Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Pt ex morfologice curente ale sangelui periferic se foloseste de obicei sange venos si mai rar
sange capilar .Este recomandabil ca recoltarea sa se faca in conditii de repaus ,pe nemancate.
Sangele venos ,recoltat prin punctie venoasa ,se amesteca cu un anticoagulant ,care trebuie sa fie
uscat ,pt a nu schimba proportia dintre elementele figurate si plasma .Anticoagulantul folosit pt
ex morfologice este Na2EDTA (sare disodica a acidului etilendiaminotetraacetic)in proportie de
1 mg /1 ml sange
Materiale:
-lanteta sau ac de unica folosinta
-Vata, tifon sau hartie de filtru; alcool
Tehnica:
-locul de punctie: pulpa degetului inelar sau mijlociu (la adulti), supraf plantara a calcaiului sau
a halucelui (la sugari)
-Supraf intepata trebuie sa fie calda si bine vascularizata; daca e rece sau cianozata iar sangele
apare lent, se obtin valori crescute pt Hg, nr de L si de Er
-Se dezinfecteaza pielea, apoi se inteapa ferm si rapid, suficient de adanc pt ca sangele sa
tasneasca de la sine.
-Primele picaturi se sterg cu un tifon uscat sau o hartie de filtru, iar urmatoarele se recolteaza
evitand stoarcerea degetului.
-Picaturile de sange pot fi folosite pt obtinerea de frotiuri prin depunerea lor pe lame de sticla.
Observatii:
1. in sangele capilar, Hg, Ht si nr Er sunt mai scazute decat in sangele venos;
2. nr de Tr se apreciaza mai exact prin examinarea unui frotiu de sange capilar (unde nu s-a
folosit anticoagulant la recoltare; in sangele venos pastrat pe anticoagulant acesta poate produce
gruparea Tr sau fenomenul de satelitism, ceea ce va duce la valori fals scazute ale Tr);
3. anticoagulantul poate produce alterari ale morfologiei celulei sanguine.
Observatii:
- un frotiu bine executat trebuie sa indeplineasca urm conditii:
Lungime = 3-4 cm
Sa fie mai ingust decat lama
Sa aiba 2 margini drepte, paralele, si franjuri in partea terminala
Sa aiba o grosime potrivita, cu o trecere gradata de la gros la subtire
Celulele sa fie raspindite uniform, sa nu fie distruse sau deformate
Coloratiile uzuale
Colorarea frotiurilor trebuie facuta imediat sau in cel mult cateva ore dupa
executarea lor.
Exista: coloranti acizi (eozina)
coloranti bazici (albastru/violet/azur de metilen)
coloranti neutri (eozinat de albastru/azur de metilen)
Cea mai frecvent utilizata coloratie este cea panoptica.
1.Coloratia panoptica May-Grunwald-Giemsa
-Solutie May-Grunwald:
eozinat de albastru de metilen 1 g
Glicerina neutra 50 ml
Alcool metilic 100 ml
-Solutie Giemsa:
eozinat de azur de metilen 3 g
Azur de metilen 0,8 g
Glicerina neutra 250 ml
Alcool metilic 200 ml
Mai sunt necesare: apa distilata neutra, pipete Pasteur, pipete gradate
Obs: pH-ul apei distilate trebuie sa fie 7-7,2. Apa distilata fiind de obicei acida, se neutralizeaza
prin adaugarea catorva picaturi de solutie slab alcalina de carbonat de sodiu 1% la 500 ml de apa
distilata, incercandu-se pH-ul cu indicator universal de hartie.
Tehnica:
A)Fixarea: se acopera frotiul cu solutia May-Grunwald si se lasa 2-3 min.
B)Colorarea: se adauga peste solutia May-Grunwald apa tamponata, si se lasa astfel 2 min.
Se varsa solutia de pe lama si se acopera lama cu solutie Giemsa diluata (o picatura sol Giemsa
pt 1 ml apa tamponata), apoi repaus 20 min
Se spala lama la robinet
Se sterge dosul lamei si se lasa lama in stativ pt uscare
Obs: un frotiu bine colorat prezinta microscopic:
-Zonele dintre celule: clare
-Er: portocaliu-rosu
-Granulatiile neutrofile: purpuriu
-Granulatiile eozinofile: rosu-portocaliu
-Granulatiile bazofile: albastru-inchis, negru
-Citoplasma limfocitelor (Lf): albastru palid
-Nucleul leucocitelor (L): albastru-violaceu
2.Coloratia Giemsa
Pt colorarea picaturii groase si evidentierea parazitilor malariei si a spirochetei
Obermeier (Borrelia recurrentis).
3.Coloratii vitale
Sangele se pune in contact direct cu colorantul fara o fixare prealabila, de ex. coloratia
reticulocitelor.
Cum se simte?
Pacientul poate simti o intepatura si arsura in momentul in care anestezicul amorteste pielea unde
va fi punctul de aspiratie sau biopsie. De asemenea, in momentul patrunderii acului in os,
pacientul poate simti durere sau presiune in acel loc. Durerea dureaza cateva secunde. In timpul
aspiratiei pacientul poate simti o durere ascutita de-a lungul piciorului in momentul recoltarii
probei. Durerea se opreste in momentul in care proba este recoltata.
Zona unde a fost efectuata biopsia va fi sensibila, va dura, si va prezenta o vanataie.
Riscuri
Efectuarea acestor doua teste nu presupune riscuri majore insa pot aparea unele probleme cum ar
fi:
- sangerarea la locul unde a fost efectuata biopsia;
- infectia pielei sau a osului la locul biopsie;
- ranirea inimii, plamanului sau unei artere daca esantionul este prelevat din stern (foarte rar).
Rezultate
Rezultate normale:
- maduva contine cantitati normale de grasimi, tesut conjunctiv si fier. Numarul de celule mature
si in crestere este normal.
- nu sunt semne ale unei infectii;
- nu se despisteaza celule canceroase (leucemie, limfom);
- celelule canceroase nu s-au raspandit in organism.
Rezultate anormale:
- celulele maduvei sunt anormale;
- sunt prea multe sau prea putine celule iar tesutul medular nu are aspect normal;
- maduva osoasa contine prea mult sau prea putin fier;
- se depisteaza semne ale infectiei;
- se depisteaza celule canceroase;
- maduva osoasa a fost inlocuita de tesut cicatrizant.
Ce poate afecta testul?
Conditiile pentru care nu se recomanda efectuarea testelor sau situatii in care rezultatele nu sunt
concludente cuprind:
- efectuarea unei transfuzii de sange sau administrarea de medicament cu un continut crescut de
fier;
- tratament cu radiatii asupra zonei unde se efectueaza biopsia;
- obezitatea.
Alte informatii
Daca in locul unde s-a efectuat aspiratia sau biopsia maduva este normala, nu inseamna ca ea
este sanatoasa in toate partile corpului.
Celulele sanguine se formeaza in maduva osoasa. Maduva osoasa este o formatiune complexa,
de consistenta moale, spongioasa, localizata in centrul oaselor, care produce aproximativ 95%
dintre celulele sanguine ale organismului. Exista si alte organe si sisteme din corpul uman care
ajuta la echilibrarea productiei de celule sanguine. Printre acestea se enumera ganglionii
limfatici, splina, ficatul care au rol in crearea, distrugerea si diferentierea (participand la
dezvoltarea unor functii specifice) celulelor.
