Curs 1:

Proteine plasmatice

2013-2014

Cuprins:
Structura, funcia, sinteza i metabolismul proteinelor plasmatice.
Modificri cantitative ale proteinelor plasmatice: hipo i hiperproteinemii.
3. Separarea electroforetic a proteinelor serice.
4. Disproteinemia din reacia de faz acut.
5. Disproteinemia din inflamaia cronic.
6. Disproteinemia din sindromul nefrotic.
7. Disproteinemia din enteropatia exudativ.
8. Disproteinemia din gamopatia monoclonal.
9. Disproteinemia in hipoproteinemii hipo gama globulinemia.
10. Deficiena unor proteine specifice: alfa1 antitripsina, antitrombina III
11. Markeri tumorali. Definiie, exemple.
1.
2.

04/09/15

1.1. Structura proteinelor plasmatice

Structural proteinele sunt formate din aminoacizi legai ntre ei prin legtura
peptidic:

04/09/15

Se disting patru nivele de organizare structural:

structura primar (= succesiunea liniar

de aminoacizi n lanul polipeptidic)
prezint un capt N i C terminal.
structura secundar (alfa-helix, foaie
pliat beta) - conformaie stabilizat prin
legturi de hidrogen.
structura teriar (forma general a unei
molecule polipeptidice); domeniu
(poriune din molecul cu structur bine
definit i conservat pentru ndeplinirea
unui rol specific (ex: enzime).

04/09/15

structura cuaternar (structura final a

unei proteine care poate fi format din una
sau mai multe subuniti.
4

1.2. Rolul proteinelor plasmatice

Comun

Surs de aminoacizi
Meninerea presiunii
coloidosmotice
Sistem tampon echilibru
acido-bazic

Specific

04/09/15

Transport apoproteine (lipide),

albumina (bilirubin), calbindina
(calciu), hepcidina, feritina (fier),
ceruloplasmina (Cu)
Activitate enzimatic (FA, AST)
Imunitate (imunglobuline)
Hemostaza (factori de coagulare)

1.3. Sinteza proteinelor la nivel celular

04/09/15

Loc de producere a proteinelor

Ficat
Plasmocite Ig
Endotelii factori ai coagulrii i fibrinolizei
Macrofage componente ale sistemului complement

04/09/15

1.3. Localizarea proteinelor

Dup sinteza intracelular proteinele sunt excretate n spa iul

extracelular, n torentul circulator, unde pot fi degradate de

proteaze.
Timp de njumtire (T1/2)= timpul n care o protein nou
sintetizat ajunge la 50% din concentraia ei iniial. T1/2 este
important n monitorizarea tratamentului (ex: coagulare)
Proteinele plasmatice (ex. albumina) pot migra dintr-un
compartiment n altul (intravascular extravascular); ex: edeme,
lichid ascitic.
Concentraia proteinelor totale serice (6-8 g/dl) refelect
distribuia ntre compartimentul intravascular i extravascular,
dar i echilibrul ntre biosintez i degradare a proteinelor.

04/09/15

1.4. Metabolismul proteinelor

Prin catabolismul proteinelor

rezult peptide i aminoacizi ce

sunt utilizai pentru sinteza de
noi proteine.
Cele mai multe microorganisme
i plante pot sintetiza cei 20
aminoacizi standard.
Animalele (omul inclusiv) au
nevoie de unii aminoacizi care
nu pot fi sintetizai, ci sunt
obinui din diet.
Aminoacizii pe care un
organism nu i poate sintetiza
singur, se numesc aminoacizi
eseniali.
04/09/15

1.4. Metabolismul proteinelor

Catabolismul proteinelor:

Denaturare (acid)

Hidroliz (proteaze)

Unii aminoacizi de origine exogen sunt folosii pentru biosintez, alii sunt
transformai n glucoz prin gluconeogenez, sau intr n ciclul acizilor
tricarboxilici (ciclul Krebs).
n lipsa hranei proteinele pot fi utilizate ca i substrat energetic pentru
susinerea vieii, n mod particular cele din muchi. 1g proteine = 4 kcal.
04/09/15

10

04/09/15

11

2. Modificri cantitative ale proteinelor plasmatice.

Hipo- i hiper-proteinemiile.

