GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Prin definiie glicoliza este conversia glucozei n piruvat, cu producere de ATP i NADH. Glicoliza este foarte intens n creier, muchi, ficat, rinichi, iar pentru anumite tipuri de celule, eritrocite, neuroni, spermatozoizi ea este principala surs de energie. Gluconeogeneza este sinteza glucozei din precursori neglucidici cum ar fi, piruvatul i lactatul; glicerolul; intermediarii ciclului citric; 18 aminoacizi codificai genetic numii i aminoacizi glucoformatori. Aceti precursori pot fi transformai ntr-un metabolit comun oxalacetatul, care este materialul de pornire al gluconeogenezei hepatice.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Lactat Glicerol Ala Cys Gly Ser Thr Trp O H3C C O C Glucoz O CH 2
-

DOAP

Piruvat OO Asp Asn C O C

-

O O Oxaloacetat Malat O C O Phe Tyr

-

Acetil-CoA

Citrat

O CH CH Fumarat Succinat C O
-

Izocitrat O C O O C O
-

CH 2 CH 2 C O Cetoglutarat O C O
-

O CH 2 CH 2 C Succinil-CoA Ile Met Val SCoA Arg Glu Gln His Pro

Propionat

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Gluconeogeneza poate avea loc n principal n dou organe, ficatul i rinichii i intensitatea ei depinde de condiiile metabolice. n condiii normale ficatul asigur 85-95% din necesarul total de glucoz. Efortul fizic prelungit consum rapid rezervele de glicogen hepatic i muscular, ceea ce face necesar intensificarea gluconeogenezei n ficat, din precursori cum ar fi lactat rezultat din glicoliza anaerob, precum i din glicerolul rezultat n urma lipolizei hormon dependente. Glicoliza i gluconeogeneza, joac un rol important n energogenez, i n homeostazia glicemiei. Intensifi carea gluconeogenezei determin intensificarea conversiei aminoacizilor gluconeogenetici circulani, care pot fi de origine alimentar, n intermediari ai ciclului citric ct i degradarea acizilor cu numr impar de atomi de carbon n propiaonat.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Pi
Glucozo6-fosfataza

Glucoza

AT P
Hexokinaza

1
G-6-P

H 2O

ADP

Fosfogluco izomeraza

Pi
Fructozodifosfataza

F-6-P

AT P
Fosfofructo kinaza

2
F 1,6-P2

H 2O

ADP

Aldolaza

DOAP

http://youtu.be/O5eMW4b29rg
NAD++Pi
Gliceraldehid-3-P dehidrogenaza

NAD++Pi

Triozofosfat izomeraza

Gliceraldehid -3-P

NADH+H +

NADH+H +

1,3-difosfoglicerat ADP ADP

Fosfoglicerokinaza

AT P AT P 3-fosfoglicerat
Fosfogliceratmutaza

2-fosfoglicerat
Enolaza

GDP+CO2
PEPCK

Fosfoenolpiruv at ADP
Piruvat kinaza

3 GT P Oxaloacetat
ADP+Pi
Piruvat carboxilaza

AT P Piruv at

AT P+CO 2

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
CH2OPO 3 CH2OH O H +ATP Mg 2+ H O H H + H H + ADP + H OH H OH H hexokinaza OH OH HO HO H H OH OH
Glucoza Glucozo-6-fosfat
2-