Procesul prin care se produc si se dezvolta noi celule poarta numele de hematopoieza. Celulele
de sange formate in maduva osoasa iau forma unei celule stem sau celule hematopoietice -
forma primara, initiala a tuturor celulelor sanguine. Pe masura ce se maturizeaza, celulele
stem evolueaza in mai multe tipuri distincte de celule sanguine, cum ar fi: ceulele rosii, celulele
albe si trombocitie. Celulele sanguine imature sunt denumite blasti. Unele celule de acest tip
raman in maduva osoasa pana se maturizeaza iar altele circula in alte parti ale corpului pentru a
se maturiza si sa functioneze ca celule sanguine.
Functia primara a celulelor rosii ale sangelui sau a eritrocitelor este de a transporta oxigen si
dioxid de carbon. Hemoglobina este o proteina importanta din componenta celulelor rosii
sanguine care transporta oxigenul de la plamani catre toate partile corpului uman. Principala
functie a celulelor sanguine albe sau a leucocitelor este sa lupte impotriva infectiilor. Exista mai
multe tipuri de celule albe sanguine si fiecare are propriul sau rol impotriva infectiilor bacteriene,
virale, fungice si parazitare.
Cele mai importante tiuri de celule albe sanguine care ajuta la protejarea de infectii si
impotriva celulelor straine includ:
- neutrofilele;
- eozinofilele;
- limfocitele;
- monocitele;
- granulocitele.
Celulele albe din sange au diverse roluri:
- nu contribuie doar la lupta impotriva infectiilor ci si ajuta la vindecarea ranilor prin ingerarea a
diverse materiale cum ar fi celule moarte, resturi de tesut si celule rosii sanguine imbatranite.
- protejeaza organismul uman de corpurile straine care pot patrunde in fluxul sanguin, cum ar fi
alergenii.
- sunt implicate in protectia organismului impotriva celulelor anormale, cum ar fi cele intalnite in
cazul cancerului.
Functia de baza a trombocitelor sau plachetelor sanguine este coagularea sangelui.
Trombocitele au dimensiuni mult mai mici decat celelalte celule ale sangelui. Acestea se aduna
la un loc, se grupeaza impreuna si formeaza o bariera sau un tampon in fisura vasului de sange
pentru a opri sangerarea acestuia.
are citoplasma slab acidofila (roz palid), cu granulatii neutrofile specifice, mici, punctiforme si
numeroase; nucleul este segmentat în 2-5 lobi legati între ei prin punti fine de cromatina. Are
urmatoarele roluri:
• rol în microfagocitoza ,functia principala în apararea organismului contra infectiilor
(reprezinta prima linie de aparare prin înglobarea si distrugerea de particule din mediul
extracelular)
• rol secretor pentru: transcobalamina I (transporta vitamina B12), interleukine (IL1 tinduce
febra), prostaglandine, etc.
1.2. Granulocitul segmentat eozinofil-
are în citoplasma granule mari, egale, eozinofile (portocalii), iar nucleul sau prezinta 2
segmente. Are urmatoarele roluri:
• rol în fagocitoza - factorii care determina chemotaxia eozinofilului sunt: complexele
imune antigen-anticorp (detin rolul major în reactiile imune), fibrina, enzime proteolitice,
histamina. Eozinofilele pot fagocita si bacterii sau fungi, dar sunt mai putin atrase de
acestea decât neutrofilele.
• rol în apararea antiparazitara - chiar daca nu poate fagocita parazitii, eozinofilul se
ataseaza de acestia si elibereaza la exterior granulatii care contin o substanta cu o
puternica actiune citotoxica (PBM- proteina bazica majora).
• rol în bolile alergice
- contine granulatii caracteristice bazofile care ocupa toata citoplasma, uneori suprapunându-se
peste nucleu; nucleul este incomplet segmentat. Are urmatoarele roluri:
• rol în fagocitoza, dar la o scara mai redusa.
• rol în degranulare, cu eliberarea la exteriorul celulei a numerosi mediatori, fenomen cu
importanta în patogenia si diagnosticul unor afectiuni alergice, dar au si rol chemotactic
pentru neutrofile si eozinofile.
2. SERIA LIMFOCITARA. Dupa marime limfocitele pot fi: mici, medii si mari în functie de
gradul de maturare si reprezinta componenta celulara majora din tesuturile limfatice.
Forma limfocitelor este rotunda sau usor ovalara, cu diametrul de 6 - 12 µm. Nucleul este
mare si ocupa cea mai mare parte a celulei fiind intens colorat. Citoplasma este slab bazofila
(albastru deschis). Limfocitele au urmatoarele roluri:
• rol în raspunsul imun, declansat de patrunderea în organism a unor celule straine sau a
unor macromolecule proteice. Acest raspuns este caracterizat prin productia de anticorpi
de catre limfocitele B (imunitate umorala) si de produsi celulari citotoxici eliberati de
catre limfocitele T (imunitate celulara).
3. SERIA MONOCITARA. Monocitele sunt cele mai mari celule din seria leucocitara, cu un
diametru cuprins între 10 - 25 µm si sunt specializate în apararea organismului.
Nucleul este nesegmentat, reniform si nu prezinta nucleoli. Citoplasma este abundenta si intens
bazofila (albastru închis). Seria monocitara include:
• precursorii din maduva hematogena
• monocitele din sânge
• macrofagele din tesuturi
Monocitele îndeplinesc urmatoarele roluri:
• rol în macrofagocitoza particulelor coloidale, a celulelor degenerate
• rol în raspunsul imun ca si celule accesorii (prezentatoare de antigen)
Seria eritrocitara
Bolile sângelui
Bolile sângelui au de obicei o localizare principala pe elementele figurate ale seriei rosii, ale
celei albe sau ale celei trombocitare, dar ele nu se limiteaza la o serie, ci au ecou si în celelalte
serii, în afara de bolile celulelor sângelui se mai pot întâlni si boli ale proteinelor sangvine si în
special boli ale coagularii.
In raport cu cresterea sau scaderea numarului globulelor rosii, bolile care afecteaza seria rosie se
împart în eritremii si anemii.
Eritremiile sînt boli grave ale celulei rosii, în cadrul lor s-au descris: policitemia, eritroblastozele
cronice si eritroblastozele acute.
o Policitemia sau poliglobulia se caracterizeaza printr-un sânge vâscos cu peste 6 000 000
globule rosii pe mm3, dar care nu sînt încarcate suficient cu hemoglobina. Boala se asociaza cu
cresterea volumului ficatului si splinei, datorita faptului ca aceste organe devin la rândul lor
producatoare de hematii, alaturi de maduva oaselor. Boala dureaza în medie 10 ani si este grava
daca nu se aplica tratamentul.
o Eritroblastozele sînt, de asemenea, boli de sânge grave, care se caracterizeaza prin aparitia în
sângele circulant a elementelor tinere nucleate ale seriei rosii. Boala este asemanatoare
cancerului seriei albe (leucemie). Forma cronica a eritroblastozei duce la anemie grava, mortala
(hematiile normale sînt înlocuite treptat cu celule tinere, care nu pot satisface nevoile respiratorii
ale organismului).
Bolile globulelor albe sînt starile morbide în care numarul sau calitatea leucocitelor difera de
normal.
o Leucopenia, care consta în scaderea leucocitelor sub cifra normala de 5 000-8 000 elemente pe
milimetru sub, apare ca un simptom în cursul bolilor date de virusuri, precum si în febra tifoida.
Cifrele înregistrate nu scad în aceste cazuri mult sub normal (2 000- 4000 pe mm3), în
intoxicatiile maduvei oaselor apare o forma foarte grava de leucopenie, denumita agranulocitoza.