Hipoproteinemia este asociat de cele mai multe ori cu hipoalbuminemia.

Hiperproteinemia este asociat frecvent cu hiperglobulinemia.
Raportul ntre albumine i globuline este supraunitar n mod normal.
Modificarea raportului ntre albumine i globuline se numete disproteinemie.
n trecut erau utilizate teste biochimice care indicau care fraciune (albumine, beta

sau gama globuline) este modificat: testul Timol, testul Kunkel, testul cu ZnSO4)
aceste teste sunt orientative.

Separarea electroforetic a proteinelor serice indic un sindrom, nu indic

etiologia.

04/09/15

12

Hipo- i hiper-proteinemiile
Valori de referin: PT= 6-8 g/dl
HIPOPROTEINEMII
Aparente: hemodiluie,
Reale:

Deficit de aport: malnutriie, malabsorb ie

Pierderi: sindrom nefrotic, arsuri extinse, enteropatie, hemoragii.
Deficit de sintez: insuficien hepatic

HIPERPROTEINEMII
Aparente: hemoconcentraie, artefacte (staza venoas).
Reale:

04/09/15

Hiperimunglobulinemie: mielom multiplu, boala Waldenstrom

Inflamaii cronice

13

PROTEINE TOTALE SERICE. PROTEINOGRAMA

PRINCIPALELE PROTEINE PLASMATICE

Peste 100 proteine au fost izolate, purificate i caracterizate din plasm.

Separarea proteinelor serice n funcie de ncrcarea lor electric i de mrimea particulei, pe un suport solid sau semisolid, ntr-un cmp electric =

proteinogram.

04/09/15

Fraciunea

g/ 100 ml

Albumina
1 globuline
2 globuline
globuline
globuline

52 60
35
8 10
12 14
16 - 20

3,5 5,5
0,25 0,35
0,5 0,75
0,8 1,05 14
1,1 1,5

Separarea electroforetic a proteinelor serice

04/09/15

15

Beta (beta 1,2) i gama globulinele

04/09/15

16

Disproteinemia
Modificare a raportului Albumine/ Globuline. Raportul poate fi modificat

chiar i la valori normale ale proteinemiei.

Clasificarea disproteinemiilor:

04/09/15

cu PT normale: 6 8 g/dl
Reacia de faz acut, inflamaia cronic
cu PT sczute: sub 6 g/dl
Nephrotic syndrome, liver cyrrhosis, exudative enteropathy
cu PT crescute: peste 8,5 g/dl
Mielom multiplu, boala Waldenstrm, boala lanurilor grele

17

4. Disproteinemia din reacia de faz acut

Reacia de faz acut = Reacia
organismului la orice agresiune
tisular (infecii, traumatisme, intervenii
chirurgicale, infarct, cancer, arsuri extinse).

04/09/15

18

Change in Plasma Concentration (%)

Change in Acute-Phase Reactants After a Moderate Inflammatory Stimulus

30,100

Serum amyloid A

30,000

C-reactive protein

700
600

Haptoglobin

500

Fibrinogen

400

C3
Albumin

300

Transferrin

200
100
0
0

7
14
Time After Inflammatory Stimulus (days)

Gabay C, Kushner I. N Engl J Med. 1999;340:448-454.

21

Proteine induse de citokine proinflamatorii

Ageni microbieni, toxine, proteine
proprii degradate atrag macrofagele
care produc citokine (IL1, IL6, TNF).
Citokinele induc sinteza proteic la
nivel hepatic, determinnd:
sinteza prioritar a proteinelor de
faz acut:
Proteina C reactiv
Haptoglobina
proteina serica A a
amiloidului
fibrinogenul
sintez diminuat a altor proteine:

albumina, CE
04/09/15

20

Proteina C reactiv (PCR)

Sintetizat de ficat ca rspuns la

factorii secretai de macrofage i
adipocite.
CRP se leag de fosfocolina
exprimat la suprafaa celulelor
apoptotice/bacteriilor i activeaz
sistemul complement.

