UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

METABOLISMUL TESUTURILOR SPECIALIZATE

METABOLISMUL HEMULUI

Cursul 24

1/8/2020 1
 BIOSINTEZA HEMULUI
Hemul este sintetizat în toate tesuturile mamiferelor, mai pronuntat în maduva
osoasa si ficat datorita necesitatilor acestor structuri de a-l incorpora în Hb si
respectiv în citocromi. Etape localizate în mitocondrie si în citosol.

1) condensarea glicinei cu succinil CoA cu formare de -aminolevulinat AL (-

aminolevulinat sintaza)

2) condensarea a 2 molecule de AL (-aminolevulinat dehidraza) la porfobilinogen

1/8/2020 Prof. Dr. Dana Iordachescu 2

3. Condensarea a 4 molecule de porfobilinogen cap-coada conduce la sinteza unui
tetrapirol linear care se ciclizeaza formand uroporfirinogenul III cu un aranjament
asimetric al radicalilor – reactie care necesita prezenta unei sintaze si a unei
cosintaze,

In lipsa cosintazei se formeaza

uroporfirinogenul I simetric
1/8/2020 3
 4) Decarboxilarea catenelor acetat cu formare de coproporfirinogen III ,
sub actiunea uroporfirinogen decarboxilazei

-CH2-COOH pozitiile 1,3,5,8 -CH3pozitiile 1,3,5,8

1/8/2020 4
 5) Transformarea a 2 resturi propionat in grupari vinil – oxidare si
decarboxilare, sub actiunea coproporfirinogen III oxidazei

1/8/2020 5
 6) Aromatizarea sub actiunea protoporfirinogen III oxidazei

1/8/2020 6
7) Chelatarea Fe cu formarea hemului, sub actiunea ferochelatazei

1/8/2020 7
1/8/2020 8
 Repartitia intracelulara

1/8/2020 9
 -aminolevulinat sintaza (ALS)
- limiteaza viteza intregii cai
anabol
- initial se sintetizeaza o enzima
citosolica - dimer 2, M = 71 KD,
contine o secventa de
semnalizare N-terminala ce o
directioneaza spre mitocondrie
- intervine o proteina chaperon citosolica de 70 KD ce mentine ALS in forma nepliata, ce
poate strabate membrana mitocondriala (proces ATP dependent).
- in matricea mitocondriala, este scindata secventa semnal N-terminala de catre o
metalo-proteaza, producand forma activa a ALS cu subunitati de 65 KD fiecare. In
interiorul matricei, o proteina chaperon mitocondriala (oligomer cu 14 subunitati, de 60
KD fiecare) catalizeaza plierea corecta a ALS printr-un proces ATP dependent
- are un timp de injumatatire biologic scurt ( ~60 minute)
- atat sinteza cat si activitatea enzimei sunt supuse reglarii printr-o mare varietate de
substante
Hemina, produce 50 % inhibitie in conc de 5 M si 100 % inhibitie la 20M
prezinta necesitati absolute pentru piridoxal 5-fosfat; deficienta in PALP si
medicamentele ce competitioneaza cu PALP → scaderea activitatii enzimatice.

1/8/2020 10
 AL dehidraza
SH enzima
foarte sensibila la inhibitia cu ioni metalici.
intoxicatiile cu Pb, creste [AL] si scade [porfobilinogen]
enzima citosolica - 280 KD - 8 subunitati, dintre care numai 4 reactioneaza cu
substratul.

Uroporfirinogen sintaza
porfiria eritropoietica - maladie ereditara rar recesiva-asociata cu o sensibilitate
cutanata la lumina- datorata deficientei in cosintaza in eritrocite -se sintetizeaza
cantitati mari de uroporfirinogen I si coproporfirinogen I in maduva oaselor.

Uroporfirinogen decarboxilaza
inhibata de sarurile de Fe
existenta unei singure gene anormale a acestei enzime este cea mai comuna
cauza a maladiilor porfirinice, cind activitatea ei catalitica este inhibata cu 50 %
Porphyria cutanea tarda - maladie caracterizata printr-o sensibilitate cutanata la
lumina apare la pacientii care iau medicamente ce cresc sinteza porfirinei sau
care consuma cantitati mari de alcool, ce conduce la o acumulare de Fe, ce
inhiba enzima.