NH 2 Pe de alt parte glucokinaza este o enzim inductibil a crei n loc de hexokinaz, ficatul conine glucokinaz, enzim Hexokinaz (HK), enzim reglatoare a glicolizei, relativ sintez crete i n dieta bogat n glucide i la C N ca rspuns N C este mult mai mic, specific a insulin. crei afinitate pentru glucoz nespecific, care acioneaz n toate celulele din esuturile secreia de Cu alte cuvinte, atunci cnd dieta este CH C la HC este ceea ce c este semi -saturat oD concentraie mai extrahepatice care conin D glucoz sau manoz. bogat nnseamn glucide excesul de glucoz convertit de GK n N O O O N mare dect glucozei snge. ntruct Mecanismul este de tipul n potrivirii induse. glucozo-6P, concentraia care nu inhib glucokinaza, G-6-P fiind transportul apoi - reaciei O P O P hepatocitului O P O CH2 este 2+ O ioni glucozei prin membrana facil, concentraia Hexokinaza, ca i alte kinaze, necesit Mg deoarece convertit n glicogen. Astfel este prevenit creterea postO O este H de Hglicemie 42intracelular a acesteia apropiat permind ca adevratul substrat nu esteO ATP ci complexul ATPMg prandial a glicemiei n circulaia sistemic. H 2+ Mg glucokinaza (GK) s controleze nH mod direct nivelul glicemiei. OH OH

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
CH2OPO 3 O H H H OH H OH HO H OH
Glucozo-6-fosfat
2-

fosfoglucoizomeraza

CH2OPO 3 O CH2OH H HO H OH HO H
Fructozo-6-fosfat

2-

Enzima este fosfogluco izomeraza (PGI) a crei activitate depinde de pH, care acioneaz dup mecanismul de tip acidobazic.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
CH2OPO 3 O CH2OH 2+ Mg H HO H OH fosfofructoHO H
kinaza Fructozo-6-fosfat
2-

CH2OPO 3 O CH2OPO 32H HO H OH

+

2-

ATP

ADP+H

HO

Fructozo-1,6-difosfat

Enzima este fosfofructokinaza (PFK1) care joac un rol central att n reglarea glicolizei ct i a gluconeogenezei. Este activat alosteric de AMP i fructozo-2,6-P2 i este inhibat alosteric de ATP i citrat. PFK1 este mai important dect hexokinaza datorit rolului jucat de G-6-P n metabolismul glucidic. G-6-P poate proveni nu numai din glucoz ci i din glicogen, n special n muchiul scheletic, ceea ce reduce rolul HK n controlul glicolizei.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
CH2OPO 3 C HO H H C C C O H
aldolaza
2-

CH2OPO 3 C HO O

2-

OH OH
2-

Dihidroxiaceton fosfat

CH2 O

H H

+ C C

OH
2-

CH2OPO 3
Fructozo1,6-difosfat

CH2OPO 3
Glicerinaldehid 3-fosfat

Clivajul aldolic rupe F-1,6-P2 ntre C(3) i C(4) rezultnd doi compui cu schelete identice, triozofosfaii: dihidroxiaceton fosfat (DOAP) i gliceraldehid-3-P (GA-3-P). Enzima, aldolaza A catalizeaz reacia dup un mecanism de tip acido-bazic. De asemenea aldolaza catalizeaz formarea temporar a unei baze Schiff ntre gruparea carbonil a F-1,6-P2 i un radical de lizin prin care se faciliteaz ruperea legturii C(3)-C(4).

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
HO CH2 C O
triozofosfat 2- izomeraza

H H

C C

O OH
2-

CH2OPO 3
Dihidroxiaceton fosfat

CH2OPO 3
Glicerinaldehid 3-fosfat

Numai unul din triozofosfai continu pe cale glicolitic, GA-3P, care poate proveni i din DOAP. Enzima reaciei de interconversie este triozofosfat izomeraza (TPI) a crei activitate depinde de pH i ca i n cazul fosfogluco izomerazei n centrul activ al TPI sunt doi radicali de aminoacizi avnd funcii de baz generalizat, respectiv acid generalizat.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
H H C C O OH
2-

gliceraldehid-3-fosfodehidrogenaza

O H

C C

OPO 3 OH

2-

2CH2OPO 3 O CH2OPO 3 O + + NAD +Pi NADH+H 1,3-DifosfoGlicerinaldehid O P glicerat 3-fosfat O O este C o reacie exergonic furnizeaz Oxidarea aldehidei care cu energie liber sinteza din compusul H legturii C OHmacroergice O super-macroergic 1,3 difosfoglicerat (1,3-DPG). O P CH2O Enzima este gliceraldehid-3-P dehidrogenaza (GA-3-P-DH) care, poate fi otrvit de acidul iodacetic,prin alchilare a unui O radical de Cys din structura GA-3-P-DH, prin urmare, prin urmare enzima aparine 1,3-Difosfogrupei tiol-enzimelor.