Spre deosebire de leucopenie, în care numarul global de globule albe este scazut, în
agranulocitoza scaderea generala a leucocitelor este însotita de o scadere mare sau disparitia
selectiva a granulocitelor (polinucleare), fie din cauza neputintei maduvei de a le produce, fie
prin distrugerea lor masiva în circulatie. Apar ulceratii necrotice pe mucoase. Boala survine în
intoxicatia organismului cu substante chimice (benzen) sau medicamente (pyran, atofan, chinina,
fenacetina, penicilina, barbiturice, cloramfenicol), precum si în cazul administrarii unor doze
mari de raze Rontgen.
Tratamentul consta în primul rând în îndepartarea cauzelor toxice care au determinat aparitia
bolii. Lucratorii din industria chimica de sinteza, în care se utilizeaza substantele care dau
agranulocitoza, sînt obligati sa respecte în modul cel mai strict masurile de protectie. Bolnavii
care utilizeaza medicamente ce pot determina aparitia agranulocitozei au obligatia sa se
conformeze întocmai prescriptiei medicale.
o Limfocitoza se caracterizeaza printr-o crestere a proportiei de limfocite peste 25% (cât
reprezinta acestea fata de celelalte globule albe). Acest simptom hematologic este caracteristic
anumitor stari de aparare a organismului, limfocitul considerându-se astazi ca sediul de formare a
anticorpilor. în limfocitoza infectioasa, o viroza limfatica acuta caracterizata prin leucocitoza cu
limfocitoza, numarul de globule albe poate sa creasca la 40000 - 50 000 elemente pe mm3, din
care 50-80% sînt limfocite. Boala nu este grava, evoluând de cele mai multe ori benign.
o Mononudeoza infectioasa este de asemenea o boala a sistemului limfatic, data de un virus.
Clinic se caracterizeaza prin: amigdalita, febra, umflarea ganglionilor si a splinei, cresterea
importanta a leucocitelor, cu predominanta monocitelor. Boala nu este grava. Fiind o boala
infectioasa, poate fi prevenita prin masurile generale de profilaxie a contagiunii, în primul rând
prin evitarea contactului cu persoanele bolnave.
o Leucemia mieloidâ cronica se caracterizeaza prin cresterea masiva a leucocitelor (50000-
200000 pe mm3), predominând elementele granulocitare adulte si tinere. Pe masura ce procesul
canceros invadeaza întreaga maduva, sînt prinse si celelalte serii de celule: rosie si trombocitara.
Apare o anemie grava, însotita de hemoragii, prin scaderea numarului de trombocite. în formele
avansate se constata ca si alte organe hematopoietice, care în mod normal nu produc granulocite,
devin sedii suplimentare de productie a acestor elemente sanguine (splina). Tratamentul
leucemiei mieloide cronice ramâne înca bazat pe chimioterapie si medicatie simptomatica, având
scopul sa prelungeasca viata bolnavului.
o Leucemia limfatica cronica este localizata pe organele limfatice. Este o leucemie mai benigna
decît cea mieloida. Boala se manifesta asemanator cu leucemia mieloida, cu deosebirea ca
elementele care predomina în formula leucocitara sînt limfocitele.
o Leucemia acuta este cea mai grava forma a leucemiilor, putind evolua mortal în 2-3
saptamâni. în circulatia sangvina, globulele albe sînt înlocuite aproape în totalitate de un singur
tip de celule tinere, fara functiile pe care le au de obicei globulele albe. Datorita chimioterapiei
moderne, leucemia acuta are astazi o perioada de evolutie mai lunga ca în trecut, putându-se
transforma în forma cronica.
Hemograma este un test screening de baza, fiind unul din cele mai frecvent cerute teste de
laborator, reprezentand adesea primul pas in stabilirea statusului hematologic si diagnosticul
diverselor afectiuni hematologice si nehematologice. Cuantificarea parametrilor hematologici
asociata uneori cu examinarea frotiului de sange aduce informatii pretioase, orientand in
continuare spre efectuarea altor teste specifice.
Pregatire pacient
Hemograma se poate recolta à jeun (pe nemancate) sau postprandial (trebuie totusi evitate
mesele bogate in lipide care pot interfera cu anumiti parametri ai hemogramei).
Sexul, varsta pacientului, precum si anumite conditii cum ar fi: starea de soc, varsaturi
incoercibile, administrarea masiva de lichide i.v. etc., care pot duce la deshidratarea, respectiv
hiperhidratarea pacientului, precum si anumite tratamente urmate de pacient trebuie comunicate
laboratorului.
Este de preferat evitarea pe cat posibil a stresului in momentul recoltarii.
In cazul monitorizarii regulate (zilnic sau la doua zile) a anumitor parametri, proba de sange
pentru efectuarea hemogramei trebuie obtinuta in acelasi moment al zilei (datorita fluctuatiilor
fiziologice circadiene ale unor parametri)
Specimen recoltat, recipient si cantitate recoltata – sange venos recoltat pe anticoagulant:
EDTA tripotassium/dipotasium/disodium (vacutainer cu capac mov/roz – K3 EDTA); la copii
mici se poate recolta sange capilar din deget/calcai pe heparina (microtainer).
Se amesteca continutul prin inversiunea usoara a tubului de cca. 10 ori.
Cauze de respingere a probei
tub incorect;
specimen coagulat;
specimen hemolizat;
cantitate insuficienta.
Prelucrare necesara dupa recoltare – daca proba nu este trimisa imediat la laborator trebuie
refrigerata.
Stabilitate proba - 36-48 ore la temperatura camerei (18-26°C) sau la frigider (2–8°C) – pentru
determinarea hemoglobinei si numaratorile de celule. Este recomandat ca probele sa fie analizate
in primele 6 ore de la recoltare. Nu se recomanda depasirea acestui interval pentru determinarea
indicilor eritrocitari si hematocritului. Daca proba a fost refrigerata, trebuie echilibrata la
temperatura camerei inainte de a fi analizata.
Metoda de determinare – analizor automat pe principiul citometriei in flux cu fluorescenta
utilizand LASER semiconductor si focusare hidrodinamica.
Este formata dintr-un tub capilar ,care in portiunea superioara este dilatat ,formand o
ampula .Extremitattea lunga a pipetei serveste la aspirarea sangelui si a solutiei Hayem.Pe
aceasta portiune se afla gradate cifrele 0.5 si 1.Superior ampulei se gaseste cifra 101 mm3.In
ampula se afla o perla de sticla de culoare rosie care serveste la amestecarea si omogenizarea
sangelui cu solutia Hayem .La extremitatea scurta a pipetei se afla un tub de cauciuc prevazut cu
o piesa bucala .Pt efectuarea dilutiei de 1:200 se aspira sange pana la diviziunea 0.5 si se
completeaza cu solutie Hayem pana la diviziunea 101.Dilutia de 1:100 se obtine aspirand sange
pana la diviziunea 1.
Dupa intrebuintare pipeta Potain se spala cu apa distilata ,se clateste cu alcool 96grade ,cu eter,si
se usuca la pompa de vid .In caz de infundare a capilarului se actioneaza cu un mandren sau cu
un fir de par de cal ,dupa care se pune in HCL 15%.
Camera de numarat Burker este o lama groasa de sticla pe care la o adancime de 0.1 mm
sunt gravate doua retele cu o suprafata de 9 mm2 situate simetric fata de un sant transversal .Are
gravate urmatoarele date :inaltime de 0.10mm;suprafata patratului mic 1/400 mm2;suprafata
patratului mediu 1/25 mm2.Suprafat retelei (cadrilajului )este subimpartita prin linii triple in 9
patrate mari ,are la randul lor ,acestea se impart prin linii duble la 16 patrate medii .La
intretaierea liniilor duble se delimiteaza patrate mai mici .
