TESTELE ADN

ÎN PRACTICA
MEDICO-LEGALĂ ȘI ÎN
STABILIREA FILIAȚIEI

Tehnici de analiză a ADN-ului

 ELECROFOREZA - principiu/definiție

Metodă fizico-chimică ce
permite separarea
particulelor încărcate electric
într-un suport, sub acțiunea
unui curent electric uniform
aplicat din exterior

- Orice moleculă biologică

(ADN, proteine etc.) încărcată
electric poate fi caracterizată
și separată prin electroforeză.
 ELECTROFOREZA ADN-ului
• Separarea produșilor pe baza greutății moleculare.
• Gelul de agaroză reprezintă matrița solidă, care îndeplinește rolul de sită moleculară sub
acțiunea unui câmp electric extern, în momentul în care probele de ADN sunt plasate în el.
• La aplicarea curentului electric moleculele de ADN fiind încarcate negativ (grupările fosfat),
vor migra spre anod.

• Detectarea prezenței și determinarea mărimii moleculare a produșilor PCR este posibilă

datorită utilizării unor markeri moleculari a căror mărime este cunoscută

• După finalizarea migrării probelor în gelul de agaroză, datorită proprietăților fluorescente

ale unui fluorocrom introdus in gel se pot vizualiza produșii PCR cu ajutorul unui
transiluminator cu UV
ELECTROFOREZA ADN-ului
 Electroforeza ADN în gel de agaroză
1. Prepararea
gelului de
agaroză

2. Încărcarea
probelor în gel
3. Separarea fragmentelor de
ADN după aplicarea unui
curent electric din exterior

Direcția de
migrare
Agaroza formează o rețea – fragmentele de
ADN străbat rețeaua cu viteze diferite
Agaroză 1%

Agaroză 2%
 Colorarea gelului de agaroză:

- Adăugarea uni
fluorocrom în gelul
de agaroză (înainte
de polimerizare)
Vizualizarea fragmentelor de ADN separate
în gelul de agaroză

Transiluminator cu
lumina UV
Electroforeza ADN-ului

Fragmente de ADN separate în gel de agaroză – colorare cu fluorocromi

(separarea depinde doar de greutatea moleculară).
Gelurile se pot fotografia, iar interpretarea rezultatelor se va face în PC