1/8/2020 11
Coproporfirinogen oxidaza
deficienta in aceasta enzima poarta numele de coproporfirie ereditara, o
forma de porfirie hepatica.

Protoporfirinogen oxidaza
enzima mitocondriala, solubila in apa, a carei deficienta conduce la
porfiria variegate.
excesul de protoporfirina IX ne transformat in hem este excretat prin
sistemul biliar in tractusul intestinal
.
Ferochelataza
enzima ce leaga Fe2+ la protoporfirina IX, necesitind coprezenta unor
substante reducatoare.
in lipsa de Fe2+ poate fi incorporat Zn2+ formindu-se un complex
florescent, detectabil in cantitati mici
sensibila la prezenta metalelor grele (Pb) si la lipsa de Fe.

1/8/2020 12
 Controlul biosintezei hemului

AL sintaza (ALS)
este enzima cheie din cadrul controlului biosintezei hemului.
Substratele ei - succinil CoA si glicocolul – implicate intr-o varietate de reactii -
intrarea lor in biosinteza hemului trebuie controlata riguros.
Hemul si hematina (combinatia Fe3+-protoporfirina IX) actioneaza ca un represor
al biosintezei ALS si ca un inhibitor al activitatii ei. Hemul este un inhibitor
alosteric.
Aproximativ 100 metaboliti si medicamente induc biosinteza AL sintazei, in
special barbituricele.

AL dehidraza
Hemul inhiba activitatea si, cu mici consecinte fiziologice deoarece concentratia
acestei enzime este de 80 ori mai mare decit cea a AL sintazei.
Glucoza si unii metaboliti ai ei inhiba biosinteza hemului printr-un mecanism
necunoscut.
Hormonii steroidici au actiune reglatoare asupra biosintezei hemului.

1/8/2020 13
 Porfirii
- Grup de boli rare datorate
deficientei unor enzime din calea
de biosinteza a hemului
- Majoritatea - boli dominant
autoso-male ce afecteaza
sanatatea cand nivelul lor este
diminuat cu 50 %
-Se acumuleaza precursori ai
hemului – toxici la concentratii
mari
-Atacuri ale bolii induse de
anumite medicamente, substante
chimice, alimente, expunere la
soare

1/8/2020 14
 Turnover-ul eritrocitelor

1/8/2020 15
Distrugerea eritrocitelor

Eritrocitele – au o viata de 120 zile

Celulele batrâne (senescente) au eficienta metabolica scazuta, deformabilitate
scazuta, modificari in membrana lor - sunt captate de sistemul reticulo-
endotelial la nivelul unor situsuri extravasculare - catenele globinei sunt
denaturate si hidrolizate la aminoacizii constituenti care sunt reutilizati pentru
necesitatile metabolice generale.
Are loc catabolismul hemului
Exista mecanisme de salvare si reutilizarea a Fe in sinteza hemoglobinei

Ilustrarea ipotetica a modului in

care macrofagele fagociteaza
eritrocitul si generarea CO prin
reactia catalizata de HO-1 (hem
oxigenaza 1): IRP1 (iron
regulatory protein); Nramp2
proteina de transport a Fe din
membrana endosomilor, sGC
guanil ciclaza solubila

1/8/2020 16
 Catabolismul hemului cu formarea bilirubinei

Prima reactie este catalizata de hem

oxigenaza microzomala si conduce la
biliverdina IX
Hem oxigenaza: sistem enzimatic
microzomial din celulele reticulo-endoteliale,
inductibil de hem; substrate: hem, 3 molecule
O2, NADPH; protoporfirina IX nu este
substrat
Are loc scindarea macrociclului tetrapirolic
intre nucleele I si II, gr -metilen este trans-
formata cantitativ in CO care partial este
eliminat prin tractul respirator [dozarea CO in
gazele pulmonare expirate – indice al
degradarii hemului la un individ]

Biliversina - simetrica in raport cu gruparile P

1/8/2020 17
 3 izoforme ale hem oxigenazei
HO-1 si HO-2 sunt exprimate in forma catalitic activa. HO-3 nu este
sintetizata intr-o forma catalitic activa fiind un senzor de O2.
HO-1 este izoforma inductibila ca raspuns la stresul oxidativ, hipoxie, metale
grele, citokine, etc.
HO-2 este o izoforma constitutiva exprimata in conditii homeostatice.
BV – biliverdina; BR - bilirubina