Camera Burker-Turck reuneste elementele camerei Thoma –Burker.Numaratoarea eritrocitelor
se face in patratelele mici
Modul de lucru:
-Curatati varful degetului cu o bucata de vata imbibata in alcool (degetul trebuie sters viguros ,pt
ca astfel pe langa faptul ca se curata corespunzator tegumentul se va produce totodata si o
hiperemie –cresterea fluxului sanguin local –
-se lasa degetul sa se usuce
-Cu un ac steril se face rapid o sg punctie la varful degetului curatat ,suficient de adanca pt ca
sangele sa se scurga liber din locul de punctie .Se sterge prima picatura de sange cu un tifon
uscat ,iar cand apare a doua picatura ,se aspira in pipeta .Nu se va aspira pana cand la varful
degetului nu s-a acumulat suficient sange intrucat pipetele au un lumen foarte mic si sangele
coaguleaza extrem de usor in ele .
-degetul nu trebuie comprimat
-se recolteaza pana la diviziunea 0.5 a pipetei Potain pt hematii si se aspira solutie Hayem pana
la diviziunea 101.Aspirarea solutiei de dilutie trebuie facuta cat mai rapid pt a evita coagularea
sangelui si pt a mari acuratetea metodei.
-se prinde pipeta intre doua degete si se agita timp de 3 min pt a omogeniza continutul .
-primele 2 picaturi se indeparteaza deoarece contin numai solutie Hayem .Urmatoarea picatura se
aplica la marginea lamei cu care s-a acoperit camera de numarat.
-se examineaza la microscop
La microscop ,in conditiile amintite ,se numara hematiile din interiorul a 80 patrate mici din
reteaua Thoma.Nu se iau in calcul elementele situate pe doua linii de delimitare ale ariei de
numarat ,ci numai cele de pe doua alaturate..
Calculul:
Nr er numarate in 5 patrate intre liniile triple din mijlocul crucii x10000/mm3
Valori de referinta – valori diferite in functie de varsta si sex ; se exprima in numar de eritrocite
x106/μL (mm3)
Semnificatie clinica
Numarul de eritrocite ca singur parametru are valoare diagnostica mica; o evaluare corecta a
masei de eritrocite a organismului poate fi obtinuta doar in corelatie cu hematocritul. Numarul de
eritrocite este influentat de modificarile volumului plasmatic, ca de exemplu in sarcina sau in
tulburari ale echilibrului hidrotelectrolitic.
1. Scaderea numarului de eritrocite: determina anemie. Anemia este definita din punct de
vedere functional printrto masa eritrocitara insuficienta pentru asigurarea unei cantitati adecvate
de oxigen tesuturilor periferice.
2. Cresterea numarului de eritrocite (concentratiei de hemoglobina si/sau hematocritului)
determina eritrocitoza. Eritrocitoza poate fi rezultatul cresterii masei eritrocitare totale
(policitemie/eritrocitoza absoluta) ori poate fi consecinta reducerii volumului plasmatic
(eritrocitoza relativa/falsa).
Interferente
1. Recoltarea cu pacientul in pozitie culcata determina scaderea numarului de eritrocite (si
hematocritului) cu 5 – 10% (prin redistribuirea lichidului din spatiul interstitial spre circulatie
datorita modificarii presiunii hidrostatice la nivelul membrelor inferioare).
2. Stresul poate determina cresterea numarului de eritrocite.
3. Staza venoasa prelungita >2 minute in timpul venopunctiei determina cresterea numarului de
eritrocite cu ~10% (si cresterea semnificativa a hematocritului). De asemenea, recoltarea dupa
efort fizic intens determina cresterea numarului de eritrocite cu pana la 10% (ca si cresterea
concentratiei de hemoglobina). Toate acestea se datoreaza hemoconcentratiei.
4. Deshidratarea cu hemoconcentratie consecutiva (soc, arsuri severe, obstructie intestinala,
varsaturi/diaree persistente, abuz de diuretice) poate masca prezenta anemiei. De asemenea,
hiperhidratarea pacientului (administrarea masiva de lichide i.v.) poate determina niveluri fals
scazute ale numarului de eritrocite.
5. Prezenta aglutininelor la rece in titru mare determina, daca sangele este pastrat la temperatura
camerei, niveluri fals scazute ale numarului de eritrocite si un VEM fals crescut; in consecinta
hematocritul este fals scazut, iar HEM si CHEM sunt crescute.
6. Prezenta de crioglobuline in concentratie mare poate interfera cu determinarea numarului de
eritrocite.
7. Trombocitele mari/macrotrombocitele (ex.: din trombocitemia esentiala) pot fi numarate ca
eritrocite.
8. Numeroase medicamente pot determina cresterea sau scaderea numarului de eritrocite:
pot scadea numarul de eritrocite aproape toate clasele de medicamente;
pot determina cresteri ale numarului de eritrocite: corticotropina, glucocorticoizii, danazolul,
eritropoietina, antitiroidienele, hidroclorotiazida, pilocarpina, mycophenolatul.
Hematocritul masoara raportul dintre volumul ocupat de eritrocite si volumul sanguin total.
Procedeul consta in recoltarea sangelui dintr-o vena, apoi sangele se combina cu o substanta
antiocoagulanta si se repartizeaza intr-un tub de sticla foarte ingust, care se centrifugheaza
puternic intr-o centrifuga. In urma acestei operatii se observa separarea sangelui in stratul
superior ( plasma ) si stratul inferior ( format din globule rosii ) care constituie hematocritul.
HEMOGLOBINA
Indicatii -impreuna cu Hct si numarul de eritrocite, este utila pentru detectarea si monitorizarea
anemiei si policitemiei.
Metoda de determinare – Hb este determinata automat prin metoda fotometrica in urma
conversiei in SLS-Hb cu ajutorul unui surfactant Sodium Lauryl Sulfate.
INDICII ERITROCITARI
Evaluarea eritrocitelor din punct de vedere al volumului si continutului in hemoglobina se
realizeaza prin masurarea sau calcularea urmatorilor parametri:
RETICULOCITELE
Reticulocitele sunt eritrocite anucleate tinere, imature, care contin acizi nucleici reziduali (ARN).
Dupa expulzarea nucleului eritrocitele raman in maduva pana la 4 zile, timp in care are loc o
scadere continua a numarului de poliribozomi (care contin ARN) si a sintezei de hemoglobina.
Aceste eritrocite tinere se maturizeaza complet in circulatia periferica in cca. 1-2 zile dupa ce
parasesc maduva osoasa, timp in care pierd complet capacitatea de sinteza proteica (respectiv
poliribozomii care contin ARN), iar sinteza de Hb inceteaza. Materialul reticular se coloreaza cu
coloranti supravitali ca albastru cresil briliant/albastru de metilen. In mod normal, in absenta
anemiei, un numar mic de reticulocite este prezent in circulatie (in fiecare zi ~1% din eritrocite
sunt inlocuite cu eritrocite tinere eliberate din maduva). Determinarea numarului de reticulocite
ofera informatii despre capacitatea medulara de a sintetiza celule rosii ca raspuns la o
suprasolicitare fiziologica, cum este anemia.
Indicatii:
1. Diferentierea tipurilor de anemii in: neregenerative si regenerative/hipertregenerative.
2. Monitorizarea raspunsului la tratamentul de sustitutie cu fier, acid folic / vitamina B12.
3. Evaluarea eritropoiezei dupa transplant medular, in anemia aplastica indusa de medicamente
citotoxice/sau in tratamentul cu eritropoietina.
