -fecundarea unui astfel de ovocit cu un spermatozoid care contine gena recesiva tot in stare mutanta, determina formarea unui embrion normal, dar care va fi homozigot pentru gena mutanta -astfel de embrioni vor da nastere la femele homozigote pentru gena mutanta, aceste femele sunt fenotipic normale, dar vor produce ovocite anormale care nu prezinta in citoplasma produsul genei respective (gena bicoid) -daca un astfel de ou este fecundat cu un spermatozoid ce contine gena normala se vor forma embrioni anormali deoarece nu contin in citoplasma produsul normal al genei -acesti embrioni anormali vor diferentia in larve si adulti anormali Transplantul de citoplasma -s-a constatat ca daca se inteapa polul anterior al embrionului timpuriu de Drosophila si se lasa sa iasa putin citoplasma, se constata ca larvele nu prezinta structurile anterioare -daca se aspira citoplasma din polul anterior al altui embrion si se introduce in polul anterior al embrionului de la care s-a scos citoplasma, larvele pot dezvolta structurile anterioare -daca se recolteaza citoplasma din polul posterior al altui embrion si se introduce in polul anterior al embrionului de la care s-a scos citoplasma, se constata ca larva va avea 2 regiuni posterioare -prin aceste experimente s-a demonstrat ca citoplasma embrionului timpuriu contine factori morfo-genetici implicati in formarea structurilor larvare II Genele zigotice -sunt activate dupa fecundare intr-o cascada reglatorie -pe baza fenotipurilor mutante si a caracteristicilor de exprimare s-au descris 3 categorii de grupuri zigotice: 1)-genele domeniilor nerepetitive 2)-genele perechi 3)-genele polaritatii segmentelor 1)-genele domeniilor nerepetitive -se mai numesc si gene gap (lipsa, lacuna), pentru ca embrionii mutanti pierd regiuni corporale mari situate anterior mijlociu sau posterior -in mod normal aceste gene se exprima in stadiu de blastoderm sincitial si sunt responsabile de formarea primelor regiuni embrionare -gena hunchback (hb2) (cocoasa) zigotica, denumita dupa fenotipul mutant, caracterizat prin pierderea capului si a toracelui -gena se exprima in mod normal in regiunea anterioara a embrionului -Kruppel-schilod, invalid, denumita dupa fenotipul mutant, caracterizat prin pierderea regiunea abdominala anterioara -in mod normal gena se exprima in regiunea mijlocie a embrionului 3

-gena knirps (kni) pitic (ger), denumita dupa fenotipul mutant, caracterizat prin pierderea regiunii abdonilae posterioara ale larvelor -in mod normal gena se exprima in regiunea posterioara a embrionului -gena tailless (tll)-denumita dupa fenotipul mutant, caracterizat prin lipsa exteremitatilor (acton si telson) -in mod normal gena se exprima la cele 2 extremitati ale embrionului -gena giant-carac prin fenotipul mutant anomalii ale segmentelor abdominale 2)-genele perechi -poarta aceasta denumire pentru ca se exprima in domenii liniare -cand proteinele codificate de aceste gene sunt detectate imuno-histo-chimic, ebrionul are aspect de zebra - genele se exprima inaintea stadiului de blastoderm celular numai intr-o parte a fiecarui parasegment -mutatiile acestor gene indeparteaza parti din parasegmente, a.i. larva are jumatate din segmentele normale -gena fushi tarazu (ftz)-putine segmente, denumita dupa fenotipul mutant in care larvele pierd segmentele impare si raman doar cu cele pare -in mod normal gena se exprima sub forma a 7 benzi transversale in embrion -este o proteina cu homeodomeniu -gena even-skipped (eve)-denumita dupa fenotipul mutant (eng: a omite ce este par)-larvele mutante pierd segmentele pare si raman cu cele impare -exprimarea genelor fushi-taratzu si