1/8/2020 18
 A doua reactie este catalizata de biliverdin
reductaza - o FAD-enzima cu o
specificitate dubla pentru NADH si
NADPH - 296-aminoacizi, contine Zn.
Se formeaza bilirubina IX
- un pigment biliar abundent,
- un antioxidant puternic care protejeaza
celulele de excese de 10 000 ori mai mare
de H202 – are un efect citoprotectror
fiziologic major;
- produce icter

1/8/2020 19
 Conjugarea bilirubinei
- solubilitatea bilirubinei in lipide determina
comportamentul/metabolismul ulterior
-este transportata prin sange in stare legata
la albumina serica, constanta de asociere>10
6M-1. Albumina contine 2 situsuri, unul cu o

inalta afinitate si celalalt cu o afinitate scazuta.

La o concentratie normala de albumina [4 g/dl],
la cele 2 situsuri se leaga ~ 70 mg bilirubina/dl
Uridin difosfoglucuronil
transferaza plasma.
-ajunsa in hepatocit bilirubina este legata la
unele proteine citosolice, dintre care cea mai
bine caracterizata este ligandina, o proteina
mica, bazica, cu structura heterodimera 
(M 22 KD; M 27 KD). Stoichiometria legarii
este 1 mol bilirubina/1 mol ligandina.
Conjugarea B – conduce la compusi solubili in apa - faciliteaza excretia
Glucuronidare cu UDP- glucuronat in 2 trepte formandu-se B-monoglucuronid si B-
diglucuronid
Produsul major B diglucuronid este excretat in bila
El este supus unor transformari ulterioare de flora intestinala

1/8/2020 20
Bilirubin diglucuronidul este: mai solubil in apa decit bilirubina libera, deci
conjugarea faciliteaza excretia bilirubinei in bila slab absorbit de mucoasa
intestinala.
In ileumul terminal si in intestinul gros - resturile glucuronid sunt indepartate de
catre hidrolaze bacteriene; bilirubina libera este redusa la tetrapiroli lineari, fara
culoare, numiti urobilinogene.

1/8/2020 21
Urobilinogenul este oxidat la produsi colorati numiti urobiline, care sunt excretate in
materiile fecale.

urobilinogen

1/8/2020 22
In determinarile clinice,
bilirubina conjugata  bilirubina directa [deoarece poate fi usor cuplata cu saruri de
diazoniu cu formarea de coloranti azoici - reactia van den BERGH directa].
bilirubina neconjugata  bilirubina indirecta este legata necovalent la albumina
serica si nu va da reactia van den BERGH decât dupa indepartarea albuminei prin
precipitare cu etanol

Bilirubina neconjugata - are o mare afinitate pentru lipidele membranare ceea ce

impiedica functia membranei celulare, in special la nivelul sistemului nervos
central.
Bilirubina conjugata este relativ solubila in apa si prin rinichi trece in urina pe care o
coloreaza in galben-brun.
Depozitarea bilirubinei conjugate si neconjugate in piele si sclerotica conduce la
colorarea pacientilor cu icter de la galben la galben-verde.

Hiperbilirubinemia:
- productie crescuta de bilirubina
- preluare scazuta de hepatocite;
- conjugare impiedicata
- interferenta in secretia bilirubinei conjugate

1/8/2020 23
 Stare normala

Icter hemolitic
productie crescuta de bilirubina
Mai multa bilirubina este conjugata si
excretata decat este normal;
Mecanismul conjugarii este
exacerbat
In sange se gasesc si cantitati mari
de B conjugata

1/8/2020 24
 Hemoliza
Eritrocitele raman in fluxul sangvin timp de 120 zile dupa ce sunt eliberate
din maduva osoasa sub forma de reticulocite.
Cand eritrocitele devin senescente ele sunt indepartate din sangele periferic
de catre macrofagele din splina si ficat. In urma fagocitarii eritrocitelor, catenele
globinei sunt scindate hidrolitic, aminoacizii reciclati, Fe este indeparat din hem
si reutilizat. Hemul este degradat la bilirubina.

Hemoliza poate fi intra-vasculara si extra-vasculara.