04/09/15

21

PCR
marker de inflamaie pentru utrmrirea evoluiei bolii i a eficacitii

tratamentului.
Valaorea de referin e sub 10 mg/l.
Creteri:

10-40 mg/dl la gravide

40 200 mg/l: infecii bacteriene (i peste 200 mg/l), cancer
40-150 mg/dl: infecii virale

PCR reflect mai rapid i mai amplu (creteri pn la 3000 ori VN)

reacia de faz acut dect VSH. n primele 24 h, VSH poate fi normal

i PCR crescut, ns revine la normal mai rapid dect VSH ca rspuns
la tratament.
PCRhs (high sensitive CRP) indic n domeniul valorilor de referin
terenul inflamator al unui subiect, n vederea evalurii riscului
cardiovascular: 0-2 mg/l risc sczut, 2-4 mg/l risc mediu, 4-6 mg/l risc
crescut.
04/09/15

22

Fibrinogenul
Sintetizat de ficat. VN= 200-400 mg/dl
intervine n hemostaza primar agregarea plachetar
intervine n coagulare - formarea reelei de fibrin
Creteri: inflamaiile acute i cronice

04/09/15

23

5. Disproteinemia din inflamaia cronic

04/09/15

24

 proliferare de limfoplasmocite, sintez de Ig, creterea gamaglobulinelor

(cu aspect policlonal)

IgG LES, hepatit cronic activ
IgA TBC, sarcoidoz, boala Crohn, dermatomiozit, LES
IgM - ciroz biliar, LES
n puseele de activitate (faz acut) cresc i alfa 1 i alfa 2

04/09/15

25

6. Disproteinemia din hipoproteinemii

04/09/15

26

7. Disproteinemia din gamopatia monoclonal

04/09/15

27

04/09/15

28

Comparaie ntre gamopatia monoclonal i

policlonal

04/09/15

29

8. Disproteinemia din hipo gamaglobulinemie

Hipogamaglobulinemia este o afeciune cauzat de un deficit de limfocite B,

rezultnd un deficit de imunoglobuline.n snge.

Clasificare:

Tranzitorie la nou nscut Ig G sunt sczute pn la vrsta de 6 luni, IgA pn la 10 ani

Primar

Deficitul selectiv de Ig A este ntlnit la persoanele cu infecii respiratorii frecvente, diaree

cronic, parazitoze intestinale (lambliaza).
Agamaglobulinemia (Boala Bruton) este adesea caracterizat prin lipsa sintezei de
imunglobuline; iar fraciunea globulinelor scade sau lipsete. Este o afeciune genetic legat de
cromozomul X, copiii afectai fiind foarte
susceptibili la infecii.
Hiperimunglobulinemia E - Subiecii cu Ig E crescute pot prezenta un deficit al funciei
granulocitelor neutrofile, fiind predispui la infecii bacteriene, n special cu stafilococ.

Secundar
Maligniti limfatice: LLC, limfom, mielom multiplu, boala Waldenstrm.
Pierderi de proteine: enteropatii, dermatit exfoliativ
Terapie imunosupresiv: medicamente (steroizi, ciclofosfamid), radioterapie
04/09/15

.
30

Diagnostic de laborator n hipogamaglobiulinemie

Determinare de imunglobuline serice

Determinarea limfocitelor B
Absena anticorpilor specifici dup vaccinare copilului
Absena anticorpilor fa de antigenele de grup sangvin A i B.