glicerat

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
O H C C OPO 3 OH
22-

fosfoglicerat kinaza

O H

C C

O OH
2-

CH2OPO 3
1,3-Difosfoglicerat

Mg ADP

2+

CH2OPO 3 ATP
3-Fosfoglicerat

n aceast transformare reversibil compusul macroergic 1,3DPG, produce fosforilarea ADP, reacia numindu-se fosforilare la nivel de substrat. Enzima care catalizeaz aceast reacie este fosfoglicerat kinaza (PGK). Conformaie ei este bilobat, unul din domenii coninnd centrul de asociere a substratului ADP Mg iar cellalt domeniu conine al doilea centru, cel de asociere a substratului 1,3-DPG. Prin asocierea substraturilor cele dou centre se apropie permind substraturilor s reacioneze.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
-

O H

C C

O OH
2-

fosfoglicerat mutaza

O H

C C

2-

OPO 3

CH2OPO 3
3-Fosfoglicerat

CH2OH
2-Fosfoglicerat

Enzima care catalizeaz aceast reacie este o fosfoglucomutaz (PGM). n stare activ aceasta are o grupare fosforil n centrul su activ. n prima etap ea transfer fosforilul la substrat (3-PG) pentru a forma intermediarul difosforilat 2,3-difosfoglicerat (2,3-DPG). n urmtoare etap acest intermediar refosforileaz enzima care se regenereaz, rezultnd produsul 2-fosfoglicerat (2-PG). Prin disocierea 2,3-DPG de enzim aceasta din urm se dezactiveaz deoarece rmne n stare nefosforilat. Prin urmare sunt necesare cantiti catalitice de 2,3-DPG pentru regenerarea mutazei active, esterul difosforic jucnd rolul unui primer al PGM.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Gliceraldehid-3-fosfat GAPDH 1,3-Difosfoglicerat PGK 3-Fosfoglicerat PGM 2-Fosfoglicerat Pi 2,3-difosfoglicerat fosfataza difosfoglicerat mutaza O H C C O
22-

OPO 3

CH 2OPO 3 2,3-Difosfoglicerat

n eritrocite exist dou enzime care realizeaz o "bucl metabolic" corelat cu glicoliza, necesar sintezei 2,3-DPG. Ea const n conversia 1,3-DPG n 2,3-DPG sub aciunea unei mutaze i n transformarea 2,3 DPG n 3-PG sub aciunea unei fosfataze. Aceast bucl elimin reacia de fosforilare la nivel de substrat, ceea ce anuleaz beneficiul energetic (ATP) creat de glicoliz n eritrocit.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
O H C C O
2- enolaza

O H

C C CH2

2-

OPO 3

OPO 3 +H2O

CH2OH
2-Fosfoglicerat

Fosfoenolpiruvat

Enzima, o enolaz catalizeaz eliminarea apei, determinnd rearanjarea atomilor. Astfel se produce cel de-al doilea compus super-macroergic al glicolizei, fosfoenolpiruvatul (PEP). Pentru formarea complexului enzim-substrat este absolut necesar prezena cationilor bivaleni Mg2+ sau Mn2+. Fluorura inhib activitatea enolozei probabil prin formarea fluorofosfatului de magneziu (compus insolubil). Se pare c toate enzimele care necesit drept activator ionii de Mg2+, sunt inhibate de ionul de fluorur.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
O H C C CH2 O
2-