1/8/2020 25
 Hemoliza intra-vasculara si salvarea Fe
In hemoliza intra-vasculara are loc liza eritrocitelor in circulatie soldata cu
eliberarea Hb si hemului in plasma. Daca Hb si hemul liber sunt excretate pe cale
renala, pot avea loc pierderi substantiale de Fe. Exista mecanisme scavenger
pentru Fe liber ce permit reutilizarea lui
Cauze: traume mecanice, fixarea complementului, lezarea toxica a eritrocitelor.
OxiHb din plasma disociaza in dimeri , care sunt legati cu mare afinitate de o
familie de proteine plasmatice numite haptoglobine (Hp). Stoichiometria legarii:
2 dimeri  (oxiHb) per molecula de Hp
DeoxiHb nu disociaza in dimeri in conditii fiziologice si nu este legata de Hp.

Complexul Hb-Hp este indepartat din plasma de celulele reticulo-endoteliale

hepatice
Deoarece viteza legarii Hb () la Hp in urma hemolizei intravasculare >>>
viteza sintezei Hp, nivelul Hp scade.
Cand Hp este saturata, excesul de Hb este filtrat de rinichi si reabsorbit in tubulii
proximali unde Fe este recuperat si transformat in feritina sau homosiderina.
Hemosiderina – acumulari de oxizi ai Fe (depozite anormale) in diferite organe
dupa hemoliza
.
1/8/2020 26
 Parametrii care pot diferentia hemoliza intra- si extra-vasculara

Parametru/ Hemoliza intra-vasculara extra-vasculara

Frotiu periferic schistocite sferocite
Haptoglobina absenta/scazuta scadere moderata

Hemosiderina urinara ++ absenta

Hemoglobina urinara ++ absenta

Direct DAT Negativ, uzual ++++

LDH crescuta crescuta

Determinarea Hp serice este utilizata clinic ca un indice al hemolizei intravasculare.

In cursul hemolizei intra-vasculare poate apare Hb libera in tubulii renali si urina
(hemoglobinurie) cand capacitatea Hp din circulatie este depasita
Hemosiderina in urina este alt indicator ca Hb libere in spatiul intravascular
La pacientii cu hemoliza intravasculara nivelul LDH este crescut.
DAT – direct antiglobulin test
1/8/2020 27
 Haptoglobinele (Hp)

-2 globuline, sintetizate in ficat

- Are o structura 2β2 (catenele polipeptidice  - mai mici si  - mai mari).
-catenele  - glicopeptide de 39 KD - sunt invariabile ca structura
- 3 tipuri de catene  : 1S si 1F (difera printr-un singur aminoacid), 2
1S - 84 resturi de am. Acizi, MM ~ 9 KD - in pozitia 54  Glu
1F - 84 resturi de am. Acizi, MM ~ 9 KD - in pozitia 54  Lys
2 – 143 resturi – rezultatul unei fuziuni incomplete a genelor pentru 1F si 1S.
-catene legate prin punti disulfurice, intre catenele  si  si intre cele doua catene .
- structuri moleculare 1F1S2 sau 1F22.
- aceste variatii sunt utilizate in analizele genetice ale populatiei
-catena 2 are mai multe resturi de cistina decit catenele 1, haptoglobinele cu
formula 222 pot polimeriza in agregate mai largi prin punti disulfurice

Dimerul  atasat la Hp este susceptibil la hem oxigenaza, hemul din Hb libera este
rezistent.
Activ. Hem oxigenazei este mai puternica cand Hp are structura 222. Proportia
mare de Hp 222 la populatii din SE Asiei este corelata cu incidenta crescuta de
anemii hemolitice si poate reprezenta adaptari genetice selective.

1/8/2020 28
 Transformarile hemului liber

Hemul liber si hematina apar in plasma, legate de o -globulina, hemopexina care

are o masa moleculara de 57 KD.

Un rest de hem leaga o molecula de hemopexina.

Hemopexina transporta hemul la ficat, unde mai departe actioneaza hem

oxigenaza.

In stare normala hemopexina contine foarte putin hem legat

In hemoliza intravasculara, hemopexina este aproape complet saturata cu hem,

fiind indepartata cu un timp de injumatatire de ~7 ore.

Hemopexina de asemenea leaga protoporfirina IX.

1/8/2020 29