even-skipped (eve) este foarte importanta pentru ca dupa exprimarea lor parasegmentele contin grupuri distincte de celule fiecare gena exprimand o anumita gena pereche 3)-genele polaritatii segmentelor -incep sa fie transcrise intre stadiul de blastoderm celular si gastrula -mutatiile acestor gene determina pierderea unor parti din parasegmente si inlocuirea lor cu partea anterioara sau posterioara din parasegmentele adiacente -gena engrailed (en)-(eng. Contur andulat) in larvele mutante regiunile posterioare ale segmentelor sunt inlocuite cu o imagine in oglinda a regiunii anterioare a segmentului respectiv -in mod normal gena se exprima in regiunea posterioara a parasegmentelor -gena wingless (wg) denumita dupa fenotipul mutant lipsa aripii, ulterior s-a descoperit ca ea este implicata si in embriogeneza timpurie -in larvele mutante regiunile anterioare ale segmentelor sunt inlocuie cu o imagine in oglinda a regiunilor posterioare din segmentele adiacente -in mod normal gena se exprima in regiunile anterioare ale parasegmentelor -marcarea regiunilor anterioare si poasterioare ale fiecarui parasegment este foarte importanta, deoarece aceste 2 regiuni vor apartine la 2 segmente larvare diferite PARASEGMENTE-la embrioni SEGMENTE-la larva DESEN 3 Controlul genic al genelor domeniilor nerepetitive -genele domeniilor nerepetitive sunt activate de produsii maternali stocati in anumite regiuni embrionare -dependenta genelor zigotice de produsii maternali a fost demonstrata prin studii de mutageneze -ex: in cazul mutantelor bicoid (gena bicoid nu se exprima si in consecinta nu exista proteina bicoid in embrion), gena hunchback zigotica nu se exprima, domenuul de exprimare al genei Kruppel se extinde anterior, iar gena knirps nu este afectara Concluzia: in mod normal, proteina biocoid activeaza gena hunckback zigotica si blocheaza gena kruppel in regiunea anterioara a embrionului -in mutantele oskar, gena oskar nu se exprima si nu exista proteina oskar in embrion, gena knirps nu se exprima, domeniul de exprimare al genei kruppel se extinde posterior, iar gena junchback zigotica nu este afectata Concluzia: in mod normal proteina oskar activeaza gena knirps si blocheaza gena kruppel in regiunea posterioara a embrionului 4

Pe baza acestor experimente s-a realiazat un model al formarii primelor 3 regiuni embrionare -astfel in regiunea anterioara a embrionului, proteina bicoid activeaza gena hunckback zigotica si blocheaza gena Kruppel -gena hunchback maternala blocheaza gena knirps -in regiunea posterioara a embrionului proteina oskar activeaza gena knirps si activeaza gena Kruppel -proteina nanos blocheaza traducerea ARN hunchback maternal -in aceasta regiuna gena hunachback zigotica nu se poate exprima pentru ca nu exista proteina bicoid -datorita acestor relatii reglatorii, gena kruppel se paote exprima doar in regiunea mijlocie a embrionului -regiune unde nu exista proteina oskar sau proteina bicoid care sa o blochez -deoarece proteina bicoid este prezenta si in prima jumatate a regiunii mijlocii, s-a pus intrebarea de ce gena hunchback zigotica nu este activata si in aceasta regiune -analizele moleculare au aratat ca in regiunea promotor a genei hunckback zigotice exista 6 secvente pentru legarea proteine bicoid, gena fiind transcrisa doar cand toate celelalte 6 situsuri sunt ocupate -pentru ca proteina bicoid este dispusa sub forma unui gradient de concentratie, cu cat ne indepartam de regiunea anterioara, catitatea de proteina bicoid scade, a.i. nu se mai ocupa cele 6 situsuri din promotorul hunchback zigot si din acest motiv nu este transcrisa gena si in regiunea mijlocie DESEN