Metoda de determinare
1. Metoda manuala – numarare microscopica.
executarea pe lama a unui frotiu
colorarea acestuia cu brillant cresyl-blau-coloratie supravitala
.examenul la microscopul optic al aspectului morfologic al reticulocitului :aspectul de
eritroblast( element din linia eritropoetica ) oxifil care pastreaza dupa ce trece in circulatie (este
produs de catre maduva rosie osoasa), circa 1-2 zile , parti de complexe ribonucleoproteice. El
are o nuanta albastruie
numaratoarea reticulocitelor de pe mai multe campuri microscopice, ca si a numarului de
eritrocite dupa aceste campuri.
.calculul proportiei numarului de reticulocite la 100 sau la 1000 de eritrocite.
2. Numararea automata – analizor automat pe principiul citometriei in flux cu fluorescenta si
LASER semiconductor.
Valori de referinta
Adult: 0.5-2% din nr. total de Er.
Nou-nascut: 2.5-6.5% din nr. total de Er (scade la nivelul de la adult din a doua saptamana de
viata).
Nr. absolut = 30-120 x 103/μL sau x 109/L.
Semnificatie clinica -determinarea nr. relativ sau absolut de Rt reprezinta un indicator important
al activitatii eritropoietice medulare, furnizand o apreciere initiala daca anemia se datoreaza
alterarii productiei eritrocitare sau pierderii de eritrocite in circulatie (prin sangerare sau
hemoliza)
1. Numar crescut de reticulocite (reticulocitoza): este indicator de eritropoieza regenerativa
(cresterea productiei eritrocitare medulare sub actiunea eritropoietinei;
2. Numar scazut de reticulocite (reticulocitopenia): apare in anemii nontregenerative, cum ar fi
deficitul de fier/folat/vitamina B12, aplazia medulara (deficitul persistent de Rt sugereaza un
prognostic prost), anemia din bolile cronice, insuficienta medulara (anemia mieloftizica).
Referitor la clasificarea anemiilor, in tabelul de mai jos sunt prezentate modificarile numarului
absolut de reticulocite si al FRI in diverse tipuri de anemie:
Conditii clinice Numar reticulocite Fractia reticulocitelor imature
Aplazie medulara, criza ↓ ↓
aplastica in anemii hemolitice
Anemii hipoplazice ↓ ↓
Regenerare medulara ↓ ↑ sau N
Boli cronice ↓ sau N ↓
Deficit de fier ↓ sau N ↑
Deficit de folat sau vit. B12 ↓ sau N ↑
Talasemii N sau ↑ N sau ↑
Mielodisplazii Variabil N sau ↑
Anemii hemolitice ↑ ↑
Hemoragie sau anoxie N sau ↑ ↑
Formula leucocitara consta in diferentierea numarului total de leucocite circulante in cele cinci
tipuri de leucocite, exprimate procentual si respectiv in numar absolut, fiecare dintre acestea
indeplinind o functie specifica. Actualmente este de preferat raportarea fiecarui tip de leucocite
in valori absolute. Formula leucocitara este efectuata automat de catre analizor. Exista anumite
situatii insa in care este necesara efectuarea manuala a formulei leucocitare: numar de leucocite
prea mic/prea mare, prezenta de celule anormale semnalizata de analizor prin anumite mesaje de
avertizare/chiar esecul analizorului de a indica formula leucocitara. In aceste cazuri se efectueaza
numaratoarea microscopica: frotiu de sange venos (recoltat pe EDTA; heparina poate produce
deformari ale leucocitelor) sau frotiu de sange capilar.
Limfocitele – reprezinta o populatie celulara heterogena care difera in functie de origine, durata
de viata, localizare la nivelul organelor limfoide si functie. Desi unele caracteristici morfologice
ca: marimea, granularitatea, raportul nucleo-citoplasmatic diferentiaza populatiile limfocitare una
de cealalta, ele nu ofera indicii privind tipul si functia lor. Majoritatea limfocitelor din sange sunt
mici, desi sunt comune si forme mai mari, cum ar fi limfocitele mari granulare care contin
granulatii azurofile in citoplasma.
65-80% din limfocite sunt celule T, 8-15% sunt celule B, iar ~10% sunt celule natural killer
(NK) (celulele NK sunt morfologic distincte, unele dintre acestea fiind identice cu limfocitele
mari granulare). Numai 2% din limfocite sunt prezente in sange.
Valori de referinta
– adult: 1000=4000/µL sau 1-4×109/L; 20-55% din leucocite;
- la copii valori mai mari in functie de varsta
Semnificatie clinica
1. Limfocitoza: >4000/µL:
A. Cauze benigne:
Infectii virale:
Limfocitoza infectioasa (apare in special la copii).
Mononucleoza infectioasa: produsa de virusul EpsteintBarr, afecteaza in special adolescentii si
adultii tineri, produce un tablou hematologic caracteristic cu limfotmonocitoza si prezenta pe
frotiul de sange de limfocite atipice, activate (celulele Downey).
Alte infecti virale: infectii virale ale tractului respirator superior, infectii cu citomegalovirus,
rujeola, oreion, varicela, hepatita acuta virala, infectie acuta cu HIV.
Alte infectii: infectii cronice (tuberculoza, sifilis), tuse convulsiva, toxoplasmoza, febra tifoida,
bruceloza.
Numarul de limfocite poate depasi 15000/µL in limfocitoza infectioasa, mononucleoza
infectioasa, tusea convulsiva.
Sindromul de splenomegalie hiperreactiva din malarie.
B. Cauze maligne:
Cu celula B: leucemia limfocitara cronica, leucemia prolimfocitara cu celula B, leucemia cu
celule paroase, faza leucemica din limfoamele nonhodgkin, macroglobulinemia Waldenström.
Cu celula T: leucemia prolimfocitara cu celula T, leucemia/limfomul cu celula T al adultului,
sindromul Sézary, leucemia cu limfocite mari granulare.
2. Limfopenie: <1000/µL:
Imunodeficiente congenitale: sindroame de imunodeficienta combinata.
Infectia HIV (scaderea selectiva a celulelor CD4+).
Chimioterapia (in special analogii nucleozidici: fludarabina, cladribina – produc scaderea
marcata a celulelor CD4+, care poate persista ani de zile), radioterapia, medicatia
imunosupresoare.
Lupus eritematos sistemic (sunt prezenti anticorpi antitlimfocitari care produc liza complement
mediata a limfocitelor); boala mixta de tesut conjuctiv; dermatomiozita.
Tuberculoza avansata (miliara): scaderea marcata a celulelor CD4+.
Virusul gripal (limfopenia apare tipic dupa rezolvarea infectiei).
Boala Hodgkin si alte malignitati.
Anemia aplastica.
Administrarea de ACTH/corticosteroizi; tumori hipofizare secretoare de ACTH; boala Cushing.
Pierderi crescute la nivelul tractului intestinal prin obstructia drenajului limfatic: tumori, boala
Whipple, limfangiectazie intestinala; boli inflamatorii intestinale.
Uremia.
.
Valori critice – numar de limfocite <500/µL creste riscul de infectii, in special virale.
Monocitele – sunt cele mai mari celule din sange; fac parte din sistemul fagocitic
mononuclear/reticuloendotelial compus din monocite, macrofage si precursorii lor medulari.