OPO 3

piruvat kinaza

C C

Fosfoenolpiruvat

ADP+H

ATP

CH3
Piruvat

Aceasta reacie este tot o fosforilare la nivel de substrat. Mecanismul reaciei implic dou etape. n prima etap, gruparea fosfat de pe fosfoenolpiruvat este transferat ADPului care se transform n ATP. Etapa a doua const n tautomerizarea enolpiruvatului n piruvat. n condiii fiziologice reacia este puternic exergonic, adic este ireversibil. Enzima este piruvat kinaza (Pyr-K), care de fapt catalizeaz numai prima etap, cea de-a doua avnd loc neenzimatic.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
O C R N H+C H C NH 2 O
NADH

O C R
+N

OH

CH3
Piruvat

C NH 2 O
NAD
+

Lactat

CH3

O C C CH3
Piruvat

piruvat decarboxilaza

H C CH3 O

alcool dehidrogenaza

H H C OH

CO2 Acetaldehida NADH

CH3 NAD
+

Etanol

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
n pofida simetriei celor dou conversii (glucoz piruvat) parcurgerea n sens invers nu este identic cu parcurgerea n sens direct a ei. n condiii fiziologice, din cele 10 reacii ale glicolizei, trei sunt ireversibile 1, 3, 10. Parcurgerea n sens invers a acestor 3 reacii necesit un echipament enzimatic specific gluconeogenezei, n timp ce parcurgerea n sens gluconeogenetic a celorlalte 7 reacii utilizeaz aceleai enzime ca i glicoliza datorit reversibilitii lor.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
membrana mitocondrial

CITOSOL Pyr

MATRIX MITOCONDRIAL
+

Pyr

PEP nu furnizeaz NADHpiruvat Dac precursorul citosolar, strict GDP carboxilaz necesar gluconeogenezei n faza ei citosolar, se parcurge CO2 PEP-CK calea malat. Este cazul precursorilor piruvat i alanin. ADP+Pi GTP OA OA NADH NAD
+

ATP+CO 2

NADH

malat DH

malat DH

NAD MALAT MALAT

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
NAD CITOSOL + LACTAT
membrana mitocondrial

MATRIX MITOCONDRIAL

Dac poate furniza NADH n citosol, se NADH parcurge caleaPyr PEP este calea al crei precursor Pyr ATP+CO 2 gluconeogenetic este lactatul H+
piruvat carboxilaz

lactat DH precursorul

OA

ADP+Pi GTP CO2

PEP-CK

PEP

PEP

GDP

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Aceast reacie este a doua reacie tipic gluconeogenetic care ocolete reacia glicolitic 3. Bypass-ul gluconeogenetic este posibil datorit prezenei fructozo-1,6-difosfatazei, enzim Mg2+ dependent, care, n condiiile artate, face ca reacia ocolitoare chiar s genereze energie liber. Fructozo1,6- difosfat este principala enzim reglatoare a gluconeogenezei al crei control alosteric se face prin activare de ctre citrat i prin inhibiie de ctre AMP i F-2,6P2. Activatorii alosterici ai fructozo-1,6-difosfatazei sunt inhibitori ai PFK1 i invers activatorii alosterici ai PFK1 sunt inhibitori ai fructozo-1,6-difosfatazei.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Este a treia reacie gluconeogenetic care ocolete reacia glicolitic. Enzima hidrolitic este glucozo-6-fosfataza Mg2+ dependent. Ea este localizat n reticulul endoplasmatic al hepatocitelor fiind absent n muchi sau n creier, ceea ce face ca gluconeogeneza s nu se poat produce n aceste esuturi. Muchii i creierul sunt principalii consumatori de glucoz sintetizat de ficat i rinichi

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
n condiii anaerobe, adic atunci cnd are loc fermentaia lactic, n care NAD+ se reface reacia global este: C6H12O6 +2(ADP+Pi)2C3H6O3+2ATP Bilanul energetic net: 2 moli ATP/mol glucoz.

n condiii aerobe, piruvatul rezultat n glicoliz se transform prin decarboxilare oxidativ n acetil CoA, care n ciclul citric se transform n dioxid de carbon i ap cu eliberare de ATP, NADH i FADH2. Echivalenii reductori (NADH i FADH2) n lanul de oxidare biologic se vor transforma n ATP