04/09/15

31

10. Clasificarea proteinelor

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
04/09/15

inhibitori plasmatici ai proteazelor (A1AT, ATIII)

proteine de faz acut (CRP, amiloid A, fibrinogen,etc)
proteine de adeziune sau integrine (fibronectina, vitronectina)
proteine cu rol de transport (apoproteinele, feritina, transfrina,
ceruloplasmina, haptoglobina, mioglobina)
factori ai coagulrii
proteine oncofetale
proteine ale aprrii imune
hormoni
enzime
32

 11. Deficiena unor proteine specifice:

alfa1 antitripsina (A1AT)

Deficit genetic A1AT

Sintez diminuat/absent
Molecule sechestrate n ficat
Molecule instabile, degradate n
circulaie
Modificri dobndite
scderi consum
creteri n r. de faz acut
Consecine ale deficitului:
- Emfizem pulmonar panlobular,
BPOC
- inflamaie a ficatului, fibroz,
ciroz, insuficien hepatic
04/09/15

33

11. Deficiena unor proteine specifice:

antitrombina III (ATIII)
Deficiena AT III e o afeciune
ereditar, ce poate fi evideniat la
un pacient cu tromboze venoase
recurente i embolie pulmonar.
Este dobndit AD, rar AR.
n insuficiena renal, sindrom
nefrotic, AT III se pierde la nivel
renal, crescnd riscul de tromboz.

04/09/15

34

12. Markeri tumorali

Markerul ideal pentru diagnostic trebuie s aib dou caracterisici:
a. s fie eliberat n snge n concentraii detectabile i msurabile,
dup ce celula s-a transformat malign;
b. detecia lui s permit identificarea precis a esutului de la care provine.

Specificitatea markerilor tumorali se refer la procentul de indivizi sntoi sau

indivizii cu afeciune benign n care testul d un rezultat negativ corect.
Sensibilitatea markerilor tumorali se refer la procentul rezultatelor pozitive
corecte n prezena unei tumori.

Din pcate markeri 100% specifici i 100% sensibili nu exist.

04/09/15

35

Markeri tumorali cu specificitate (primar) de organ

1. Cancer mamar: CA15.3, CEA, BR27.29,
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

EGF receptor, Catepsina D.

Cancer ovarian: CA125, AFP
Cancer col uterin: SCCA, CEA, bHCG,
citokeratine (CYFRA 21.1, TPA)
Cancer prostat: PSA, free PSA
Cancer tiroidian: calcitonina
Cancer tract gastro-intestinal: CEA, CA 19.9
Cancer pulmonar: Enolaza neuron specific
(NSA), ProGRP, CYFRA 21.1
Cancer hepatic: AFP
Leucemii : feritina

04/09/15

36

Markeri biochimici de malignitate

1. Hipercalcemia n tumori metastatice osoase asociate cu osteoliz.

2 Creteri ale fosfatazei alcaline pot apare n tumori ale osului; cancer hepatic staz
hepatic; carcinom paratiroidian;
3. Creteri ale fosfatazei acide n: cancer de prostat
4. Creteri ale lactat dehidrogenazei (LDH): tumori cu celule germinale (testicol, ovar),
afeciuni hematologice, hepatice, limfoame, melanom malign, neuroblastom.
5. Enolaza neuron specific TU ale sistemului nervos central, neuroblastoame i tumori ale
celulelor neuroendocrine (APUD). Acest marker este util n monitorizarea tratamentului n
cancer pulmonar i n neuroblastom.
6. Galactozil Transferaza II este o izoenzim a galactozil tansferazei care crete n tumori
predominant gastrointestinale. n cancerul de colon se coreleaz cu progresia bolii. n
cancerul pancreatic este un marker mai sensibil i mai specific n diferenierea unei tumori
benigne de cea malign, dect CEA sau ali markeri.
7. Producerea de paraproteine - Imunglobuline (Ig) i fragmente ale lanurilor uoare ale
imunglobulinelor. n mielom multiplu n ser pot fi crescute att lanurile uoare ale Ig ct i
proteina M.
8. Hipersecreia de hormoni poate s apar n absena mecanismelor de reglare, de exemplu
n cancer bronic pot apare hormoni produi de esutul tumoral, ectopic ce produce ADH,
ACTH, PTH.
04/09/15

37