Monocitele sunt eliberate in sange si, dupa un scurt timp in circulatie, migreaza in diferite
tesuturi, intamplator sau specific, ca raspuns la diferiti factori chemotactici. In tesuturi, ca
raspuns la diferiti stimuli solubili, ele se diferentiaza in macrofage tisulare, cu calitati
morfologice si functionale caracteristice, proces care a fost denumit activare si care este
reversibil (“dezactivare”).
Valori de referinta – 0-1000/µL sau 0-1×109/L; 0-15% din leucocite.
Semnificatie clinica
1. Monocitoza: >1000/µL:
Cele mai frecvente cauze sunt infectiile bacteriene, tuberculoza, endocardita bacteriana subacuta,
sifilisul, bruceloza.
Leucemia mielomonocitara cronica, leucemia monoblastica acuta, boli mieloproliferative
cronice.
Carcinoame: stomac, san, ovar.
Boala Hodgkin, limfoame.
Recuperarea dupa neutropenie, chimioterapie, transplant medular (semn favorabil).
Boli parazitare (malarie, Kalatazar, tripanosomiaza), rickettsioze, infectii micotice.
Boli gastrointestinale: colita ulcerativa, enterita regionala, sprue, ciroza hepatica.
Boli de colagen, sarcoidoza.Postchirurgical, postsplenectomie.Reactii medicamentoase.
Intoxicatie cu tetracloretan.Tratament cu factori de crestere granulotmonocitari.
2. Monocitopenie: <100/µL (conditie extrem de rara):
Tratament cu prednison (tranzitoriu).
Leucemia cu celule paroase.
Infectii severe care determina si neutropenie. Infectie HIV.
Anemie aplastica
Formula leucocitară:
Never (neutrofile)
Let (limfocite)
Monkeys (monocite)
Eat (eozinofile)
Bananas (bazofile)
VSH-ul reprezinta rata la care sedimenteaza hematiile dintrto proba de sange anticoagulat intrto
ora. Cu cat hematiile sedimenteaza mai repede, cu atat VSH-ul este mai mare, fiind un indicator
de raspuns de faza acuta. O crestere a VSH-ului apare la cel putin 24 ore dupa initierea
raspunsului inflamator, iar dupa incheierea raspunsului de faza acuta scade cu un timp de
injumatatire de 96-144 ore.
In comparatie cu CRP si amiloidul A seric, VSH-ul este crescut si in situatiile in care se produce
cresterea concentratiei imunoglobulinelor, complexelor imune si altor proteine.
Indicatii
-Test screening in suspiciunea de reactii inflamatorii, infectii, boli autoimune, discrazii
plasmocitare.
-Monitorizarea evolutiei si tratamentului in anumite boli: arterita temporala, polimialgie
reumatica, artrita reumatoida, reumatism articular acut, lupus eritematos sistemic, boala
Hodgkin, tuberculoza, endocardita bacteriana.
-Diagnosticul arteritei temporale, polimialgiei reumatice.
VSH-ul nu este un test diagnostic pentru o anumita boala si nu trebuie utilizat pentru
screeningtul pacientilor asimptomatici
Pregatire pacient - à jeun/postprandial; o masa lipidica poate determina alterari plasmatice
Specimen recoltat – sange venos.
Recipient de recoltare – vacutainer cu citrat de sodiu 3.8% tamponat sau vacutainer cu EDTA
K3 (pentru metoda microfotometrica capilara).
Cantitate recoltata – cat permite vacuumul; raportul sange/anticoagulant trebuie sa fie 4/13.
Cauze de respingere a probei – cantitate insuficienta, specimen coagulat, specimen hemolizat.
Stabilitate proba
2 ore la temperatura camerei (18t26°C): testul ar trebui efectuat la cel mult 2 ore dupa recoltare.
Daca este ratata citirea la 1 ora, sangele nu poate fi remixat si refolosit pentru VSH. Testul
trebuie efectuat la temperatura camerei.
Metode
1.Metoda manuala Westergren: se aseaza tubul in pozitie verticala intr-un suport gradat
milimetric si se citeste nivelul de sedimentare a hematiilor in mm dupa 1 ora; in unele teste este
citit rezultatul si dupa un interval de 2 ore, dar acesta nu furnizeaza informatii suplimentare.
Principiu. În sângele recoltat pe anticoagulant, lasat în repaus, se produce separarea plasmei de
elementele figurate care sedimenteaza, în virtutea gravitatiei
În sângele circulant elementele figurate se gasesc în suspensie, dispersate în plasma.
Mentinerea hematiilor în suspensie si implicit valorile V.S.H.-ului sunt determinate de:
• Factori globulari:
- încarcatura electronegativa a eritrocitelor, care determina respingerea acestora;
- vâscozitatea sângelui conditionata de masa eritrocitara; astfel scaderea numarului de
hematii (anemie) determina accelerarea V.S.H.-ului, iar cresterea numarului de
eritrocite (poliglobulie) determina scaderea V.S.H.-ului.
• Factori plasmatici:
- raportul albumine/globuline. Albuminele, care prezinta un grad mare de disociere
ionica, determina cresterea numarului de sarcini electronegative care se opun
sedimentarii. În schimb, globulinele si fibrinogenul, cu un grad de disociere ionica
mult mai redus, favorizeaza sedimentarea. Astfel, scaderea raportului
albumine/globuline fie prin scaderea concentratiei de albumine, fie prin cresterea
concentratiei de globuline sau fibrinogen va accelera sedimentarea si va creste
valoarea V.S.H.-ului.
- cresterea fibrinogenului plasmatic favorizeaza sedimentarea prin fenomenul de
pseudoaglutinare.
Materiale necesare:
• seringa de 2 cm3 si ac de punctie venoasa;
• pipete Westergreen cu stativul corespunzator;
• citrat de sodiu 3,8%, solutie sterila;
• materiale necesare recoltarii sângelui prin punctie venoasa.
Tehnica
• se aspira în seringa solutie de anticoagulant cu care se clateste seringa, retinându-se 0,4ml;
• se punctioneaza vena, dupa dezinfectare, si se aspira sânge în seringa pâna la 2 ml;
• continutul seringii se amesteca prin cateva miscari de rasturnare;
• proba se trece apoi într-o eprubeta din care se aspira cu pipeta Westergreen pâna la diviziunea
0, astfel încât coloana de sânge sa fie continua;
• se plaseaza pipeta în stativ în pozitie perfect verticala;
• citirea se face dupa o ora, iar rezultatul se exprima în mm coloana de plasma separata de
eritrocite în decurs de o ora (mm/ora).
Valori normale:
• barbat: 1 – 10 mm/ora;
• femeie: 2 – 13 mm/ora;
• nou-nascut: 0,5 mm/ora (datorita poliglobuliei).
Variatii fiziologice:
• la femei, V.S.H.-ul creste în timpul menstruatiei;
• la femei, V.S.H.-ul creste în sarcina (mai ales în ultimele luni).
Variatii patologice:
• Cresterea V.S.H.-ului apare în boli infectioase sau inflamatorii (pneumonii, reumatism
articular acut, tuberculoza activa, septicemie, pielonefrite), în anemii, infarct miocardic,
leucemii, neoplasme, etc.
• Scaderea V.S.H.-ului apare în poliglobulii, etc.
Pentru a evita rezultatele eronate trebuie respectate urmatoarele conditii:
• sângele se recolteaza dimineata pe nemâncate
• determinarea se face imediat dupa recoltare (în primele 2-3 ore); conservarea sângelui,
creste V.S.H.-ul
• se utilizeaza ca anticoagulant citratul de sodiu deoarece oxalatul de sodiu creste V.S.H.-ul
• pozitia pipetei trebuie sa fie perfect verticala, înclinarea acesteia crescând V.S.H.-ul
• temperatura camerei trebuie sa fie cuprinsa între 20 si 27°C deoarece cresterea
temperaturii creste V.S.H.-ul
• sa se evite hemoliza
2.Metoda automata de citire VSH (cu ajutorul unui sistem de raze infrarosii).