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Glicoliza: C6H12O6+2(ADP+Pi)+2NAD+ 2C3H4O3+2ATP+2(NADH+H+) Piruvatul rezultat din glicoliz, pe calea decarboxilrii oxidative se transform n acetil CoA: 2C3H4O3+2CoASH+2NAD+2CH3COSCoA+2(NADH+H+)+2CO2 Acetil CoA va fi degradat n ciclul citric al crei reacii globale este: 2CH3COSCoA+6NAD++2FAD+2(ADP+Pi)6(NADH+H+)+2FADH2 +2ATP+6H2O+4CO2+2CoASH Echivalenilor reductori prin fosforilare oxidativ sunt transformai n ATP: 10 moli NADH x 3 = 30 moli ATP 2 moli FADH2 x 2= 4 moli ATP Total: 34 moli ATP/mol glucoz

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Dac se utilizeaz navetei glicerol-3-fosfat, adic internalizarea NADH se face prin aceast navet (muchi scheletic, creier) ea produce conversia NADH+H++FADNAD++FADH2 Prin aceasta echivalenii reductori care intr n lanul de oxidare biologic sunt: 8 moli NADH+H+ +4moli FADH2/mol glucoz. Bilanul energetic general este 36 moli ATP/mol glucoz.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Considerm utilizarea navetei malat-aspartat. Dac internalizarea n mitocondrie a NADH se face prin aceast navet (ficat, rinichi, miocard) bilanul energetic general al oxidrii unui mol de glucoz este: 2 moli ATP (glicoliz) + 2 moli ATP (ciclul citric)+34 moli ATP = 38 moli ATP/mol glucoz.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

+
PFK1

F-2,6-P2 AMP F-6-P

F-1,6-P2-aza

F-1,6-P2

Citrat ATP

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
F-2,6-P2, este un reglator al crui nivel celular depinde de nivelul sanguin al glucagonului. F-2,6-P2 se sintetizeaz prin fosforilarea F-6-P sub aciunea PFK2 i se retransform n F-6-P prin hidroliza F-2,6-P2 sub aciunea F-2,6-P2-azei. Cele dou activiti enzimatice fac parte dintro protein bifuncional, numit tandem enzimatic ale crei activiti enzimatice depind de nivelul glucagonului.
glicemia [glucagon] AMPc PK+ EB-P F2,6P2-aza+ [F2,6P2]

F1,6P2-aza+ gloconeogeneza + glicemia

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA

Intensitatea fluxului glicolitic n ficat este influenat de insulina prin inducia glucokinazei i a enzimelor-cheie ale glicolizei n unele esuturi extrahepatice. De asemenea acest hormon reprim enzimele gluconeogenetice. Cortizolul (hidrocortizonul) activeaz gluconeogeneza (hiperglicemiant) prin stimularea proteolizei musculare care are drept rezultat eliberarea aminoacizilor glucoformatori.

GLICOLIZA I GLUCONEOGENEZA
Un punct de control specific gluconeogenezei este constituit de cuplul PyrDH/Pyr-carboxilaz. n acest important nod metabolic Pyrcarboxilaza necesit acetil-CoA ca efector alosteric pozitiv. Ca o consecin a acestei reglri biosinteza glucozei din piruvat are loc numai atunci cnd exist un exces de acetil-CoA care depete necesitile ciclului citric. Excesul de acetil-CoA se creeaz atunci cnd fosforilarea oxidativ se ncetinete, NADH se acumuleaz i inhib ciclul citric, ceea ce determin acumularea substratului ciclului. Acetil-CoA inhib complexul Pyr-DH ncetinind formarea ei nsi din Pyr i stimulnd gluconeogeneza prin activarea Pyr-carboxilazei. n consecin excesul de Pyr se transform n glucoz
[NADH+H+] CK [acetil-CoA] Pyr Carboxi + [OA] gloconeogeneza + G Pyr DH inhib. prod. de reacie [acetil-CoA]