3.Metoda microfotometrica capilara: masoara capacitatea de agregare a eritrocitelor (prima
etapa a sedimentarii) in prezenta aglomerinelor, la 37°C.
! Un VSH normal nu exclude o boala organica nontinflamatorie, disfunctie de organ/neoplazie
Valori critice -cresteri extreme ale VSH apar in limfoame, carcinoame maligne de colon/san,
mielom multiplu si artrita reumatoida.
VSH >100 mm/h apare in: metastaze, boli renale (in special cele cu azotemie), infectii severe
(osteomielita, endocardita bacteriana subacuta), polimialgie reumatica.
Reactii citochimice
Citochimia se bazeaza pe studiul microscopic al componentilor chimici celulari: nucleoproteine,
proteine, hidrati de carbon, lipide si enzime.
Coloratiile citochimice ofera informatii in legatura cu linia celulara si diferentierea celulelor
hematopoietice si joaca un rol important in evaluarea anomaliilor hematologice, in special in
diagnosticul diferential si clasificarea bolilor maligne ale sangelui.
Recomandari pentru determinarea PAS
-diagnosticul leucemiei acute limfoblastice (LAL) subtipurile L1 si L2;
- diagnosticul de sindrom mielodisplazic ori LAM-M6 prin evidentierea eritroblastilor PAS-
pozitivi;
- diferentierea celulelor Gaucher si a histiocitelor cu granule „albastre ca marea” de alte tipuri de
macrofage.
Pregatire pacient -à jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese).
Specimen recoltat
a) sange capilar si/sau aspirat medular – frotiuri
b) se recomanda recoltarea simultana de sange venos pentru hemograma.
Metoda : examinare microscopica
DETERMINARE GRUP SANGUIN ABO - Sistemul antigenic ABO se refera la prezenta sau
absenta antigenelor A sau B de pe membrana eritrocitelor (globulele rosii). Exista trei gene alele
in sistemul ABO (A, B si O) cu transmitere mendeliana; A si B sunt alele codominante, iar O
este o alela recesiva. Aceste trei gene determina patru fenotipuri: O. A, B si AB. Toti indivizii
imunocompetenti produc anticorpi naturali (izoaglutinine sau izohemolizine) fata de antigenele
de grup ABO. Nou-nascutii nu au de obicei o cantitate semnificativa de anti-A si anti-B in
plasma, cu exceptia celor nascuti din mame aloimunizate, la care pot fi prezenti in circulatie
anticorpi IgG de la mama care au traversat placenta. Anticorpii ABO nu reprezinta o cauza
majora de boala hemolitica a nou-nascutului: hemoliza poate fi luata in calcul daca mama este
grup O, cu copil grup A sau AB. Investigatia este recomadata inaintea unei transfuzii, inaintea
unei proceduri invazive sau chirurgicale potential asociate cu complicatii hemoragice care ar
putea necesita transfuzii, monitorizarea imunohematologica antepartum si postnatala a mamei si
copilului, la donatorii de sange, pentru compatibilitatea de grup ABO in transplantul de rinichi si
inima.
Retractia cheagului reprezinta ultima etapa a coagularii in care cheagul se retracta eliminand o
mare parte din ser, fenomen care rezulta in consolidarea trombusului si posibil in favorizarea
vindecarii plagii.
Pregatire pacient - à jeun (pe nemancate).
Specimen recoltat – sange venos, recoltat in vacutainer fara anticoagulant
Se recomanda recoltarea simultana de sange venos pentru determinarea numarului de trombocite,
in vacutainer cu EDTA K3 (capac mov/roz).
Metoda -manuala, conform tehnicilor de lucru din laborator.
Dupa coagulare ,cheagul de fibrina se retracta expulzand serul .In mod normal ,dupa 3
ore,cantitatea de ser reprezinta 30-50 % din volumul total al sangelui .Retractia cheagului este in
functie de cantitatea si calitatea trombocitelor .Este intarziata in trombopenii;in trombopenii
severe ,cheagul nu se retracta nici dupa 24 ore la 37 ◦
Timpul de protrombina (PT)-Timpul Quick evalueaza activitatea factorilor implicati pe
calea ”extrinseca” si “comuna” a coagularii : FVII-proconvertina, FX-factorul Stuart-Prower,
FV-proaccelerina, FII-protrombina si FI-fibrinogenul.
PT evalueaza atat activitatea factorilor de coagulare dependenti de vitamina K (mai putin FIX),
a factorului V si a fibrinogenului, cat si functia de sinteza proteica a ficatului, cu implicatii
diagnostice si terapeutice
Recomandari pentru efectuarea testului
• PT este testul cel mai comun utilizat pentru monitorizarea terapiei anticoagulante orale
(sintron ,trombostop), acesta fiind sensibil la trei din cei patru factori de coagulare dependenti de
vitamina K
• screeningul deficientelor congenitale sau dobandite ale factorilor II, V, VII, X si fibrinogenului;
• disfibrinogenemii;
• prezenta inhibitorilor fata de factorii de coagulare;
• deficit de vitamina K;
• monitorizarea functiei de sinteza proteica a ficatului;
• screeningul preoperator al hemostazei.
Pregatire pacient - à jeun (pe nemancate).
Specimen recoltat - sange venos.
Recipient de recoltare – vacutainer cu citrat de Na 0.105M (raport citrat de sodiu – sange=1/9).
Presiunea realizata de garou trebuie sa fie intre valoarea presiunii sistolice si cea a presiunii
diastolice si nu trebuie sa depaseasca 1 minut. Daca punctia venoasa a esuat, o noua tentativa pe
aceeasi vena nu se poate face decat dupa 10 minute.
Cantitate recoltata - cat permite vacuumul; pentru a preveni coagularea partiala a probei se va
asigura amestecul corect al sangelui cu anticoagulantul, prin miscari de inversiune a tubului (5-6
inversiuni blande).
Cauze de respingere a probei -vacutainer care nu este plin (cel putin 90%); proba hemolizata
sau coagulata, proba recoltata in alt tub decat cu citrat .
Prelucrare necesara dupa recoltare - proba va fi centrifugata 15 minute la 2500tur.
Stabilitate proba - proba este stabila 8 ore la temperatura camerei (dupa 8 ore incepe inactivarea
factorilor V si VIII);
Metoda – coagulometrica.
Exprimarea rezultatelor
– ca timp de coagulare – in secunde;
– ca procent (%) din activitatea normala = activitatea protrombinica (AP); domeniul
masurabil = 10-100%;
– ca raport protrombinic (PR=PT pacient in sec/PT plasma normala in sec);
-ca INR (International Normalized Ratio).
Activitatea protrombinica (AP) = TQ martor/TQ bolnav X 100 - valori normale: 70%-
120%
INR (international normalised ratio) = TQ bolnav/TQ martor – valori normale: 0.9-1.2
Interpretarea AP (activitatii protrombinice)
AP = 50-60% - prudenta -risc de sangerare prelungita la manevre parenterale (punctii
venoase/arteriale, in.j IM)
AP = 40%- risc crescut de sangerare la manevre parenterale ; se contraindica punctii, biopsii,
extractii dentare.
AP =30% - reprezinta limita terapeutica pentru tratamentul cu ACO.
AP = sub 30% risc crescut de singerare spontana (in special AP=10%)
A. Tehnica Lee-White
valori normale : 6-12 minute
punctie venoasa ; recoltarea a 1-2 ml sg. in eprubeta de sticla cu mentinerea la 37 grade
Celsius
se masoara timpul pana cand eprubeta poate fi rasturnata fara ca sangele sa curga.
cheagul se poate urmari la intervale diferite pina la 24 ore urmarindu-se retractia cheagului si
fibrinoliza.
B. Tehnica Millan
valori normale : 10-12 minute
utila cind nu se poate realiza punctia venoasa (copii, soc hipovolemic, etc.) ; se inteapa pulpa
degetului
se lasa o picatura de sange sa cada liber peste o picatura de ser fiziologic pe o lama de sticla
se masoara timpul pana cand picatura de sange nu se mai deformeaza la inclinarea lamei
APTT (Testul de tromboplastina partial activata)este un test functional care evalueaza “calea
intrinseca”
Recomandari pentru efectuarea testului
-detectarea deficientelor congenitale sau dobandite ale factorilor de coagulare mentionati mai
sus; suspiciunea de hemofilie sau boala von Willebrand;folosit in monitorizarea terapiei cu
heparina.
Observatii: deficitul de factor XII, prekalikreina sau HK nu se insoteste clinic de manifestari
hemoragice. Pe de alta parte, aproximativ 95% din sindroamele hemoragice congenitale se
insotesc de prelungirea aPTT.
-monitorizarea tratamentului cu heparina nefractionata si inhibitori trombinici (hirudin,
argatroban);
-suspectarea prezentei de inhibitori factortspecifici sau nespecifici ai coagularii (ex.
anticoagulant lupic).
Observatie: prezenta anticoagulantilor lupici se asociaza cu tendinta clinica spre tromboza si nu
cu hemoragie.
-evaluarea preoperatorie a riscului hemoragic.
Pregatire pacient - à jeun (pe nemancate).
In heparinoterapie, proba se recolteaza cu o ora inainte de urmatoarea administrare. Nu se
recolteaza proba de pe un cateter heparinizat.
Specimen recoltat - sange venos.
Recipient de recoltare – vacutainer cu citrat de Na 0.105M (raport citrat de sodiu – sange=1/9).
Presiunea realizata de garou trebuie sa fie intre valoarea presiunii sistolice si cea a presiunii
diastolice si nu trebuie sa depaseasca 1 minut. Daca punctia venoasa a esuat, o noua tentativa pe
aceeasi vena nu se poate face decat dupa 10 minute.
Cantitate recoltata -cat permite vacuumul; pentru a preveni coagularea partiala a probei se va
asigura amestecul corect al sangelui cu anticoagulantul, prin 5-6 miscari blande de inversiune a
tubului.
Cauze de respingere a probei - vacutainer care nu este plin (cel putin 90%); proba intens
hemolizata, coagulata sau recoltata in alt tub decat cu citrat
Prelucrare necesara dupa recoltare - proba va fi centrifugata 15 minute la 2500 tur.
Stabilitate proba – proba este stabila 4 ore la temperatura camerei (stabilitatea se reduce la 2 ore
in cazul pacientilor aflati sub heparinoterapie
Metoda – coagulometrica.
Exprimarea rezultatelor - in secunde; domeniul masurabil: 20-40s.
Valori de referinta
-normal: 26-40s
-interval terapeutic: in cursul heparinoterapiei: 1.5-2.5 ori valoarea nivelului de control.
Heparina administrata intravenos potenteaza efectul inhibitor al antitrombinei asupra factorilor
XII, XI, IX, X si II (efectul se exercita mai ales asupra factorilor Xa si a trombinei). Efectul
anticoagulant apare imediat. Deoarece timpul de injumatatire al heparinei este de 3 ore, proba de
sange pentru APTT se recolteaza la 3 ore dupa sau cu o ora inainte de administrarea heparinei.
Valori critice – APTT >70s (risc de sangerare spontana).
Interpretarea rezultatelor
Prelungirea APTT: toate deficitele congenitale ale caii intrinseci (inclusiv hemofilia A si B,
boala von Willebrand), tratament cu heparina nefractionata, inhibitori trombinici (hirudin,
argatroban), streptokinaza, urokinaza, tratament cu anticoagulante orale, deficit de vitamina K,
malnutritie, hipofibrinogenemie, afectiuni hepatice, CID, prezenta produsilor de degradare a
fibrinei, prezenta anticoagulantilor circulanti factortspecifici (sunt observati cel mai adesea la
5t10% din pacientii cu hemofilie ca antitfactor VIII sau antitfactor IX; de asemenea Ac
antitFVIII pot aparea la varstnici sau in sarcina) sau nespecifici – anticoagulantii lupici (primari
sau secundari in: LES si alte boli autoimune, boli maligne, ca reactie la medicamente, dupa
transfuzii multiple, in tuberculoza, glomerulonefrita cronica).
Rezultatele APTT se coroboreaza cu valorile PT:
-PT normal cu APTT prelungit: sugereaza deficitul HK, prekalikreinei sau unuia din factorii
VIII, IX, XI si/sau XII.
-PT prelungit cu APTT normal: sugereaza un posibil deficit de factor VII. FVII avand un timp de
injumatatire scurt comparativ cu factorii dependenti de vitamina K ai caii intrinseci, deficientele
nutritionale sau terapeutice ale factorilor dependenti de vitamina K pot determina uneori PT
prelungit cu aPTT normal.
-PT si APTT prelungite: sugereaza deficitul unuia din factorii I, II, V sau X.
Scurtarea APTT: poate aparea in cazul unor nivele crescute ale unui singur factor, cel mai
adesea FVIII, in neoplasme diseminate (mai putin cand este afectat ficatul), imediat dupa o
hemoragie acuta, in stadiile initiale ale CID.
In timp ce valori prelungite ale APTT sugereaza o boala hemoragica, un APTT scurtat sta
dovedit a fi un predictor independent pentru un risc crescut de deces, tromboza, hemoragie si
morbiditate.
Limite si interferente
-APTT depinde de varsta pacientului: la noutnascuti limita superioara a APTT este prelungita
pana la 55s si scade treptat la nivelul de la adulti pana la varsta de 6 luni; valori prelungite ale
aPTT la copiii sanatosi se datoreaza unei combinatii de reduceri usoare ale mai multor proteine
coagulante. La varstnici APTT poate fi scurtat.
-Plasma hemolizata scurteaza APTT la pacientii neheparinizati, dar nu si la cei heparinizati.
-La pacientii heparinizati, centrifugarea si separarea plasmei trebuie facute cat mai repede (intr-o
ora) pentru a evita pe cat posibil inactivarea heparinei de catre trombocite.
-Valori ale hematocritului foarte mari sau foarte mici, vacutainere recoltate insuficient, prin
modificarea raportului sangetcitrat pot interfera cu testul.
-Recoltarea probei pe cateter venos central pe care a fost administrata solutie hipertona de NaCl
va prelungi PT si aPTT.
-Probele intens lipemice pot interfera cu mecanismul analizorului de detectie a formarii
cheagului.
Testul Koller
efectuat cind se suspicioneaza un deficit de vit. K
se efectueaza TQ initial,
apoi se administreaza vit. K - 10 mg i.m/zi. 3 zile consecutiv
se repeta TQ : corectarea cu peste 15% din valoarea initiala = > deficit de vitamina K
EXPLORAREA TIMPULUI VASCULO-PLACHETAR
Teste de trombofilie